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Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统采用灵活的印迹处理方法,可助您显著缩短操作时间,检测不同规格的印迹膜,并轻松优化抗体用量。该系统利用 顺序侧流技术, (毛细管作用的一种简单形式),可自动化完成Western Blot实验中所有的抗体孵育和洗涤步骤,您只需将一抗、二抗溶液和洗涤缓冲液加入到设备中,设备即可自动进行相关操作。在3小时内,就能得到可立即用于最终检测的印迹膜。iBind Flex蛋白质免疫印迹处理系统在带来灵活的解决方案的同时,也兼顾了自动化的便捷性。
iBind Flex系统具有可自行更换的加液插槽,能够处理多种规格的膜,甚至可在一台设备中同时孵育不同的一抗和二抗。
使用相同的抗体条件
使用相同或不同的抗体条件
使用相同或不同的抗体条件
对比手动处理和iBind Flex系统处理的蛋白质免疫印迹。使用Invitrogen™ NuPAGE™ 4-12%、20孔凝胶在MOPS SDS电泳缓冲液中分离含有GST标签重组蛋白的样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上。使用相同浓度的同一个一抗和二抗对印迹膜进行检测。一抗为兔抗GST抗体,按1:500稀释(用于iBind系统时,将8 µL抗体溶于4 mL iBind Flex溶液;用于手动孵育盒操作时,将40 µL抗体溶于20 mL iBind Flex溶液)。二抗为山羊抗兔HRP抗体,按1:600稀释(用于iBind系统时,将6.7 µL抗体溶于4 mL iBind Flex溶液;用于手动孵育盒操作时,将33.3 µL抗体溶于20 mL iBind Flex溶液)。最终检测时,将印迹膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分钟,并使用成像系统拍照。
泳道 1-5: IKK beta (80 ng, 40 ng, 20 ng, 10 ng, 5 ng)
泳道 6-10: DDR2 (120 ng, 60 ng, 30 ng, 15 ng, 7.5 ng)
泳道 11-15: FLT1 (40 ng, 20 ng, 10 ng, 5 ng, 2.5 ng)
泳道 16-20: HCK (360 ng, 180 ng, 90 ng, 45 ng, 22.5 ng)
只需更少的一抗,就能获得更好的蛋白质免疫印迹结果。对比手动处理(在孵育盒中进行孵育和洗涤步骤)和Invitrogen™ iBind™ Flex系统处理的蛋白质免疫印迹。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝胶和MES SDS电泳缓冲液分离样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上。每块凝胶具有10个泳道,样本为2倍梯度稀释的293细胞提取物(30 µg-0.06 µg)。使用下述条件进行抗体孵育和洗涤后,将印迹膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分钟,并使用成像系统显色。
使用垂直剪切膜条和荧光检测都获得了出众的蛋白质免疫印迹结果。 对比手动处理(在孵育盒中进行孵育和洗涤步骤)和Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统处理的印迹膜。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝胶和MES SDS电泳缓冲液分离样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上,将每张印迹膜剪切成3泳道膜条。最后,使用Odyssey™ CLx仪器 (LI-COR™ Inc)进行成像。
样本和泳道如下所示:
检测和抗体使用浓度如下:
膜条编号 | 一抗 | 一抗用量 手动处理 | 一抗用量 iBind Flex | 二抗 | 二抗用量 手动处理 | 二抗用量 iBind Flex |
---|---|---|---|---|---|---|
1 | 磷酸化Akt(红) 磷酸化Elk-1(绿) | 1:2000 1:1000 | 1:400 1:200 | IRDye 680LT IRDye 800CW | 1:20,000 1:15,000 | 1:4000 1:3000 |
2 | SRC(红) β-Catenin(绿) | 1:250 1:1000 | 1:50 1:200 | IRDye 680LT IRDye 800CW | 1:20,000 1:15,000 | 1:4000 1:3000 |
3 | 磷酸化Akt | 1:2000 | 1:400 | IRDye 680LT | 1:20,000 | 1:4000 |
4 | 磷酸化Elk-1 | 1:1000 | 1:200 | IRDye 800CW | 1:15,000 | 1:3000 |
5 | SRC | 1:250 | 1:50 | IRDye 680LT | 1:20,000 | 1:4000 |
6 | beta Catenin | 1:250 | 1:200 | IRDye 800CW | 1:15,000 | 1:3000 |
蛋白质免疫印迹处理完毕后,使用Odyssey CLx仪器进行印迹膜成像。
对比手动处理和iBind Flex系统处理的蛋白质免疫印迹。使用Invitrogen™ NuPAGE™ 4-12%、20孔凝胶在MOPS SDS电泳缓冲液中分离含有GST标签重组蛋白的样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上。使用相同浓度的同一个一抗和二抗对印迹膜进行检测。一抗为兔抗GST抗体,按1:500稀释(用于iBind系统时,将8 µL抗体溶于4 mL iBind Flex溶液;用于手动孵育盒操作时,将40 µL抗体溶于20 mL iBind Flex溶液)。二抗为山羊抗兔HRP抗体,按1:600稀释(用于iBind系统时,将6.7 µL抗体溶于4 mL iBind Flex溶液;用于手动孵育盒操作时,将33.3 µL抗体溶于20 mL iBind Flex溶液)。最终检测时,将印迹膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分钟,并使用成像系统拍照。
泳道 1-5: IKK beta (80 ng, 40 ng, 20 ng, 10 ng, 5 ng)
泳道 6-10: DDR2 (120 ng, 60 ng, 30 ng, 15 ng, 7.5 ng)
泳道 11-15: FLT1 (40 ng, 20 ng, 10 ng, 5 ng, 2.5 ng)
泳道 16-20: HCK (360 ng, 180 ng, 90 ng, 45 ng, 22.5 ng)
只需更少的一抗,就能获得更好的蛋白质免疫印迹结果。对比手动处理(在孵育盒中进行孵育和洗涤步骤)和Invitrogen™ iBind™ Flex系统处理的蛋白质免疫印迹。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝胶和MES SDS电泳缓冲液分离样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上。每块凝胶具有10个泳道,样本为2倍梯度稀释的293细胞提取物(30 µg-0.06 µg)。使用下述条件进行抗体孵育和洗涤后,将印迹膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分钟,并使用成像系统显色。
使用垂直剪切膜条和荧光检测都获得了出众的蛋白质免疫印迹结果。 对比手动处理(在孵育盒中进行孵育和洗涤步骤)和Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统处理的印迹膜。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝胶和MES SDS电泳缓冲液分离样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上,将每张印迹膜剪切成3泳道膜条。最后,使用Odyssey™ CLx仪器 (LI-COR™ Inc)进行成像。
样本和泳道如下所示:
检测和抗体使用浓度如下:
膜条编号 | 一抗 | 一抗用量 手动处理 | 一抗用量 iBind Flex | 二抗 | 二抗用量 手动处理 | 二抗用量 iBind Flex |
---|---|---|---|---|---|---|
1 | 磷酸化Akt(红) 磷酸化Elk-1(绿) | 1:2000 1:1000 | 1:400 1:200 | IRDye 680LT IRDye 800CW | 1:20,000 1:15,000 | 1:4000 1:3000 |
2 | SRC(红) β-Catenin(绿) | 1:250 1:1000 | 1:50 1:200 | IRDye 680LT IRDye 800CW | 1:20,000 1:15,000 | 1:4000 1:3000 |
3 | 磷酸化Akt | 1:2000 | 1:400 | IRDye 680LT | 1:20,000 | 1:4000 |
4 | 磷酸化Elk-1 | 1:1000 | 1:200 | IRDye 800CW | 1:15,000 | 1:3000 |
5 | SRC | 1:250 | 1:50 | IRDye 680LT | 1:20,000 | 1:4000 |
6 | beta Catenin | 1:250 | 1:200 | IRDye 800CW | 1:15,000 | 1:3000 |
蛋白质免疫印迹处理完毕后,使用Odyssey CLx仪器进行印迹膜成像。
开始使用更简单、更优雅的蛋白质免疫印迹处理。iBind™ Flex起始套装包括iBind Flex蛋白质免疫印迹处理系统、iBind™ Flex卡片和溶液试剂盒,方便您立即开始您的实验:
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货号 # | 名称 | 单位规格 |
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A16104 | 山羊抗兔 IgG (H+L) 抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记,交叉吸附处理处理 | 1 mg |
A16072 | 山羊抗小鼠 IgG (H+L) 抗体,辣根过氧化物酶 (HRP) 标记,交叉吸附处理 1 mg | 1 mg |
A16110 | 山羊抗兔 IgG (H+L) 抗体,辣根过氧化物酶 (HRP) 标记,高度交叉吸附处理1 mg | 1 mg |
A16078 | 山羊抗小鼠 IgG (H+L) 抗体,辣根过氧化物酶 (HRP) 标记,高度交叉吸附处理 1 mg | 1 mg |
A11357 | Alexa Fluor 790 山羊抗小鼠 IgG (H+L),高度交叉吸附处理 0.5 mL | 0.5 mL |
A21058 | Alexa Fluor 680 山羊抗小鼠 IgG (H+L),高度交叉吸附处理 0.5 mL | 0.5 mL |
A11369 | Alexa Fluor 790 山羊抗兔 IgG (H+L),高度交叉吸附处理 0.5 mL | 0.5 mL |
A21109 | Alexa Fluor 680 山羊抗兔 IgG (H+L),高度交叉吸附处理 0.5 mL | 0.5 mL |
仅供科研使用,不可用于诊断目的。