使用 StemPro Accutase 解离神经干细胞和神经球

1. 吸出培养皿中的培养基，用 4mL DPBS（磷酸盐缓冲盐水，不含钙和镁，货号：14190）清洗。


2. 吸出 DPBS 并将 2 mL 的 Accutase 添加到培养皿中。


3. 在 37°C 下孵育2至5分钟，直至单个细胞开始聚集成团。


4. 轻轻冲洗以清除培养板表面的细胞。


5. 将细胞悬液转移到 15 mL 锥形管中。 轻轻上下移液，直至细胞形成单细胞悬液。


6. 加入 8 mL 培养基进行冲洗，以清除培养皿表面的任何剩余细胞，然后转移到锥形管中（从步骤 5 开始）。


7. 取 20uL 细胞悬液样品以测定活细胞密度。


8. 在 200g 下将含有细胞悬液的锥形管离心 4 分钟。


9. 吸出上清液，重悬于新鲜培养基中，然后铺板到包被培养皿中。将其置于 36 至 38°C 含 4 至 6% CO₂ 的湿润空气环境中孵育。

注意：1x10⁶ 个细胞/60mm 培养皿的接种率最适合添加了 CELLstart 的 StemPro NSC SFM 培养系统。

1. 从培养皿中取出神经球细胞悬液，然后将其转移到 15 mL 锥形管中。
   


2. 在继续进行步骤 3 之前，让神经球在管中沉降（约 2 至 5 分钟）。或者，在 100g 下将细胞离心 1 分钟。


3. 轻轻吸出培养基，将神经球留在管底部，剩余约 100 μL 培养基。


4. 将神经球重悬于 5 mL DPBS（不含钙和镁，货号：14190）中。


5. 在继续进行步骤 6 之前，让神经球在管中沉降（约 2 至 5 分钟）。或者，在 100g 下将细胞离心 1 分钟。


6. 轻轻吸出 DPBS，将神经球留在管底部，剩余约 100 μL DPBS。


7. 向神经球中加入 1mL Accutase，并在室温下孵育 10 分钟。


8. 使用尺寸合适的移液器吸头（即 1000 μl）上下移液，直到所有神经球都处于单细胞悬液中。


9. 向管中加入 4mL 新鲜培养基。


10. 在 200g 下将细胞离心 4 分钟。


11. 轻轻吸出上清液。


12. 将细胞重悬于新鲜培养基中，转移至新的培养皿中，并置于 36 至 38°C 含 4 至 6% CO₂ 的湿润空气环境中孵育。

注意：在 StemPro NSC SFM 中培养细胞时可选择 200,000 个细胞/mL 的细胞密度