1ステップおよび2ステップの逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)

One-Step RT-PCRは1本鎖cDNA合成（逆転写）反応とPCR反応を同じチューブでまとめて行う方法です。反応セットアップが簡単で、コンタミネーションのリスクが低くなります。サンプル数が多い場合はOne-Step RT-PCRの方が簡単です。cDNA合成ステップとPCRステップの間でチューブを開かないため、キャリーオーバーのコンタミネーションを最小限に抑えることができます。cDNA試料全体を増幅することで、One-Step RT-PCRはわずか0.01 pgの全RNAからでも感度を高めることができます。One-Step反応は配列特異的プライマーでのみ使用できます。

Two-Step PCRは、トータルRNAまたはpoly(A)+ RNAを逆転写酵素でcDNAへ逆転写することから始まります。1本鎖合成後にcDNAを別のチューブに移し、続いて次のPCRを行います。Two-StepのRT-PCRは、単一のRNAサンプルから複数のメッセージを検出する場合に有用です。One-Step RT-PCRシステムに比べてプライマーやポリメラーゼを自由に組み合わせられます。Two-Step RT-PCRを行うときには、オリゴ（dT）、ランダムヘキサマー、遺伝子特異的プライマーのいずれかを使用し、PCRはPlatinum® Taq DNA Polymerase、Platinum® Taq DNA Polymerase High Fidelity、または任意のPCR酵素で行います。