DNA フリー DNA ポリメラーゼ

DNA フリー PCR 酵素の製造におけるシングルユーステクノロジー

サーモフィッシャーサイエンティフィックは、シングルユースシステム（SUS）に基づくテクノロジーを使用した製造工程を開発しました。工程にはコマーシャルサプライ用の PCR 試薬中の DNA コンタミネーションのリスクを大幅に低減する広範な品質管理試験が含まれます。その結果、当社の従来の標準的な PCR 試薬に期待されるものと同等の高レベルの性能とロット間一貫性が得られています。これらの試薬は、不明瞭な結果または偽陽性結果を最小限に抑えるために高い感度と特異性が必要とされる PCR アッセイに最適な選択肢です。

特長

クローズドな SUS 酵素製造
厳重な品質管理試験
ISO 13485 品質標準に準拠

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このページの内容

DNA フリー PCR 酵素の利点
Invitrogen Platinum Taq DNA ポリメラーゼ、DNA フリーと他社製品の比較
リソース–製品マニュアル、ホワイトペーパー、ポスター

注目のビデオ：
DNA フリー PCR 試薬

SUS テクノロジームがどのように PCR 試薬の製造において生じる DNA コンタミネーションのリスクを最小化しているかについて動画をご覧ください。

ホワイトペーパー：PCR 試薬の製造における SUS テクノロジー（英語）

ホワイトペーパーをダウンロードして、SUS テクノロジーによって、どのように DNA フリー PCR 試薬が製造されているかをお読みください。

DNA フリー PCR 酵素の利点

DNA コンタミネーション

市販の DNA ポリメラーゼの製造工程には、通常、研究者やオペレーターがオープンな環境で処理する複数のステップがあります（図 1）。さらに、他のタンパク質や酵素の製造に装置が共有される可能性もあります。結果として、調製の純度は、各工程間の効率的なコンタミネーション除去の段階に強く依存します。

酵素調製に一般的に見つかる DNA によるコンタミネーションは、全製造工程中のこれらの多くのステップの 1 つまたはすべてにおいて生じることがあります。当然のことながら、試験を行うと、これらの DNA ポリメラーゼに検出可能なレベルの DNA のコンタミネーションがあることがわかります [1]。これは DNA ポリメラーゼの商業規模の製造において許容できないリスクとなりますが、サーモフィッシャーサイエンティフィックでは SUS ベースの製造によって対処しています。

A conventional manufacturing workflow for recombinant enzymes illustrates the risk of DNA contamination

図 1.上記の組み換え酵素の従来の製造ワークフローは、DNA コンタミネーションのリスクを示しています。一般的な酵素調製の工程には、各工程間でのオープンな環境からオペレーターによる処理まで、潜在的な DNA コンタミネーションが生じる機会が繰り返し含まれています。他の酵素やタンパク質の調製用の他の製造工程と共有している装置を使用した際に、DNA コンタミナントのキャリーオーバーが生じる潜在的なリスクもあります。

製造のイノベーション

サーモフィッシャーサイエンティフィックでは、商業規模の組み換え酵素の製造向けに当社の SUS テクノロジーを独自に採用しています（図 2）。SUS ベース製造のすべてのステップは、クローズドな環境で実施され、製造過程全体で無菌かつシングルユースのバッグ、チューブ、およびコネクターが使用されています。すべてのバッファーおよび洗浄溶液はシングルユースバッグで調製し、ろ過することにより無菌化しています。クローズドな SUS ベースの製造により、DNA コンタミネーションの確率は無視できるリスク水準まで低減されています。

特長

製造工程全体にわたり完全に閉鎖されたシステム - 環境および人の操作にさらされることがありません
無菌かつシングルユースのバッグ、チューブ、およびコネクター - 共用の装置からの相互汚染の可能性がありません
Class D および Class C のクリーンルーム基準を満たす施設で製造 - 専用の特設スペースにより DNA コンタミナントのキャリーオーバーへの曝露を防ぎます

Closed SUS-based process for the manufacture of recombinant enzymes

図 2.組み換え酵素の製造におけるクローズドな SUS ベースの工程。この工程は、シングルユースのバッグ、チューブ、およびコネクターを使用する、完全に閉鎖されたシステムを表しています。これにより、環境からでもオペレーターからでも生じることのある潜在的な DNA コンタミネーションを無視できるリスク水準まで低減します。さらに、この工程はシングルユースであり、装置または材料が共有されないため、相互汚染源としてこれらを排除できます。

信頼性の高い性能

SUS テクノロジーを使用して製造された Invitrogen Platinum Taq DNA ポリメラーゼは、厳格な品質管理試験（アプリケーション特有の機能的アッセイなど）の対象となります。SUS テクノロジーを使用して製造された Platinum Taq DNA ポリメラーゼを用いて実施するリアルタイム PCR アッセイは、従来の製造体制で製造された Platinum Taq DNA ポリメラーゼと比較して、同等の性能を示します。

図 3.DNA フリー Taq DNA ポリメラーゼによる高感度、特異的、および高再現性の増幅。qPCR アッセイにおける、DNA フリー Platinum Taq DNA ポリメラーゼ（青い曲線）の性能と、Platinum Taq DNA ポリメラーゼ（赤い曲線）の性能を、E. coli 16S rRNA 遺伝子をターゲットとするプライマーを使用し、E. coli インプット DNA の量を変化させながら評価しました。