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Bradford assay(考马斯亮蓝法)蛋白定量
基于Bradford考马斯亮蓝染料的蛋白定量
使用下表中的信息，为您的应用选择合适的Bradford法定量试剂盒。
 |  |  | |
| Bradford Plus蛋白定量（内含免稀释标准品） | 去垢剂兼容型 Bradford 法定量 | Coomassie（Bradford 法）蛋白定量 | |
|---|---|---|---|
| 优势 | 即用型，内含免稀释BSA标准品，缩短标准曲线耗时线性度更好，与其他品牌 Bradford 产品相比，蛋白质间的差异性可降低一半 | 升级款即用型 Bradford 定量试剂，，可兼容1％ 或更高浓度的常用去垢剂，包括 Triton X-100 和 NP-40 去垢剂 | 即用型，采用最初由 Bradford 在 1976 年研发的配方 |
| 检测线性范围（样品体积） | 125 -1,500 µg/mL (5 µL) 或者 1-25 µg/mL (150 µL) | 100 -1,500 µg/mL (10 µL) 或者 2-25 µg/mL (150 µL) | 100-1,500 µg/mL (20 µL) 或者 1-25 µg/mL (150 µL) |
| 兼容的试剂 | 缓冲盐，金属离子，还原剂，螯合剂 | 去垢剂，缓冲盐，金属离子，还原剂，螯合剂 | 缓冲盐，金属离子，还原剂，螯合剂 |
| 不兼容 | 去垢剂 | >5% 去垢剂 | 去垢剂 |
| 孵育时间 | 10 | 10 | 10 |
| 产品规格 | 950 mL/试剂盒 | 450 mL/试剂盒 | 950 mL/试剂盒 |
| 货号 | A55866 相关Bradfort Plus试剂盒 23236 | 23246 | 23200 |
| 相关产品：Pierce™ 免稀释™ BSA 蛋白标准品（可搭配排枪使用）, 0.125–2 mg/mL | |||
轻松、快速、准确
热门BCA 蛋白定量试剂盒现自带免稀释 BSA 蛋白标准品——7个浓度的预稀释BSA标准品，专为排枪设计。
Pierce 免稀释蛋白定量产品可大幅减少传统定量实验中繁琐的稀释操作，并使用来自美国国家标准与技术研究院 (NIST) 的纯化 BSA进行校准，以确保标准曲线的准确性。
Bradford 法定量原理
Marion Bradford 博士于 1976 年首次提出了使用考马斯 G-250 染料作为比色试剂对总蛋白进行检测和定量的方法。Pierce Coomassie Bradford 蛋白定量试剂盒是基于 Bradford 博士首先报道的试剂而优化。
Bradford 试剂, 基于考马斯的蛋白定量
在酸性环境中，蛋白质结合考马斯染料。这导致染料的最大吸收发生位移，从红棕色形式（最大吸收峰 465nm）转化为蓝色形式（最大吸收峰 610nm）。染料的两种形式在 595nm 处差异最大，因此 595nm 是测定考马斯染料-蛋白复合物的蓝色的最佳波长。如有必要，可以 575nm 到 615nm 之间的任意波长测量该染料的蓝色。在两个极端波长（575nm 和 615nm）下，与在 595 nm 处获得的颜色（吸光度）相比，测得的颜色量（吸光度）降低了大约 10％。基于考马斯染料的蛋白质检测法中，颜色的形成是与某些碱性氨基酸（主要是精氨酸、赖氨酸和组氨酸）有关。范德华力和疏水相互作用也影响染料-蛋白质的结合。结合到每个蛋白质分子上的考马斯染料分子数大致与蛋白所带正电荷的数量成正比。游离氨基酸、肽和低分子量蛋白质不会与考马斯染料试剂产生颜色。一般情况下，肽或蛋白质的质量必须大于 3,000 道尔顿才能被该试剂检出。在某些应用中，这是一个优点。
图 1.基于考马斯染料的 Bradford 蛋白检测的反应示意图：Pierce Coomassie（Bradford 法）蛋白检测, Pierce Coomassie Plus（Bradford 法）蛋白检测, 和 Pierce 去垢剂兼容的 Bradford 检测。
考马斯蛋白检测法的主要缺点是它们与常规用于溶解膜蛋白的表面活性剂浓度不兼容。通常，当样品中存在去垢剂时，即使浓度很低，也会导致该试剂形成沉淀。可以使用 去垢剂兼容型Bradford定量试剂来克服此限制。另外，Coomassie 染料试剂是强酸性的，所以酸溶解度较差的蛋白不能用该试剂来测定。最后，Coomassie 试剂导致的蛋白间差异性大约是基于铜螯合的检测试剂的两倍。
产品推荐
Bradford Plus蛋白定量试剂盒（内含免稀释标准品）
Bradford Plus蛋白定量试剂盒全新推出内含免稀释蛋白标准品的版本，不用稀释标准品、缩短标准曲线制作耗时。我们提供内含免稀释 BSA 蛋白标准品的 Bradford Plus 蛋白定量试剂盒，也可单独购买免稀释标准品、搭配任何 Pierce Bradford 试剂盒一起使用。
图 2. 使用Bradford Plus蛋白定量试剂盒（内含免稀释标准品）进行蛋白定量实验。
去垢剂兼容型 Bradford 检测
Pierce 去垢剂兼容型 Bradford 定量试剂盒是对众所周知的 Bradford考马斯染料结合比色法进行快速，即用的改进，用于总蛋白质定量。该配方与浓度高达 1％ 的常用去垢剂兼容。将 Pierce 去垢剂兼容型 Bradford 检测与 Bio-Rad Dc 蛋白检测进行比较，使用 Pierce 去垢剂兼容型 Bradford 定量（使用常规去垢剂）时，灵敏度更高。Pierce 去垢剂兼容型 Bradford 检测的标准曲线范围是 Bio-Rad DC 检测范围的 4 倍。
图 2.Bradford 蛋白定量 vs. Bio-Rad DC 蛋白定量每个定量检测均在微孔板上使用加有去垢剂或水（对照）的 BSA 标准品进行，并遵循制造商的说明。
| 优势 | Pierce去垢剂兼容型 Bradford 定量试剂盒 | Bio-Rad DC 蛋白定量试剂盒 |
|---|---|---|
| 检测（最大吸光度） | 595 nm | 750 nm |
| 无去垢剂标准品 | 包含 | 不含 |
| 试管检测样品体积 | 50 μL | 100 μL |
| 微孔板检测样品体积 | 10 μL | 5 μL |
| 检测工作范围 | 100-1,500 μg/mL | 200-1,500 μg/mL |
| 吸光值范围（灵敏度） | 高* | 低 |
| 试剂盒中的试剂种类 | 1 种试剂 | 3 种试剂 |
| 操作时间 | 10 分钟 | 30 分钟 |
| 孵育时间 | 10 分钟 | 15 分钟 |
| 总时间 | 20 分钟 | 45 分钟 |
表 1.比较 Pierce 去垢剂兼容型 Bradford 定量试剂盒与 Bio-Rad DC 蛋白定量试剂盒。
 | |
| Pierce 660 nm 蛋白定量试剂盒 | |
|---|---|
| 检测范围：微孔板（样品体积） | 25 至 2,000 µg/mL (65 µL) 或者 50 至 2,000 µg/mL (10 µL) |
| 孵育时间和温度 | 5 |
| 总检测时间 | 75 |
| 吸光值 | 660 nm |
| 兼容的试剂 | 还原剂，螯合剂，去垢剂 |
| 不兼容试剂 | 存在高浓度去垢剂或SDS时，需要添加离子去垢剂兼容试剂（IDCR） |
| 均一性 | 蛋白质间差异性小于 Coomassie（Bradford）检测 |
| 产品规格 | 450 mL/试剂盒 |
| 货号 | 22662 |
Pierce 660 nm 定量原理
Pierce 660 nm 定量试剂
Pierce 660nm 蛋白检测基于酸性条件下独特的染料-金属复合物与蛋白质的结合，这种结合会导致染料在 660 nm 处的最大吸收吸收发生位移。该染料-金属复合物为红褐色，在与蛋白结合后变为绿色。这种颜色的变化是由于染料在低 pH 值时的脱氢导致的，而蛋白内的带正电荷的氨基酸残基和带负电的染料-金属复合物的相互作用促进了这一过程。因此，该染料主要与蛋白质中的碱性残基（例如组氨酸，精氨酸和赖氨酸）相互作用，而与酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸相互作用程度相对较小。
即使在存在与 Bradford 和 BCA 蛋白检测不兼容的去垢剂和还原剂的情况下，检测中产生的颜色也很稳定并在很大范围内与蛋白质浓度成正比。可以将可选的 IDCR 添加到检测试剂中，以增加与大量离子去垢剂的相容性，从而可以测量含有 Laemmli SDS 样品缓冲液和溴酚蓝的样品。IDCR 通过彻底混合完全溶解，对检测没有任何影响。
图 3.660 nm 检测试剂-金属复合物的最大吸光度与所结合的 BSA 成正比。当试剂-金属复合物存在时，蛋白质在 660 nm 波长处产生明显的吸光度偏移。
使用 Pierce 660nm 蛋白检测试剂盒进行蛋白定量
Pierce 660 nm 检测试剂盒比基于考马斯的 Bradford 检测具有更出色的线性，并且与更高浓度的大多数去垢剂、还原剂和其他常用试剂兼容。附件的离子去垢剂兼容性试剂（IDCR）提供了更广泛的去垢剂兼容性，这使其成为唯一一种适用于含有 Laemmli SDS 样品缓冲液和溴酚蓝的样品的蛋白检测方法。尽管 Pierce 660 nm 蛋白检测产生的蛋白质间变异性比其他检测法（如 BCA 蛋白检测法）高（37％），但更简单的单试剂形式和更广泛的物质相容性使 Pierce 660 nm 蛋白检测法更适合许多常规应用。Pierce 660nm 蛋白检测可以以试管或微孔板的形式进行。
图 4.性能比较和典型颜色响应A：
Bio-Rad Bradford 蛋白检测与 Thermo Scientific Pierce 660nm 蛋白检测的性能比较。根据标准试管程序，使用 100 µL BSA 进行测定与 Bradford 检测（125 至 1000 µg）相比，Pierce 660nm 蛋白检测的线性范围更宽（25 至 2000 µg）。在每种检测的适当波长（分别为 660nm 和 595nm）下测量吸光度。使用试管程序的典型颜色响应曲线
B：使用试管程序的典型颜色响应曲线。牛血清白蛋白（BSA）的线性检测范围为 25 至 2000 µg/mL，牛丙种球蛋白（BGG）的线性检测范围为 50 至 2000 µg/mL。由于所有蛋白质检测固有的蛋白质间变异性（对于 660nm 蛋白质检测为 37％），这表明应该为要测量的未知样品类型使用适当的标准品。
手册与实验方案
应用和技术指南
使用下表中的信息，为您的应用选择合适的Bradford法定量试剂盒。
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| Bradford Plus蛋白定量（内含免稀释标准品） | 去垢剂兼容型 Bradford 法定量 | Coomassie（Bradford 法）蛋白定量 | |
|---|---|---|---|
| 优势 | 即用型，内含免稀释BSA标准品，缩短标准曲线耗时线性度更好，与其他品牌 Bradford 产品相比，蛋白质间的差异性可降低一半 | 升级款即用型 Bradford 定量试剂，，可兼容1％ 或更高浓度的常用去垢剂，包括 Triton X-100 和 NP-40 去垢剂 | 即用型，采用最初由 Bradford 在 1976 年研发的配方 |
| 检测线性范围（样品体积） | 125 -1,500 µg/mL (5 µL) 或者 1-25 µg/mL (150 µL) | 100 -1,500 µg/mL (10 µL) 或者 2-25 µg/mL (150 µL) | 100-1,500 µg/mL (20 µL) 或者 1-25 µg/mL (150 µL) |
| 兼容的试剂 | 缓冲盐，金属离子，还原剂，螯合剂 | 去垢剂，缓冲盐，金属离子，还原剂，螯合剂 | 缓冲盐，金属离子，还原剂，螯合剂 |
| 不兼容 | 去垢剂 | >5% 去垢剂 | 去垢剂 |
| 孵育时间 | 10 | 10 | 10 |
| 产品规格 | 950 mL/试剂盒 | 450 mL/试剂盒 | 950 mL/试剂盒 |
| 货号 | A55866 相关Bradfort Plus试剂盒 23236 | 23246 | 23200 |
| 相关产品：Pierce™ 免稀释™ BSA 蛋白标准品（可搭配排枪使用）, 0.125–2 mg/mL | |||
轻松、快速、准确
热门BCA 蛋白定量试剂盒现自带免稀释 BSA 蛋白标准品——7个浓度的预稀释BSA标准品，专为排枪设计。
Pierce 免稀释蛋白定量产品可大幅减少传统定量实验中繁琐的稀释操作，并使用来自美国国家标准与技术研究院 (NIST) 的纯化 BSA进行校准，以确保标准曲线的准确性。
Bradford 法定量原理
Marion Bradford 博士于 1976 年首次提出了使用考马斯 G-250 染料作为比色试剂对总蛋白进行检测和定量的方法。Pierce Coomassie Bradford 蛋白定量试剂盒是基于 Bradford 博士首先报道的试剂而优化。
Bradford 试剂, 基于考马斯的蛋白定量
在酸性环境中，蛋白质结合考马斯染料。这导致染料的最大吸收发生位移，从红棕色形式（最大吸收峰 465nm）转化为蓝色形式（最大吸收峰 610nm）。染料的两种形式在 595nm 处差异最大，因此 595nm 是测定考马斯染料-蛋白复合物的蓝色的最佳波长。如有必要，可以 575nm 到 615nm 之间的任意波长测量该染料的蓝色。在两个极端波长（575nm 和 615nm）下，与在 595 nm 处获得的颜色（吸光度）相比，测得的颜色量（吸光度）降低了大约 10％。基于考马斯染料的蛋白质检测法中，颜色的形成是与某些碱性氨基酸（主要是精氨酸、赖氨酸和组氨酸）有关。范德华力和疏水相互作用也影响染料-蛋白质的结合。结合到每个蛋白质分子上的考马斯染料分子数大致与蛋白所带正电荷的数量成正比。游离氨基酸、肽和低分子量蛋白质不会与考马斯染料试剂产生颜色。一般情况下，肽或蛋白质的质量必须大于 3,000 道尔顿才能被该试剂检出。在某些应用中，这是一个优点。
图 1.基于考马斯染料的 Bradford 蛋白检测的反应示意图：Pierce Coomassie（Bradford 法）蛋白检测, Pierce Coomassie Plus（Bradford 法）蛋白检测, 和 Pierce 去垢剂兼容的 Bradford 检测。
考马斯蛋白检测法的主要缺点是它们与常规用于溶解膜蛋白的表面活性剂浓度不兼容。通常，当样品中存在去垢剂时，即使浓度很低，也会导致该试剂形成沉淀。可以使用 去垢剂兼容型Bradford定量试剂来克服此限制。另外，Coomassie 染料试剂是强酸性的，所以酸溶解度较差的蛋白不能用该试剂来测定。最后，Coomassie 试剂导致的蛋白间差异性大约是基于铜螯合的检测试剂的两倍。
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Bradford Plus蛋白定量试剂盒（内含免稀释标准品）
Bradford Plus蛋白定量试剂盒全新推出内含免稀释蛋白标准品的版本，不用稀释标准品、缩短标准曲线制作耗时。我们提供内含免稀释 BSA 蛋白标准品的 Bradford Plus 蛋白定量试剂盒，也可单独购买免稀释标准品、搭配任何 Pierce Bradford 试剂盒一起使用。
图 2. 使用Bradford Plus蛋白定量试剂盒（内含免稀释标准品）进行蛋白定量实验。
去垢剂兼容型 Bradford 检测
Pierce 去垢剂兼容型 Bradford 定量试剂盒是对众所周知的 Bradford考马斯染料结合比色法进行快速，即用的改进，用于总蛋白质定量。该配方与浓度高达 1％ 的常用去垢剂兼容。将 Pierce 去垢剂兼容型 Bradford 检测与 Bio-Rad Dc 蛋白检测进行比较，使用 Pierce 去垢剂兼容型 Bradford 定量（使用常规去垢剂）时，灵敏度更高。Pierce 去垢剂兼容型 Bradford 检测的标准曲线范围是 Bio-Rad DC 检测范围的 4 倍。
图 2.Bradford 蛋白定量 vs. Bio-Rad DC 蛋白定量每个定量检测均在微孔板上使用加有去垢剂或水（对照）的 BSA 标准品进行，并遵循制造商的说明。
| 优势 | Pierce去垢剂兼容型 Bradford 定量试剂盒 | Bio-Rad DC 蛋白定量试剂盒 |
|---|---|---|
| 检测（最大吸光度） | 595 nm | 750 nm |
| 无去垢剂标准品 | 包含 | 不含 |
| 试管检测样品体积 | 50 μL | 100 μL |
| 微孔板检测样品体积 | 10 μL | 5 μL |
| 检测工作范围 | 100-1,500 μg/mL | 200-1,500 μg/mL |
| 吸光值范围（灵敏度） | 高* | 低 |
| 试剂盒中的试剂种类 | 1 种试剂 | 3 种试剂 |
| 操作时间 | 10 分钟 | 30 分钟 |
| 孵育时间 | 10 分钟 | 15 分钟 |
| 总时间 | 20 分钟 | 45 分钟 |
表 1.比较 Pierce 去垢剂兼容型 Bradford 定量试剂盒与 Bio-Rad DC 蛋白定量试剂盒。
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| Pierce 660 nm 蛋白定量试剂盒 | |
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| 检测范围：微孔板（样品体积） | 25 至 2,000 µg/mL (65 µL) 或者 50 至 2,000 µg/mL (10 µL) |
| 孵育时间和温度 | 5 |
| 总检测时间 | 75 |
| 吸光值 | 660 nm |
| 兼容的试剂 | 还原剂，螯合剂，去垢剂 |
| 不兼容试剂 | 存在高浓度去垢剂或SDS时，需要添加离子去垢剂兼容试剂（IDCR） |
| 均一性 | 蛋白质间差异性小于 Coomassie（Bradford）检测 |
| 产品规格 | 450 mL/试剂盒 |
| 货号 | 22662 |
Pierce 660 nm 定量原理
Pierce 660 nm 定量试剂
Pierce 660nm 蛋白检测基于酸性条件下独特的染料-金属复合物与蛋白质的结合，这种结合会导致染料在 660 nm 处的最大吸收吸收发生位移。该染料-金属复合物为红褐色，在与蛋白结合后变为绿色。这种颜色的变化是由于染料在低 pH 值时的脱氢导致的，而蛋白内的带正电荷的氨基酸残基和带负电的染料-金属复合物的相互作用促进了这一过程。因此，该染料主要与蛋白质中的碱性残基（例如组氨酸，精氨酸和赖氨酸）相互作用，而与酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸相互作用程度相对较小。
即使在存在与 Bradford 和 BCA 蛋白检测不兼容的去垢剂和还原剂的情况下，检测中产生的颜色也很稳定并在很大范围内与蛋白质浓度成正比。可以将可选的 IDCR 添加到检测试剂中，以增加与大量离子去垢剂的相容性，从而可以测量含有 Laemmli SDS 样品缓冲液和溴酚蓝的样品。IDCR 通过彻底混合完全溶解，对检测没有任何影响。
图 3.660 nm 检测试剂-金属复合物的最大吸光度与所结合的 BSA 成正比。当试剂-金属复合物存在时，蛋白质在 660 nm 波长处产生明显的吸光度偏移。
使用 Pierce 660nm 蛋白检测试剂盒进行蛋白定量
Pierce 660 nm 检测试剂盒比基于考马斯的 Bradford 检测具有更出色的线性，并且与更高浓度的大多数去垢剂、还原剂和其他常用试剂兼容。附件的离子去垢剂兼容性试剂（IDCR）提供了更广泛的去垢剂兼容性，这使其成为唯一一种适用于含有 Laemmli SDS 样品缓冲液和溴酚蓝的样品的蛋白检测方法。尽管 Pierce 660 nm 蛋白检测产生的蛋白质间变异性比其他检测法（如 BCA 蛋白检测法）高（37％），但更简单的单试剂形式和更广泛的物质相容性使 Pierce 660 nm 蛋白检测法更适合许多常规应用。Pierce 660nm 蛋白检测可以以试管或微孔板的形式进行。
图 4.性能比较和典型颜色响应A：
Bio-Rad Bradford 蛋白检测与 Thermo Scientific Pierce 660nm 蛋白检测的性能比较。根据标准试管程序，使用 100 µL BSA 进行测定与 Bradford 检测（125 至 1000 µg）相比，Pierce 660nm 蛋白检测的线性范围更宽（25 至 2000 µg）。在每种检测的适当波长（分别为 660nm 和 595nm）下测量吸光度。使用试管程序的典型颜色响应曲线
B：使用试管程序的典型颜色响应曲线。牛血清白蛋白（BSA）的线性检测范围为 25 至 2000 µg/mL，牛丙种球蛋白（BGG）的线性检测范围为 50 至 2000 µg/mL。由于所有蛋白质检测固有的蛋白质间变异性（对于 660nm 蛋白质检测为 37％），这表明应该为要测量的未知样品类型使用适当的标准品。
手册与实验方案
应用和技术指南
相关资源
仅供科研使用，不可用于诊断目的。