お客様の化合物サンプルをInvitrogen™ GeneBLAzer™ target-specific nuclear receptor cell lines を用いて、アゴニスト活性（EC50値測定）、アンタゴニスト活性（IC50値測定）を調べます。

β-ラクタマーゼレポーター遺伝子とFRET基質を用いた、 GeneBLAzer テクノロジーにより高いZ’値の安定した結果が得られます。
アッセイプレート毎に、既知化合物（アゴニスト）によるコントロールを取り、またアッセイモードにあわせた既知化合物（アゴニストまたはアンタゴニスト）で タイタレーション試験を行い、予測されるEC50値またはIC50 値が得られているかの確認を行います。

GeneBLAzer テクノロジーを用いた核内受容体アッセイ

GeneBLAzer 核内受容体アッセイは、上流にGAL4のアクチベーター配列（UAS）を持ったβ-ラクタマーゼ（bla）レポーター遺伝子を利用しています。GAL4DNA結合ドメインはターゲットとなる核内受容体のリガンド結合ドメイン（NR-LBD）との融合タンパク質として発現され、リガンドの結合によりGAL4 DBD-NR LBD融合タンパク質の核内移行が起こり、レポーター遺伝子の発現が起きます。

FRETを用いた信頼性の高い検出システム 基質にはFRETを引き起こす蛍光色素標識がされており、βラクタマーゼの活性化により基質が切断されると緑色蛍光（520 nm)から青色蛍光（447 nm）へとシフトします。青色蛍光/緑色蛍光を用いた比率測定により信頼性の高いZ’値が得られます。

GeneBLAzer ERβ-UAS-bla GripTite 293アッセイの検証データ
A. GeneBLAzer ERβアッセイにおける既知の作用薬パネルの濃度-反応曲線を示しています。これらのアゴニストの強度の順位は既知文献資料の数値と一致しています。
B.パーシャルアゴニスト/アンタゴニスト化合物パネルの濃度-反応曲線を示しています。結果は既知文献資料の数値と一致しています。これらの化合物はERαに対してはアンタゴニストであると同時にパーシャルアゴニストですが、ERβに対してはアンタゴニストです。アンタゴニストモードについては細胞はEC50量のエストラジオール存在下において試験されています。

 

サービス内容

細胞の種類、アッセイモード（アゴニストモード/アンタゴニストモード）、化合物濃度をご指定いただきアッセイを行います。

10ポイントの化合物濃度（1/2log間隔）を用いてEC50アッセイ、IC50アッセイを行います。（n=2にて行います）
化合物の由来、毒性によっては、輸出入に制限がかかる場合がございます。

 

ご提供いただくもの

  • 化合物サンプル（100％DMSOに測定時の最大濃度の1000倍以上の濃度で溶解したものを密封の上75μL以上お送りください。）
  • ご希望のアッセイ条件（ターゲットレセプター、あるいは細胞の種類、アッセイモード（アゴニストモード/アンタゴニストモード）、アッセイ時の化合物濃度）

 

アッセイプロトコルと条件

利用可能な細胞リストは7ページ以降に記載があります。

納期

3～4週間（サンプルの輸出に別途1週間程度をいただきます。）

価格

お問い合わせください。

お問合せ先

サーモフィッシャーサイエンティフィック
ライフテクノロジーズジャパン株式会社
羽田事業所　受託サービス
〒143-0004
東京都大田区昭和島2-4-3
TEL: 03-5753-3006
mail: jpcustom@thermofisher.com