すべてのRNAi実験で正しいコントロールを使用することで、研究を加速し、解析を効率化し、結果に確信を得ることができるようになります。 Invitrogenは、RNAi実験向けに広いコントロールの選択肢を用意しています。

Stealth RNAi™ siRNAまたは標準siRNAをきわめて効率的に導入することは、十分にターゲット遺伝子をノックダウンさせるために欠くことができません。 トランスフェクションを最適化し、実験変動をコントロールし、強力なトランスフェクション試薬を使用することで、RNAiの成功の可能性が格段に向上します。 ポジティブコントロールとネガティブコントロールを使用することで、実験を評価することもできます。

トランスフェクション条件を最適化する

どんなRNAi実験でも良い結果を得るには、トランフェクション効率が高いことが重要です。 新しい細胞株でRNAi実験を始める前に、トランスフェクションの実験条件について最適化することをおすすめします。 インビトロジェンは、ウェブサイト上に無料の トランスフェクションプロトコルをたくさん置いていますが、実験条件がそれぞれ異なりますので、プロトコルを自分のニーズにあわせて調整する必要があるかもしれません。

細胞集団で遺伝子のノックダウンを測定するには、高いトランスフェクション効率であることが非常に重要になります。 トランスフェクション効率がわずかに下がっただけでも、実験サンプルにおける機能の違いを認識できるかどうかが左右されます。

トランスフェクション条件の最適化のための留意点：

  • RNAi2本鎖が細胞に導入されたことを確認する蛍光オリゴヌクレオチド
  • トランスフェクションの毒性をモニターする死細胞染色液
  • 導入された細胞や死細胞を測定するための核染色試薬
  • ポジティブおよびネガティブStealth RNAi™ siRNA、または、各トランスフェクションのノックダウンレベルを測定するためのスタンダードsiRNAコントロール


See below for a table of Invitrogen kits containing these 4 controls.
Once you have optimized the transfection conditions, we also recommend using these four types of controls in every RNAi experiment to monitor experiment-to-experiment transfection variation. コントロールの使用方法、RNAi実験の計画の立て方など、さらに詳しい情報は、インビトロジェンのRNAi実験成功への7ステップをお読み下さい。

表1 - Stealth RNAi™ siRNA実験のコントロール

表1は、Stealth RNAi™ siRNA を使用するトランスフェクション時に利用できるコントロールを含んだ Invitrogen 社製キットをリストアップしたものです。 Control 1-4は、上記の箇条書きの項目で説明されたコントロールを指し、RNAi 実験での毎回の使用をお勧めしています。

製品名 キット内容　
  蛍光タグ付きオリゴ 死細胞染色 核染色 Positive, negative, & reporter controls We recommend
BLOCK-iT™ Fluorescent Oligo
(2013
13750062)		Green BLOCK-iT™ Fluorescent Oligo    
BLOCK-iT™ Alexa Fluor® Red Fluorescent Control
(14750100)		BLOCK-iT™ Alexa Fluor® Red Fluorescent Control    
Dead Cell Stain
(E1169)		 ethidium homodimer-1 (EthD-1)   

Nuclei Stain
(H3570)

  Hoechst 33342  
BLOCK-iT™ Transfection Kit
(13750070)		Green BLOCK-iT™ Fluorescent Oligo   Lipofectamine™ 2000 トランスフェクション試薬
BLOCK-iT™ Transfection Optimization Kit (human)
(13750047)		Green BLOCK-iT™ Fluorescent Oligoethidium homodimer-1 (EthD-1)Hoechst 33342Scrambled Stealth RNAi™ siRNA duplex (negative)
Human p53 Stealth RNAi™ siRNA duplex (positive)		 
BLOCK-iT™ RNAi Basic Control kit (human)
(K4911-00)		Green BLOCK-iT™ Fluorescent Oligoethidium homodimer-1 (EthD-1) Scrambled Stealth RNAi™ siRNA duplex (negative)
Human p53 Stealth RNAi™ siRNA duplex (positive)		Lipofectamine™ 2000 Transfection Reagent,
LUX™ Primer sets: human p53 and human GAPDH
Stealth RNAi™ siRNA negative control lo GC
(12935-200)		   スクランブル Stealth RNAi™ siRNA デュプレクス (36% GC含量) （ネガティブコントロール） 
Stealth RNAi™ siRNA negative control med GC
(12935-300)		   スクランブル Stealth RNAi™ siRNA デュプレクス (48% GC含量) （ネガティブコントロール） 
Stealth RNAi™ siRNA negative control hi GC
(12935-400)		   スクランブル Stealth RNAi™ siRNA デュプレクス (68% GC含量) （ネガティブコントロール） 
Stealth RNAi™ siRNA negative control kit
(12935-100)		   キットには、低、中、高GC含量の スクランブル配列の Stealth RNAi™ siRNA コントロール（ネガティブ）を含むキット 
Stealth RNAi™ siRNA GAPDH Positive Control (human)
(12935-140)		    Stealth™ GAPDH duplex (positive) 
Stealth RNAi™ siRNA Actin Positive Control (human)
(12935-141)		    Stealth™ アクチンデュプレクス（ポジティブ） 
Stealth RNAi™ siRNA Cyclophilin B Positive Control (human)
(12935-142)		    Stealth™ サイクロフィリン （ポジティブコントロール） 
Stealth RNAi™ siRNA GFP Reporter Control
(12935-145)		    RNAi GFP レポーターデュプレクス（レポーター） 
Stealth RNAi™ siRNA Luciferase Reporter Control
(12935-146)		    RNAi ルシフェラーゼレポーターデュプレクス（レポーター） 
Stealth RNAi™ siRNA B-lactamase Reporter Control
(12935-148)		    RNAi B-ラクタマーゼ デュプレクス（レポーター） 
Scrambled negative control
(BLOCK-iT™ RNAi Designer )		   Custom scrambled Stealth RNAi™ siRNA control (negative) using BLOCK-iT™ RNAi Designer 

表2 - 標準siRNA実験のコントロール

表2は、一般的な siRNA を使用するトランスフェクション時に利用できるコントロールを含んだ Invitrogen 社製キットをリストアップしたものです。 Control 1-4は、上記の箇条書きの項目で説明されたコントロールを指し、RNAi 実験での毎回の使用をお勧めしています。
製品名 キット内容　 カタログ番号
  コントロール 1) 蛍光 タグ付きオリゴ コントロール 2) 死細胞染色 コントロール 3) 核染色 コントロール 4a) ネガティブコントロール コントロール 4b) ポジティブコントロール トランスフェクション試薬  
BLOCK-iT™ Fluorescent OligoGreen BLOCK-iT™ Fluorescent Oligo     2013
13750062
BLOCK-iT™ Alexa Fluor® red fluorescent controlBLOCK-iT™ Alexa Fluor® red fluorescent control     14750-100
死細胞染色 ethidium homodimer-1 (EthD-1)    E1169
核染色  Hoechst 33342   H3570
BLOCK-iT™ Transfection kitGreen BLOCK-iT™ Fluorescent Oligo    Lipofectamine™ 200013750070
スクランブル配列のネガティブコントロール   Custom design your scrambled siRNA control using the BLOCK-iT™ RNAi Designer  ブロックは™ 、 RNA干渉デザイナー

サポートノート

注1）ネガティブコントロールは簡便なネガティブコントロールです。もし対象となる細胞や遺伝子に影響がありましたら、
ステルス検索サイト（BLOCK-iT RNAi Designer）で各ステルスに対して表示されるcontrolをご使用ください。
マイクロアレイレベルのテストは行っていないので、簡便なコントロールとしてご利用ください。（2006年5月31日）
新ネガティブコントロール（製品名に＃2、＃3が付いたもの）は、オフターゲット効果による影響をより抑えるために、さらにSmith-Waterman（ミスマッチ）検索 を行って選択しました。(2007年5月29日）
#2と#3の違いは配列だけです。各GC含量の3配列は異なり、重複しません。
注2）コントロールの配列情報はご提供できません。