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小分子杂质去除
去除蛋白样本制备工作流程中未反应或残留的小分子是成功进行下游分析的关键因素。例如，在标记反应后去除游离染料对于准确测定染料-蛋白比以及帮助消除背景噪声至关重要。Zeba 染料和生物素去除离心柱和96孔过滤板内含有一种即用型树脂，专门用于快速去除未结合荧光染料、生物素、未使用的还原剂和交联剂，具有卓越的蛋白回收率。
产品特点
- 通用——从蛋白溶液中去除未反应的荧光染料、生物素化试剂、交联剂和还原剂
- 高回收率——低结合树脂可较大限度提高蛋白回收率
- 易于使用——无需繁琐的色谱柱制备或平衡
- 快速——在 15 min 内完成小分子去除和蛋白回收
- 灵活——提供可满足各种需求的离心柱和离心过滤板以供选择
应用
- 特别适用于反应后样本纯化
- 有效去除未结合染料、生物素、还原剂和交联剂，具有卓越的蛋白回收率
Zeba 染料和生物素去除柱和孔板
| 产品规格 | 0.5 mL 离心柱 | 2 mL 离心柱 | 5 mL 离心柱 | 10 mL 离心柱 | 96孔过滤板 |
|---|---|---|---|---|---|
| 树脂床体积 | 0.5 mL | 2 mL | 5 mL | 10 mL | 420 μL |
| 容量 | 50-120 μL | 400-700 μL | 1–2 mL | 2–4 mL | 40–100 μL |
| 截留分子量 (MWCO) | 7 kDa | 7 kDa | 7 kDa | 7 kDa | 7 kDa |
| 适合自动化操作？ | 否 | 否 | 否 | 否 | 是 |
产品比较
| 技术/产品 | （小分子）去除 % | （蛋白）回收 % | 无需仪器 | 通用性 | 样本稀释 | 使用简易度 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Zeba 染料和生物素去除柱和孔板 |  | | | | | |
| 体积排阻（柱色谱法） | |  |  | | | |
| 体积排阻（离心）- BioRad® P30 | | | | | | |
小分子去除和蛋白回收性能更佳
相较于其他产品，Thermo Scientific Zeba 染料和生物素去除柱的生物素去除效果更好，且具有出色的蛋白回收率。
图1.使用 Zeba 染料和生物素去除柱以及其他供应商的类似产品（BR = Biorad P-30、GB 1 = G-Bioscience GT-100、GB 6 = G-Bioscience GT-600、GE = PD10）从 100 µL 样本中去除 0.27 mM 游离 NHS LC 生物素。通过 Pierce Rapid Gold BCA 检测试剂盒评估用 20X NHS-LC-生物素标记的山羊抗小鼠 (2 mg/mL) 的蛋白回收率。使用 Thermo Scientific 生物素定量试剂盒对游离生物素去除情况进行定量。
更佳的免疫荧光图像
通过去除不需要的染料、生物素和交联剂，纯化蛋白样本。该工具将帮助您获得更佳的免疫荧光图像。
图2.用 Alexa Fluor 647 标记 HDAC2 多克隆抗体，然后使用 Thermo Scientific Zeba 染料和生物素去除柱从未反应的染料中纯化。A549 细胞中 HDAC2（红色）的免疫荧光分析：在室温下用 4% 多聚甲醛 PBS 溶液固定细胞15分钟，用 0.1% Triton X-100 PBS 溶液透化15分钟，然后用 1% BSA PBS 溶液封闭。用 HDAC2 多克隆抗体 Alexa Fluor 647 偶联物对细胞染色，分别在清除（右图）和不清除（左图）未反应染料的情况下于封闭缓冲液中以 2.5 µg/mL 的稀释度在室温下避光孵育1小时。
性能更佳且节省时间
相较于透析，Thermo Scientific 染料和生物素去除柱的染料去除效果更佳，且具有出色的蛋白回收率。
图3显示了如何在15分钟内获得出色的反应后蛋白样本纯化结果。
图3.使用 Zeba 染料和生物素去除柱和 Thermo Scientific Slide-A-Lyzer G2 透析盒从用 Alexa Fluor 647 标记（10倍摩尔过量）的 10 mg/mL 山羊抗兔 IgG 样本中去除游离的 Alexa Fluor 647 染料。通过测定起始样本和去除染料后流出物的 A280，评估蛋白回收率。在电泳凝胶上运行样本并在 iBright FL1500 成像系统上成像后，使用 iBright 分析软件定量测定游离染料的去除情况。
表2.通过将每种蛋白的 1 mg/mL 样本上样于 5 mL 柱，评估蛋白回收率。使用 Pierce Rapid Gold BCA 蛋白检测试剂盒对处理后样本和起始材料的蛋白浓度进行定量。
| 使用 5 mL 柱所得的回收率 % | ||
| 蛋白 | MW (kDa) | 2 mL 样本 |
|---|---|---|
| 胰岛素 | 5.8 | 29% |
| 细胞色素 C | 12 | 91% |
| 胰凝乳蛋白酶 | 25.6 | 97% |
| 蛋白 A | 34 | 97% |
| 转铁蛋白 | 80 | 94% |
| 兔 IgG | 150 | 89% |
更高的还原剂去除效率
可以轻松有效地去除蛋白样本中的还原剂。图4比较了 Scientific Zeba 染料和生物素去除柱相对于其他供应商类似产品用于去除 TCEP 的效率。
图4.使用 Thermo Scientific Zeba 染料和生物素去除柱和其他供应商的类似产品（BR = Biorad P-30、GB 1 = G-Bioscience GT-100、GB 6 = G-Bioscience GT-600、GE = PD10）从含有 1 mg/mL 山羊抗兔 IgG 和 25 mM TCEP 的 PBS 溶液中去除TCEP。通过将 700 µL 样本上样至 2 mL 柱，去除还原剂。使用 Ellman 检测试剂盒定量测定流出物中 TCEP 的去除情况，并与起始样本进行了比较。
更佳的染料去除性能
相较于其他供应商的产品，Thermo Scientific Zeba 染料和生物素去除柱的染料去除效果更佳，且具有出色的蛋白回收率。
图5展示了这些色谱柱如何以更好、更简单的方式去除蛋白样本中的染料。
图5.使用 Zeba 染料和生物素去除柱和其他供应商的类似产品（BR = Biorad P-30、GB 1 = G-Bioscience GT-100、GB 6 = G-Bioscience GT-600、GE = GE PD10）从 100 µL 经 Alexa Fluor 647 标记（10倍摩尔过量）的 10 mg/mL 山羊抗兔 IgG 样本中去除游离/未反应的 Alexa Fluor 647 染料。通过测定起始样本和去除染料后流出物的 A280，评估蛋白回收率。在电泳凝胶上运行样本并在 iBright FL1500 成像系统上成像后，使用 iBright 分析软件定量测定游离染料的去除情况。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。