用 StemPro Accutase 解离 hESC

1. 吸出培养皿中的培养基，用 4mL DPBS（磷酸盐缓冲盐水，不含钙和镁，货号：14190）清洗。


2. 吸出 DPBS 并将 2 mL 的 Accutase 添加到培养皿中。


3. 在 37°C 下孵育2至5分钟，直至单个细胞开始聚集成团。


4. 轻轻冲洗以清除培养板表面的细胞。


5. 将细胞悬液转移到 15 mL 锥形管中。 轻轻上下移液，直至细胞形成单细胞悬液。


6. 加入 8 mL 培养基进行冲洗，以清除培养皿表面的任何剩余细胞，然后转移到锥形管中（从步骤 5 开始）。


7. 取 20 μL 细胞悬液样品以测定活细胞密度。


8. 在 200g 下将含有细胞悬液的锥形管离心 4 分钟。


9. 吸出上清液，重悬于新鲜培养基中，然后铺板到包被培养皿中。将其置于 36 至 38°C 含 5% CO₂ 的湿润空气环境中孵育。

注意：0.5–1x10⁶ 个细胞/60mm 培养皿的接种率最适合添加了 Geltrex 的 StemPro hESC SFM 培养系统。