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G418, Geneticin®
Commonly know as G418 or G-418, Geneticin® reagent is an aminoglycoside related to Gentamicin and is commonly used as a selective agent for eukaryotic cells. 硫酸ネオマイシンアナログとして、80Sリボソームの機能と真核生物のタンパク質合成を妨げます。 一般的な哺乳類発現ベクターで用いられる優性で作用する耐性遺伝子(neor)には、トランスポゾンTn601 (903)またはTn5に由来します。 Geneticin®選択試薬を含む培地で成長すると、これらの抵抗性マーカーを発現する哺乳類細胞のステーブルのコロニーが10から14日で生成します。
ご使用のG-418の純度?
効果を上げるためには、選択試薬は信頼性が高く、高純度で、性質が一貫している必要があります。 哺乳類細胞培養でこれらの品質を提供できるG-418試薬は、ほぼ20年にわたって究極の標準とみなされているGeneticin® selective antibioticのみです。 他のメーカーのG-418製品に比べて、Geneticin®抗生剤は純度が高いため、少ない使用量で大きな選択圧を作り出すとともに、混入物質からの毒性を最低限に抑えることができます。
G-418製品を評価する際には、作用強度を検討するだけではなく、 純度と作用範囲にも目を向けてください。 これらの3つの特性を考慮することにより、お客様のG-418の真の評価が可能になります。
G-418製品を評価する際には、作用強度を検討するだけではなく、 純度と作用範囲にも目を向けてください。 これらの3つの特性を考慮することにより、お客様のG-418の真の評価が可能になります。
純度。 The purity of Geneticin® selection agent is consistently greater than 90%, as determined by HPLC; far higher than any other supplier. これは、以下を意味します:
- 他のG-418製品より15～30％Geneticin®濃度が低くても同等のセレクション結果が得られます。
- 低純度G-418製品の代わりにGeneticin®を使用することで、生存クローンコロニーがより早く生じ、外観がより健康な細胞が得られることが期待できます。
力価2» 力価は、純度の同義語としてよく使われます。ただし、力価がQCデータで使用される場合は、純度との関連はありません。 力価の値はバクテリアの増殖抑制で計測してます。
従って、異なる供給会社の製品間における力価を比較するのは、哺乳類細胞の選択については、あまり意味のある規格となりません。
- 他のサプライヤーのG-418製剤に一般的に混入しているゲンタマイシンは、細菌アッセイの効力を高めますが、ホ乳類細胞の選択性には影響しません。
- 不純なG-418中の他の細菌汚染物は哺乳類細胞に毒性があり、結果的にED50値を下げる可能性があります。
従って、異なる供給会社の製品間における力価を比較するのは、哺乳類細胞の選択については、あまり意味のある規格となりません。
ED50 アッセイ。 This is a true measure of eukaryotic growth selectivity as determined on reference NIH3T3 cells. 純度が高いと、通常、ED
50 値が高くなります。
つまり、新しいロットのGeneticin®購入する際、理想的な抗生物質の濃度に再度最適化する必要がありません（ただし他のいかなる培地変更もない場合)。 他の供給会社のG-418 において異なるロットに広範囲なED 50が表示される場合は、各ロットに対し再度最適化を行う必要があります。 Geneticin® のロット間の一貫性は十分に高いので、ロット間の選択性能の差異は微小です。
- 有毒不純物はED50値を下げるため、抗生物質選択の範囲を狭めます。
- サプライヤーのED50 が一貫すると、哺乳類細胞培養におけるロット間の再現性が確保されます。
つまり、新しいロットのGeneticin®購入する際、理想的な抗生物質の濃度に再度最適化する必要がありません（ただし他のいかなる培地変更もない場合)。 他の供給会社のG-418 において異なるロットに広範囲なED 50が表示される場合は、各ロットに対し再度最適化を行う必要があります。 Geneticin® のロット間の一貫性は十分に高いので、ロット間の選択性能の差異は微小です。
純度。 The purity of Geneticin® selection agent is consistently greater than 90%, as determined by HPLC; far higher than any other supplier. これは、以下を意味します:
- 他のG-418製品より15～30％Geneticin®濃度が低くても同等のセレクション結果が得られます。
- 低純度G-418製品の代わりにGeneticin®を使用することで、生存クローンコロニーがより早く生じ、外観がより健康な細胞が得られることが期待できます。
力価2» 力価は、純度の同義語としてよく使われます。ただし、力価がQCデータで使用される場合は、純度との関連はありません。 力価の値はバクテリアの増殖抑制で計測してます。
従って、異なる供給会社の製品間における力価を比較するのは、哺乳類細胞の選択については、あまり意味のある規格となりません。
- 他のサプライヤーのG-418製剤に一般的に混入しているゲンタマイシンは、細菌アッセイの効力を高めますが、ホ乳類細胞の選択性には影響しません。
- 不純なG-418中の他の細菌汚染物は哺乳類細胞に毒性があり、結果的にED50値を下げる可能性があります。
従って、異なる供給会社の製品間における力価を比較するのは、哺乳類細胞の選択については、あまり意味のある規格となりません。
ED50 アッセイ。 This is a true measure of eukaryotic growth selectivity as determined on reference NIH3T3 cells. 純度が高いと、通常、ED
50 値が高くなります。
つまり、新しいロットのGeneticin®購入する際、理想的な抗生物質の濃度に再度最適化する必要がありません（ただし他のいかなる培地変更もない場合)。 他の供給会社のG-418 において異なるロットに広範囲なED 50が表示される場合は、各ロットに対し再度最適化を行う必要があります。 Geneticin® のロット間の一貫性は十分に高いので、ロット間の選択性能の差異は微小です。
- 有毒不純物はED50値を下げるため、抗生物質選択の範囲を狭めます。
- サプライヤーのED50 が一貫すると、哺乳類細胞培養におけるロット間の再現性が確保されます。
つまり、新しいロットのGeneticin®購入する際、理想的な抗生物質の濃度に再度最適化する必要がありません（ただし他のいかなる培地変更もない場合)。 他の供給会社のG-418 において異なるロットに広範囲なED 50が表示される場合は、各ロットに対し再度最適化を行う必要があります。 Geneticin® のロット間の一貫性は十分に高いので、ロット間の選択性能の差異は微小です。
表1: Comparison of Geneticin® specifications with alternative G-418 suppliers.
| 仕様 | Invitrogen | サプライヤA | サプライヤB | Geneticin®の利点 |
| Purity (HPLC) | >90-93% | 66-75% | 65-82% | 有意に高純度 |
| 各サプライヤーの表示力価 (µg/mg) | 718-735 | 712-724 | 673-735 | より厳密な力価検定 |
| 当社による実測力価(µg/mg) | 718-735 | 640-659 | 621-677 | 実測力価が一貫して高い |
| ED50 検定 (µg/ml) | 2450-2700 | 1350-3100 | 600-2350 | ロット間の信頼性 |
表1 Multiple lots of G-418 from two different suppliers were analyzed according to Invitrogen raw material QC protocols for Geneticin®. 供給業者AおよびBから入手したG-418の分析結果は、測定されたすべてのパラメーターについて、提供された製品のカタログに記載された値と実際の有効性の矛盾など、大きな差異が認められました。 再テストした有効性の値と供給業者が主張する値との相違は、G-418 の基準ロットおよび分析手順の相違によるものである可能性があります。
図1. Geneticin® displays greater purity than G-418 from alternative suppliers.
図1 Comparison of HPLC data of Geneticin® with selected lots of G-418 from Supplier A and Supplier B. Samples were prepared and analyzed according to the procedure published in Clinical Chem. (1978), Vol. 24, No.11, p1940.