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BCA 蛋白定量是通过比色检测进行总蛋白质定量的常用方法。相比基于考马斯染料的定量方法(Bradford 法定量),Pierce BCA 蛋白定量试剂具有独特的优势,因为它们可以兼容含有多达 5% 表面活性剂(去垢剂)的蛋白样品,并且受蛋白组成差异的影响小得多,从而具有更高的蛋白间均一性。
最新推出的内含免稀释蛋白标准品的 BCA 蛋白定量试剂盒最多可将实验时间缩短80%。免稀释蛋白标准品是一组与排枪兼容的预稀释标准品,使您可以轻松地将稀释好的标准品一步转移到微孔板中。
免稀释Rapid Gold BCA 快速蛋白定量 | BCA 蛋白定量(内含免稀释标准品) | BCA 蛋白定量—还原剂兼容型 | 微量 BCA 蛋白定量 | |
---|---|---|---|---|
定量范围: (样品体积) | 20 至 10000 µg/mL (10 µL) | 20 至 2000 µg/mL (25 µL) | 125 至 2000 µg/mL (9 µL) | 2 至 40 µg/mL (150 µL)或 0.5 至 20 µg/mL (500 µL) |
孵育时间和温度 | 室温下 5 分钟 | 37°C 下 30分钟 | 37°C 下 45分钟 | 60°C 下 60分钟 |
总检测时间 | 10 min | 45 min | 115 min | 130 min |
吸光值 | 480 nm | 562 nm | 562 nm | 562 nm |
可兼容 | 去垢剂 | 去垢剂 | 去垢剂/还原剂(例如 DTT) | 去垢剂 |
不兼容 | 还原剂;螯合剂 | 还原剂;螯合剂 | 螯合剂 | 还原剂;螯合剂 |
均一性 | 蛋白间差异较考马斯染料法的更小 | 蛋白间差异较考马斯染料法的更小 | 蛋白间差异较考马斯染料法大幅(14-23%)减小 | 与BCA法、染料结合法或Lowry法相比,蛋白间差异更小 |
免稀释蛋白标准品 | 内含 | 内含 | 不含 | 不含 |
货号 | A55860 (500 mL) A55861 (250 mL) | A55864 (1000 mL) A55865 (500 mL) 经典BCA试剂盒: 23225 (1000 mL) 23227 (500 mL) A65453 (100 mL) | 23250 (适合单管) 23252 (适合微孔板) | 23235 (500 mL/kit) |
相关产品:Pierce™ 免稀释™ BSA 蛋白标准品(可搭配排枪使用), 0.125–2 mg/mL 相关产品:Pierce™ 免稀释™ BSA 蛋白标准品(可搭配排枪使用), 0.125–10 mg/mL |
热门BCA 蛋白定量试剂盒现自带免稀释 BSA 蛋白标准品——7个浓度的预稀释BSA标准品,专为排枪设计。
Pierce 免稀释蛋白定量产品可大幅减少传统定量实验中繁琐的稀释操作,并使用来自美国国家标准与技术研究院 (NIST) 的纯化 BSA进行校准,以确保标准曲线的准确性。
Pierce BCA 蛋白定量试剂通过在碱性环境中用蛋白质将 Cu+ 还原为 Cu+(广为人知的双缩脲反应),然后通过二辛可宁酸(BCA)对亚铜阳离子(Cu+)进行高灵敏度和高选择性的比色检测。
图 1.第一步:将铜与碱性环境中的蛋白质螯合,形成蓝色复合物。在此反应中,含有三个或三个以上氨基酸残基的肽与含酒石酸钠钾的碱性环境中的二价铜离子形成有色螯合物。
单个氨基酸和二肽在双缩脲反应中不受影响,但三肽以及更大的多肽或蛋白质会发生反应,产生吸收峰位于 540 nm 的淡蓝色至篮紫色复合物。一个二价铜离子与附近四到六个多肽结合形成有色螯合物。产生的颜色强度与参与反应的肽键数目成正比。
图 2.第二步:BCA 试剂是一种高灵敏度、高选择性的比色检测试剂,与第一步形成的亚铜阳离子(Cu+)反应,产生紫色。
BCA– 铜复合物是水溶性的,在 562 nm 处具有强线性吸收,吸收度随蛋白浓度增加而升高。在 550 至 570 nm 波长范围内,可对紫色进行测量,此范围内信号丢失最小(少于10 %)。BCA 试剂产生的信号约比使用双缩脲试剂产生的信号灵敏100 倍(检测下限更低)。
Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂采用与经典 BCA 定量试剂相同的铜离子还原法,并含有独特的铜螯合剂。在显色反应的第二步中,Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 螯合剂与第一步还原产生的亚铜阳离子(Cu+ )反应,产生一种深金色反应产物。此铜复合物随着蛋白浓度的增加,在 480 nm 波长处表现出强烈的线性吸光度。
免稀释 BSA 蛋白标准品可单独购买,部分热门BCA蛋白定量试剂盒里面已内含免稀释标准品。 与 Bradford法或 Pierce BCA Protein Assay 试剂盒相比,免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒无需稀释样品和标准品,从而可将实验时间减少高达 80%。 此外,它只需要 5 分钟的室温孵育。 经典BCA试剂盒也有内含免稀释 BSA 蛋白标准品的版本—— Pierce 免稀释BCA Protein Assay 试剂盒。
图 3. 与其他蛋白质检测相比,Pierce 免稀释Rapid Gold BCA蛋白定量试剂盒最高可将实验时间缩短 80%。 按照说明书中的方案在微孔板中进行实验。 样品共10个:5个细胞裂解物样品、5个纯化蛋白样品。 BCA 和 Bradford 法的标准曲线是通过连续稀释 2 mg/mL 牛血清白蛋白 (BSA) 标准品生成的。 Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒的标准曲线是使用内含的兼容排枪的Pierce 免稀释 BSA 蛋白标准品生成的。 十个样品中的四个预计起始浓度 > 2 mg/mL,因此BCA 和 Bradford 法需要进行样品稀释,但免稀释Rapid Gold BCA 试剂盒不需要稀释样品。 然后将样品与各个试剂盒的工作试剂混合并按照说明书进行孵育。
BCA 法定量的主要优点之一是它可产生一条线性响应曲线。此响应曲线有助于准确测定未知蛋白的浓度,并具有比其他常规定量方法更宽的动态范围。
图 4. Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒可在宽动态范围 (0–10 mg/mL) 内生成线性标准曲线。 使用溶于0.9% 生理盐水中的纯化 BSA (0–10 mg/mL) 为 Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒和Quick Start Bradford 蛋白定量试剂盒 (Bio-Rad) 制作标准曲线。 两种方法均按照说明书中的方案在微孔板中进行实验。 使用 Thermo Scientific Varioskan LUX 多功能酶标仪读取吸光度数据。
BCA 法蛋白定量的另一个主要优点是蛋白间差异较低。蛋白的组成和结构具有高多样性,在一些检测中,蛋白在氨基酸序列、等电点( pI )、二级结构和侧链或辅基上的差异会导致比色响应的差异。由于蛋白间差异较低,BCA 蛋白定量方法能够更准确地测定未知样品的蛋白浓度。
图 5. Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒和Quick Start Bradford 蛋白定量试剂盒的实验结果与样品的已知浓度对比。两种方法均按照说明书中的方案在微孔板中进行实验。对于 Bradford 法,将 5 μL 样品添加到 250 μL Bradford 工作试剂中,并在室温下孵育 5 分钟。 对于免稀释Rapid Gold BCA 法,将10 μL 样品添加到200 μL 免稀释Rapid Gold BCA 工作试剂中,并在室温下孵育5 分钟。 蛋白样品的已知浓度信息来自厂家,并通过 280 nm 处的吸光度进行确认。
Pierce BCA 蛋白定量试剂产生线性响应曲线(R2 > 0.95),可根据检测未知样品蛋白浓度所需的动态范围,选用两种不同的方案进行检测。标准 Pierce BCA 蛋白定量试剂使用双组分系统检测 20 至 2000 μg/mL 的蛋白质浓度:试剂 A 是含有 BCA 试剂的碳酸盐缓冲液,试剂 B 是一种硫酸铜溶液,两者结合制成一种苹果绿色的工作溶液,在蛋白存在的情况下,30 分钟后在 37℃ 下变成紫色。由于颜色反应不是真正的终点反应,Pierce BCA 蛋白定量具有相当大的实验方案灵活性。可以通过增加孵育温度提高检测的灵敏度。使用增强型试管方案(即在 60°C 下孵育 30 分钟)时,检测工作范围变化为 5–250 μg/mL,可实现稀释蛋白样品的准确定量。
图 6. BCA 蛋白定量试剂盒(内含免稀释标准品)搭配排枪进行蛋白定量实验。
该比色测定法延续了 BCA 定量的高灵敏度和线性度,极大缩短孵育时间,可以更快地进行标准 BCA 定量操作。该方法可在室温下于 5 分钟内完成孵育,无需长时间等待或者将样品置于高温下。
图 7. 免稀释 Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒实验方案。
改良型 Lowry 蛋白定量试剂盒 | |
---|---|
定量范围:微孔板(样品体积) | 10至 1500 µg/mL (40 µL) |
定量范围:比色皿 (样品体积) | 1–1500 µg/mL (200 µL) |
孵育时间和温度 | 室温下 10 和 30 分钟 |
总检测时间 | 110 min |
吸光值 | 750 nm |
可兼容 | SDS(高达 1% ) |
不兼容 | 还原剂、螯合剂、去垢剂、tris、tricine、丙三醇 |
均一性 | 蛋白间差异较考马斯染料法的更小 |
产品规格 | 530 mL/试剂盒 |
货号 | 23240 |
Pierce 改良版 Lowry 蛋白定量试剂是基于 1951 年奥利弗·豪·洛瑞(Oliver H. Lowry)提出的比色法研发而成的。Pierce 改良版定量试剂使用一种稳定的试剂替代了两种不稳定的传统试剂。
Pierce 改良版 Lowry 蛋白定量试剂是一种基于铜螯合反应的增强型双缩脲检测。其显色原理与 Pierce BCA 法蛋白定量相似,但两者之间有几个显著的区别。尽管尚不完全清楚使用 Pierce 改良版 Lowry 蛋白定量试剂进行显色的精确机制,但已知该反应有两个明确的步骤。首先,蛋白与碱性硫酸铜在酒石酸盐存在的情况下发生反应,在室温下孵育 10 分钟。在孵育过程中,由四个肽键和一个铜原子形成淡蓝色的四配位基铜复合物(即“双缩脲反应”)。孵育后,加入福林酚试剂。通常认为当四齿铜螯合物向磷-磷钨酸复合物转移电子时将导致颜色变深。这种反应产生的磷 - 磷钨酸复合物的颜色将呈深蓝色。
图 7.Pierce 改良版 Lowry 蛋白定量试剂盒的反应示意图。
图 8.Pierce 改良版 Lowry 蛋白定量试剂盒的实验方案
免稀释Rapid Gold BCA 快速蛋白定量 | BCA 蛋白定量(内含免稀释标准品) | BCA 蛋白定量—还原剂兼容型 | 微量 BCA 蛋白定量 | |
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定量范围: (样品体积) | 20 至 10000 µg/mL (10 µL) | 20 至 2000 µg/mL (25 µL) | 125 至 2000 µg/mL (9 µL) | 2 至 40 µg/mL (150 µL)或 0.5 至 20 µg/mL (500 µL) |
孵育时间和温度 | 室温下 5 分钟 | 37°C 下 30分钟 | 37°C 下 45分钟 | 60°C 下 60分钟 |
总检测时间 | 10 min | 45 min | 115 min | 130 min |
吸光值 | 480 nm | 562 nm | 562 nm | 562 nm |
可兼容 | 去垢剂 | 去垢剂 | 去垢剂/还原剂(例如 DTT) | 去垢剂 |
不兼容 | 还原剂;螯合剂 | 还原剂;螯合剂 | 螯合剂 | 还原剂;螯合剂 |
均一性 | 蛋白间差异较考马斯染料法的更小 | 蛋白间差异较考马斯染料法的更小 | 蛋白间差异较考马斯染料法大幅(14-23%)减小 | 与BCA法、染料结合法或Lowry法相比,蛋白间差异更小 |
免稀释蛋白标准品 | 内含 | 内含 | 不含 | 不含 |
货号 | A55860 (500 mL) A55861 (250 mL) | A55864 (1000 mL) A55865 (500 mL) 经典BCA试剂盒: 23225 (1000 mL) 23227 (500 mL) A65453 (100 mL) | 23250 (适合单管) 23252 (适合微孔板) | 23235 (500 mL/kit) |
相关产品:Pierce™ 免稀释™ BSA 蛋白标准品(可搭配排枪使用), 0.125–2 mg/mL 相关产品:Pierce™ 免稀释™ BSA 蛋白标准品(可搭配排枪使用), 0.125–10 mg/mL |
热门BCA 蛋白定量试剂盒现自带免稀释 BSA 蛋白标准品——7个浓度的预稀释BSA标准品,专为排枪设计。
Pierce 免稀释蛋白定量产品可大幅减少传统定量实验中繁琐的稀释操作,并使用来自美国国家标准与技术研究院 (NIST) 的纯化 BSA进行校准,以确保标准曲线的准确性。
Pierce BCA 蛋白定量试剂通过在碱性环境中用蛋白质将 Cu+ 还原为 Cu+(广为人知的双缩脲反应),然后通过二辛可宁酸(BCA)对亚铜阳离子(Cu+)进行高灵敏度和高选择性的比色检测。
图 1.第一步:将铜与碱性环境中的蛋白质螯合,形成蓝色复合物。在此反应中,含有三个或三个以上氨基酸残基的肽与含酒石酸钠钾的碱性环境中的二价铜离子形成有色螯合物。
单个氨基酸和二肽在双缩脲反应中不受影响,但三肽以及更大的多肽或蛋白质会发生反应,产生吸收峰位于 540 nm 的淡蓝色至篮紫色复合物。一个二价铜离子与附近四到六个多肽结合形成有色螯合物。产生的颜色强度与参与反应的肽键数目成正比。
图 2.第二步:BCA 试剂是一种高灵敏度、高选择性的比色检测试剂,与第一步形成的亚铜阳离子(Cu+)反应,产生紫色。
BCA– 铜复合物是水溶性的,在 562 nm 处具有强线性吸收,吸收度随蛋白浓度增加而升高。在 550 至 570 nm 波长范围内,可对紫色进行测量,此范围内信号丢失最小(少于10 %)。BCA 试剂产生的信号约比使用双缩脲试剂产生的信号灵敏100 倍(检测下限更低)。
Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂采用与经典 BCA 定量试剂相同的铜离子还原法,并含有独特的铜螯合剂。在显色反应的第二步中,Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 螯合剂与第一步还原产生的亚铜阳离子(Cu+ )反应,产生一种深金色反应产物。此铜复合物随着蛋白浓度的增加,在 480 nm 波长处表现出强烈的线性吸光度。
免稀释 BSA 蛋白标准品可单独购买,部分热门BCA蛋白定量试剂盒里面已内含免稀释标准品。 与 Bradford法或 Pierce BCA Protein Assay 试剂盒相比,免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒无需稀释样品和标准品,从而可将实验时间减少高达 80%。 此外,它只需要 5 分钟的室温孵育。 经典BCA试剂盒也有内含免稀释 BSA 蛋白标准品的版本—— Pierce 免稀释BCA Protein Assay 试剂盒。
图 3. 与其他蛋白质检测相比,Pierce 免稀释Rapid Gold BCA蛋白定量试剂盒最高可将实验时间缩短 80%。 按照说明书中的方案在微孔板中进行实验。 样品共10个:5个细胞裂解物样品、5个纯化蛋白样品。 BCA 和 Bradford 法的标准曲线是通过连续稀释 2 mg/mL 牛血清白蛋白 (BSA) 标准品生成的。 Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒的标准曲线是使用内含的兼容排枪的Pierce 免稀释 BSA 蛋白标准品生成的。 十个样品中的四个预计起始浓度 > 2 mg/mL,因此BCA 和 Bradford 法需要进行样品稀释,但免稀释Rapid Gold BCA 试剂盒不需要稀释样品。 然后将样品与各个试剂盒的工作试剂混合并按照说明书进行孵育。
BCA 法定量的主要优点之一是它可产生一条线性响应曲线。此响应曲线有助于准确测定未知蛋白的浓度,并具有比其他常规定量方法更宽的动态范围。
图 4. Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒可在宽动态范围 (0–10 mg/mL) 内生成线性标准曲线。 使用溶于0.9% 生理盐水中的纯化 BSA (0–10 mg/mL) 为 Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒和Quick Start Bradford 蛋白定量试剂盒 (Bio-Rad) 制作标准曲线。 两种方法均按照说明书中的方案在微孔板中进行实验。 使用 Thermo Scientific Varioskan LUX 多功能酶标仪读取吸光度数据。
BCA 法蛋白定量的另一个主要优点是蛋白间差异较低。蛋白的组成和结构具有高多样性,在一些检测中,蛋白在氨基酸序列、等电点( pI )、二级结构和侧链或辅基上的差异会导致比色响应的差异。由于蛋白间差异较低,BCA 蛋白定量方法能够更准确地测定未知样品的蛋白浓度。
图 5. Pierce 免稀释Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒和Quick Start Bradford 蛋白定量试剂盒的实验结果与样品的已知浓度对比。两种方法均按照说明书中的方案在微孔板中进行实验。对于 Bradford 法,将 5 μL 样品添加到 250 μL Bradford 工作试剂中,并在室温下孵育 5 分钟。 对于免稀释Rapid Gold BCA 法,将10 μL 样品添加到200 μL 免稀释Rapid Gold BCA 工作试剂中,并在室温下孵育5 分钟。 蛋白样品的已知浓度信息来自厂家,并通过 280 nm 处的吸光度进行确认。
Pierce BCA 蛋白定量试剂产生线性响应曲线(R2 > 0.95),可根据检测未知样品蛋白浓度所需的动态范围,选用两种不同的方案进行检测。标准 Pierce BCA 蛋白定量试剂使用双组分系统检测 20 至 2000 μg/mL 的蛋白质浓度:试剂 A 是含有 BCA 试剂的碳酸盐缓冲液,试剂 B 是一种硫酸铜溶液,两者结合制成一种苹果绿色的工作溶液,在蛋白存在的情况下,30 分钟后在 37℃ 下变成紫色。由于颜色反应不是真正的终点反应,Pierce BCA 蛋白定量具有相当大的实验方案灵活性。可以通过增加孵育温度提高检测的灵敏度。使用增强型试管方案(即在 60°C 下孵育 30 分钟)时,检测工作范围变化为 5–250 μg/mL,可实现稀释蛋白样品的准确定量。
图 6. BCA 蛋白定量试剂盒(内含免稀释标准品)搭配排枪进行蛋白定量实验。
该比色测定法延续了 BCA 定量的高灵敏度和线性度,极大缩短孵育时间,可以更快地进行标准 BCA 定量操作。该方法可在室温下于 5 分钟内完成孵育,无需长时间等待或者将样品置于高温下。
图 7. 免稀释 Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂盒实验方案。
改良型 Lowry 蛋白定量试剂盒 | |
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定量范围:微孔板(样品体积) | 10至 1500 µg/mL (40 µL) |
定量范围:比色皿 (样品体积) | 1–1500 µg/mL (200 µL) |
孵育时间和温度 | 室温下 10 和 30 分钟 |
总检测时间 | 110 min |
吸光值 | 750 nm |
可兼容 | SDS(高达 1% ) |
不兼容 | 还原剂、螯合剂、去垢剂、tris、tricine、丙三醇 |
均一性 | 蛋白间差异较考马斯染料法的更小 |
产品规格 | 530 mL/试剂盒 |
货号 | 23240 |
Pierce 改良版 Lowry 蛋白定量试剂是基于 1951 年奥利弗·豪·洛瑞(Oliver H. Lowry)提出的比色法研发而成的。Pierce 改良版定量试剂使用一种稳定的试剂替代了两种不稳定的传统试剂。
Pierce 改良版 Lowry 蛋白定量试剂是一种基于铜螯合反应的增强型双缩脲检测。其显色原理与 Pierce BCA 法蛋白定量相似,但两者之间有几个显著的区别。尽管尚不完全清楚使用 Pierce 改良版 Lowry 蛋白定量试剂进行显色的精确机制,但已知该反应有两个明确的步骤。首先,蛋白与碱性硫酸铜在酒石酸盐存在的情况下发生反应,在室温下孵育 10 分钟。在孵育过程中,由四个肽键和一个铜原子形成淡蓝色的四配位基铜复合物(即“双缩脲反应”)。孵育后,加入福林酚试剂。通常认为当四齿铜螯合物向磷-磷钨酸复合物转移电子时将导致颜色变深。这种反应产生的磷 - 磷钨酸复合物的颜色将呈深蓝色。
图 7.Pierce 改良版 Lowry 蛋白定量试剂盒的反应示意图。
图 8.Pierce 改良版 Lowry 蛋白定量试剂盒的实验方案
仅供科研使用,不可用于诊断目的。