让细胞培养适应无血清培养基

有两种方法可以使细胞适应无血清培养基 (SFM)：

1. 直接适应—将细胞从添加血清的培养基转换到 SFM 中。
2. 连续适应或渐次减量—分几个步骤将细胞从添加血清的培养基转换到 SFM 中。对细胞来说，连续适应往往比直接适应更温和。

要使细胞适应 SFM，培养必须满足以下条件：

• 处于对数生长中期
• 细胞活力 >90%
• 在适应过程中，接种密度较高的初始细胞接种物

以下是一般适应方案。初始细胞接种物、细胞得率和培养期被视为后续优化的起点。


直接适应

某些细胞可从含血清的培养基直接转换到 SFM 中。对于直接适应，细胞接种物密度应为 2.5 × 10 ⁵ 至 3.5 × 10 ⁵ 个细胞/mL。当细胞密度为 1 × 10 ⁶ 至 3 × 10 ⁶ 个细胞/mL 时，进行细胞传代培养。培养4到7天后，当细胞密度达到 2 × 10 ⁶ 至 4 × 10 ⁶ 个细胞/mL 时，细胞完全适应了 SFM。当细胞密度达到 1 × 10 ⁶ 至 3 × 10 ⁶ 个细胞/mL 且细胞活力为 90% 时，应每 3-5 天在 SFM 中传代培养一次已适应 SFM 的储备细胞培养物。


连续适应

连续适应是 Invitrogen 首选的让细胞适应无血清培养基 (SFM) 的方法，典型的转换方式如下：


由于从 75% 转换为 100% SFM 可能让细胞备受压力，因此您可能需要将细胞放在 10% 添加血清的培养基与90% SFM 的混合物中传代培养 2-3 次。大多数细胞系在 100% SFM 中传代培养3次后都可被视为已完全适应。在转换为 100% SFM 前，偶尔也会出现细胞无法通过某一步骤的情况。如果出现这种情况，返回并使用先前的添加血清培养基与无血清培养基比例传代培养细胞 2-3 次。


无血清培养注意事项

总的来说，无血清培养的细胞对极端 pH 值、温度、渗透压、机械力和酶处理更为敏感。

抗生素

尽量不要在无血清培养基中使用抗生素。确需使用的话，我们建议使用量为在添加血清培养基中的使用量的 1/5 到 1/10。这是因为血清蛋白倾向于结合已添加的一定量的抗生素；如果没有这些血清蛋白，原来的抗生素水平可能对某些细胞产生毒性。

更高的细胞密度

在适应前，细胞必须处于对数生长中期并且活力 >90%。可能需要进行连续适应。在适应 SFM 期间，每次传代时的接种培养密度均高于正常值可能有助于适应过程。由于部分细胞无法在新培养环境中存活，因此接种较多的细胞将增加进一步传代的存活细胞的数量。

凝块

在适应 SFM 的过程中，经常出现细胞凝块。我们建议您在传代培养细胞时轻轻研磨细胞团块，使细胞分散开。

形态

在适应 SFM 的过程中以及适应后，细胞形态通常会发生细微的变化。只要细胞倍增时间和活力保持良好，细微的形态变化就无关紧要。

使用条件培养基适应

适应 SFM 的另一种方法是使用“条件培养基”。这种培养基是指细胞已经在其中生长了一整代。如果选择该方法，可以通过以下方式促进适应：


无论您选择哪种适应方法，我们都强烈建议您始终采取以下预防措施：

• 适应前，在添加血清的培养基中冻存一份细胞。
• 如果细胞不会在下一次传代时存活，那么在开始下一级适应时，在先前的每个条件下继续培养细胞以备不时之需。