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2D 凝胶电泳（二维凝胶电泳）是一种从生物样本中分离和分析蛋白混合物的强大且灵敏的技术。2D 凝胶电泳分两个连续步骤进行：IEF 和 SDS-PAGE。
样本制备是 2D 凝胶电泳（二维凝胶电泳）中的关键步骤，是实验成功的关键。许多因素在设计样本制备程序方面发挥着重要作用。我们提供的产品可帮助您取得成功，包括：
2D 电泳样本再水化缓冲液（也称为样本缓冲液）用于变性和溶解蛋白样本，以及再水化 IPG 胶条。样本制备的第一步是选择和/或制备合适的样本再水化缓冲液。由于蛋白种类繁多，因此不存在通用的样本再水化缓冲液。实验的起始材料和目的是选择缓冲液时需要考虑的两个因素。样本再水化缓冲液必须：
缓冲液通常含有变性剂（尿素或尿素/硫脲）、增溶剂（非离子或两性离子去污剂和两性电解质）以及还原剂 (DTT)。下表列出了样本再水化缓冲液的主要成分、其功能和推荐浓度。请注意，必须根据蛋白的溶解度对最终浓度进行优化。通常通过改变去污剂、尿素、两性电解质和还原剂的浓度来实现优化。
| 成分 | 功能 | 最终浓度 | 备注 |
|---|---|---|---|
| 尿素 | 使蛋白变性和溶解 |
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| 去污剂 | 溶解蛋白，并有助于在再水化和 IEF 过程中维持溶液中的蛋白 | 去污剂总浓度范围为 0.5–4% |
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| 还原剂 | 切割蛋白中的二硫键 | 20 mM 至 100 mM 的 DTT 或 DTE |
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| 两性电解质 | 帮助溶解蛋白并有助于维持 0.2–2% 的 pH 梯度 | 备注：更高的两性电解质浓度需要更长的聚焦时间。 |
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IEF 使用载体两性电解质在管装凝胶（灌注在长玻璃管中的聚丙烯酰胺凝胶）内执行。将蛋白样本上样至凝胶上，并在高电压下进行 IEF。施加电流后，载体两性电解质形成连续的 pH 梯度。形成梯度时，蛋白在 pH 梯度中迁移至其 pI。
在 IEF 结束时，从管中挤出凝胶，并在含 SDS 的缓冲液中平衡，以制备迁移至二维 SDS 凝胶中的蛋白。将管装凝胶放在含 SDS 的聚丙烯酰胺凝胶上并进行 SDS-PAGE。
载体两性电解质的缺点
使用载体两性电解质执行 IEF 的主要缺点是：
使用固定化 pH 梯度 (IPG) 凝胶进行一维 IEF，可消除与载体两性电解质相关的问题。固定化 pH 梯度 (IPG) 凝胶是通过在塑料背衬上使用丙烯酰胺缓冲液（含带电基团的丙烯酰胺衍生物）灌制聚丙烯酰胺凝胶而形成。由于是将 pH 梯度灌注到凝胶中，因此梯度更稳定且可重现。IPG 凝胶聚合后，对其进行洗涤、干燥，然后切割成窄带（IPG 胶条）。
IPG 胶条上的 pH 梯度可以呈线性或非线性 (NL)。非线性梯度通常从 pH 4-7 扩展而来，最终形成 S 形 pH 梯度。非线性 IPG 胶条可用于分析包含 pI 4-7 范围内多种蛋白的样本，这是所有物种中大多数粗裂解物的典型样本。
IPG 胶条的优点
使用 IPG 胶条进行一维 IEF 的优点如下：
2D 电泳系统的另一个关键组分是电泳缓冲液和聚焦缓冲液。我们提供便利可靠的解决方案，可实现更高的性能。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。