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Neon NxT Electroporation System: |
性能、速度、簡便性、柔軟性を追求して設計されたコンパクトなエレクトロポレーション装置は、貴重な研究時間とサンプルを保護します。Invitrogen Neon NxT Electroporation System独自のピペットチップテクノロジー、簡素化されたワークフロー、柔軟性を組み合わせることで、サンプルの損失の低減、汚染リスクの低減、ステップの節約、実験のコントロールを可能にします。
クラウドベースのアプリケーションであるInvitrogen TransfectionLabは、設計段階からエレクトロポレーション実験ごとにカスタマイズされたステップバイステップのガイドを自動的に作成します。最大384サンプルに対して複数のプレートレイアウトをリモートで設定でき、アプリに保存されたプロトコルやプレートレイアウトは、接続済みのNeon NxTシステムから直接アクセスできます。
Neon NxT University Lab Partnersお客様の声ビデオ
このビデオでは、University Lab Partnersの教育プログラムマネージャーであるSamantha Renuschが、Neon NxT Electroporation Systemを使用した経験を紹介しています。
Neon NxT Electroporation Systemはエレクトロポレーション装置で、免疫細胞、初代細胞、幹細胞などのトランスフェクションが困難な細胞において、最大90%のトランスフェクションと遺伝子編集の効率を実現します。150を超える細胞株が、効率と生存率のために最適化されたすぐに使用可能な条件で試験されています。
さまざまな細胞株上で最適化されたエレクトロポレーションプロトコルを得るために、トランスフェクションプロトコルおよび引用データベースを検索します。
図1.Neon NxT Electroporation Systemによるトランスフェクション効率。細胞に10 μLまたは100 μLのエレクトロポレーション反応でGFPプラスミドDNAまたはGFP mRNAをトランスフェクトしました。トランスフェクション効率は、GFP陽性細胞の割合(n = 3)として報告されます。 注:ナイーブT細胞は100μLの反応でのみエレクトロポレーションを行いました。
図3.CRISPR-Cas9ベースのゲノム編集実験におけるNeon NxT Resuspension Genome Editing Bufferのパフォーマンス。細胞を10 μLまたは100 μLの反応でエレクトロポレーションしました。(A)GFPドナーDNAノックイン効率をGFP陽性細胞の割合で報告。(B)GFPドナーDNAノックイン後の細胞の生存率。 (C)ノックアウト効率は、エレクトロポレーション後にGFPを発現していない初期GFP陽性細胞の割合として報告。(D)ノックアウト細胞のエレクトロポレーション後生存率。
ゲノム編集は、ヒトの健康と病気の理解を深めるために大きな期待が寄せられています。ゲノム編集ワークフローにおいて重要でありながら困難なステップは、CRISPRリボヌクレオタンパク質(RNP)、DNA、RNA分子を、選択した細胞株(トランスフェクションとも呼ばれる)に効率的に導入することです。上記のように、エレクトロポレーションは、トランスフェクションが困難な細胞でも高いトランスフェクション効率を達成できるため、最も広く使用されている導入方法です。
当社の遺伝子編集試薬およびNeon NxT Resuspension Genome Editing BufferをNeon NxT Electroporation Systemと併用することで、初代細胞、幹細胞、トランスフェクト困難な細胞などの哺乳類細胞を用いたノックアウトやノックイン実験でのCRISPR Cas9などの特定のペイロードを用いた、ゲノム編集性能を向上させることができます(図3)。
包括的なゲノム編集ワークフローソリューションは、 thermofisher.com/geneeditingでご覧ください
図4.標準的なエレクトロポレーションキュベットと比較した場合の、Neon NxTピペットチップの利点。独自の生物学的適合性 (A) Neon NxTチップは、 (B) エレクトロポレーションキュベットよりも重要な利点を持つ、実績のあるキャピラリーエレクトロポレーション技術を提供します。
標準的なキュベットをベースとしたエレクトロポレーションチェンバーとは異なり、Neon NxT Electroporation Systemではより均一な電界を形成し、生物学的に適合した独自のピペットチップ型電極を使用します。このデザインにより生理的条件をより良く維持できるようになり、従来のエレクトロポレーションと比較して高い細胞生存率を得られます。†
Neon NxT Electroporation Systemを使用すると、実験に最も重要なパラメーターを正確にコントロールでき、そうでないパラメーターを調整するために貴重な時間を無駄にすることはありません。このトランスフェクションシステムでは、以下のことが可能です。
1反応あたり1 x 104~1 x 107細胞のトランスフェクションが可能な柔軟性により、DNA、RNA、タンパク質をさまざまな哺乳類細胞に導入できます。
Neon NxT Electroporation Systemの合理化されたワークフローは、簡単に実行でき、トレーニングは最小限で済み、一貫性と再現性が向上します。
このトランスフェクションシステムを使用すると、エレクトロポレーションのプロセスはシンプルです。まず、細胞とプラスミドミックスをNeon NxTピペットチップに取り込みます。次に、ピペットホルダーに差し込み、エレクトロポレーションを押します。最後に、トランスフェクションした細胞を培養容器に戻すだけです。トランスフェクションはピペットチップ内で行うため、わずか3つの簡単なステップでトランスフェクションが完了します。吸引、エレクトロポレート、分注。
ステップ1 |
---|
吸引細胞をNeon NxTバッファーで懸濁して調製します。細胞とペイロードをミックスします。Neon NxTバッファーをNeon NxTピペットチップに注入します。 |
ステップ2 |
エレクトロポレート 細胞に電気パルスを適用して、専用のバッファーにペイロードを供給します。 |
ステップ3 |
分注増殖状態に戻し、トランスフェクションされた細胞を回復させます。 |
ステップ4 |
細胞解析 評価:遺伝子発現、ゲノム編集、サイレンシング、細胞株開発など |
当社独自のエレクトロポレーション技術により、ワークフローの簡素化に加えて、従来のエレクトロポレーションシステムと比較して、プロセス全体を10~15分に短縮します。†
細胞株に適したバッファーキットを探す手間を省くことができます。当社は、150を超える哺乳類細胞株に対応する1つのバッファーキットで、プロセスを簡素化しました。Invitrogen Neon NxT再懸濁Rバッファーの使用を1,900 V未満の電圧で、高電圧でInvitrogen Neon NxT再懸濁Tバッファーの使用を推奨します。
クイックスタートでサンプルごとのエレクトロポレーションパラメーターを調整する代わりに、Neon NxTエレクトロポレーションシステムの直感的なユーザーインターフェースを使用して、事前にプレート全体をセットアップすることができます。各サンプルをエレクトロポレーションする際に、画面上で進行状況をモニタリングし、最大24個のサンプルを20分以内にエレクトロポレーションします。
サンプルは貴重ですが、従来のエレクトロポレーションキュベットとの間での移し替え中に一部の容量が失われることは避けられません。Neon NxTエレクトロポレーションシステムでのエレクトロポレーションは、ピペットチップ内で起こり、サンプルロスと細胞が受けるせん断力を最小限に抑えます。
パルス生成器やピペットステーションなどのNeon NxTシステムのコンパクトな設置面積は、ほとんどのバイオ安全キャビネット(BSC)に適合するほど小型です。サンプルは機器の使用中は常に無菌領域内にあるため、貴重な細胞の汚染リスクを低減できます。Neon NxTシステムには、BSCで簡単に使用できる新しいケーブル管理機能もあります。
図5.Neon NxTエレクトロポレーションシステムの寸法。Neon NxTパルス生成器(9.5インチ 幅x 7.6インチ 高さx 9.9インチ D)およびNeon NxTピペットステーション(4.9インチ 幅x 11.5インチ 高さx 5.9インチ D)ほとんどのBSCに適合するため、サンプル汚染を最小限に抑えることができます。
仕様 | Neon NxT Electroporation System | Neon Transfection System |
---|---|---|
エレクトロポレーション容量 | 10 µLまたは100 µL | 10 µLまたは100 µL |
エレクトロポレーションバッファー容量* | 2 mL | 3 mL |
チップ取り付け | ClipTip技術 | 摩擦 |
エレクトロポレーションパルス | 1~10 | 1~10 |
パルス間隔 | 1~100 ms | 1~100 ms |
パルス電圧 | 500~2,500 V | 500~2,500 V |
アーク検出 | あり | なし |
クラウド接続 | 可 | 不可 |
パルス生成器の寸法** | 9.5 x 7.6 x 9.9インチ(幅 x 高さ x 奥行) 11.9 lb(5.4 kg) | 9.5 x 8.9 x 13.6インチ(幅 x 高さ x 奥行) 13.8 lb(6.25 kg) |
ケーブル管理機能*** | あり | なし |
タッチスクリーン | 8インチ容量タッチスクリーン | 7インチタッチスクリーン |
電気定格 | 100~240 VAC、270 W | 100~240 C、150 W |
*Neon NxTエレクトロポレーションシステムのバッファーチューブには、2 mLレベルインジケータが付いています。
**Neon NxTパルスジェネレータは、シャッターを取り外さずに、一般的なBSCに出入りすることができます。
***取り付け可能なケーブルオーガナイザを使用して、余分なケーブル長をNeon NxTシステムの背後に固定できます。
図6.Neon NxT Electroporation SystemおよびNeon Transfection Systemの性能。性能は、さまざまな哺乳類細胞株をGFPプラスミドDNAまたはGFP mRNAでトランスフェクションすることで評価しました。(A) GFPプラスミドDNAのトランスフェクション効率は、GFP陽性細胞の割合として報告されています。(B) GFPプラスミドDNAによるトランスフェクション後の細胞の生存率。(C) GFP mRNAトランスフェクション効率は、GFP陽性細胞の割合として報告した。(D) GFP mRNAを用いたトランスフェクション後の細胞の生存率。
† Kim JA, Cho K, Shin MS, et al.(2008) A novel electroporation method using a capillary and wire-type electrode. Biosens Bioelectron 23(9):1353–1360.
参考資料
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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.