下一代测序文库纯化和 PCR 纯化

DNA 纯化

DNA 纯化涉及从给定样本中靶向去除不需要的片段和杂质。在样品用于下游应用之前，去除 NGS 接头、引物、引物二聚体、未掺入的 dNTP 和其他反应组分。纯化对于下一代测序 (NGS) 和 PCR 等基因组应用至关重要。利用固相可逆固定 (SPRI) 磁珠技术可以使纯化更容易，该技术广泛用于 NGS 文库制备工作流程。

优化纯化操作   订购磁珠
 

对于那些希望提高测序过程的质量、效率和准确性的人来说，DNA 片段筛选是下一代测序文库制备工作流程中的一个关键步骤。片段筛选涉及在进入测序步骤之前，从制备好的 DNA 片段库中选择所需大小范围的特定 DNA 片段。

固相可逆固定技术 (SPRI)

固相可逆固定技术 (SPRI) 是一种利用二氧化硅或羧基包被的超顺磁珠从溶液中纯化核酸的有效方法。磁珠被设计成可在聚乙二醇和盐存在的情况下可逆地结合核酸。 SPRI 技术根据类型和片段大小能够选择性结合核酸，以捕获靶标并去除样品中的杂质。[1]

实现核酸固定化的方法是将片段筛选的 SPRI 磁珠与靶标核酸结合，然后利用磁场将其固定到位。 

一旦选定的 DNA 与超顺磁珠结合，就可以进行杂质去除和纯化步骤。使用磁力架例如DynaMag 96 侧面磁力架进行颗粒捕获。dNTP、盐、引物和引物二聚体等杂质将被彻底去除。步骤完成后，将样品从磁场中移出，即可捕获到纯化的 DNA。

当磁珠从磁场中移出，重悬于水或洗脱缓冲液中时，就会进行核酸洗脱。核酸从磁珠中释放出来，将混合物再次置于磁场附近，磁场将磁珠与溶液分离。

• 在 NGS 片段筛选和纯化方面，其性能与金标准磁珠相当

MagMAX Pure Bind是一款即用型产品，可替代市场上主流的纯化磁珠产品。该磁珠可以无缝整合到现有的工作流程中。

图 1.与主流的竞品相比，MagMAX Pure Bind 可以成功实现 PCR 纯化，>90bp 扩增子（PCR 产物）回收率高，能有效去除<90bp 片段（引物和二聚体）。以1.8x 磁珠比率纯化500 ng 片段化 DNA，并以纯化前起始量的百分比计算纯化后回收率和去除效率。
 

• 以较低的成本获得出色性能

与市场领导者相比，在不影响质量的情况下，可实现高达 40% 的成本节约。
定价对比

• 可与自动化工作流程兼容

与KingFisher 自动纯化系统配合使用，可实现高效、  高通量的30 分钟纯化方案。
 

根据通量需求选择 NGS 纯化的包装规格

MagMAX Pure Bind 具有三种包装规格，以满足多种通量需求。使用  5 mL 或 50 mL 包装规格处理小体积样本，减少浪费。使用 250 mL 包装规格扩大样品处理规模。

完整下一代测序工作流程的步骤

1. 使用收集的样本 开始您的 NGS 工作流程
2. 手动或使用 KingFisher 自动纯化系统提取核酸
3. 选择靶标
4. 构建文库
5. 使用 MagMAX Pure Bind 进行片段筛选和纯化
6. 制备模板
7. 运行测序
8. 分析数据

研究 NGS 工作流程内的其他产品
 

1. DeAngelis MM, Wang DG, Hawkins TL.Solid-phase reversible immobilization for the isolation of PCR products.Nucleic Acids Res.1995 Nov 25; 23(22): 4742-3. doi: 10.1093/nar/23.22.4742.PMID: 8524672; PMCID: PMC307455.