RNAi 用 BLOCK-iT™ shRNA ベクター

従来の small/short hairpin RNA（shRNA）配列は通常、Pol III プロモーターを含むベクターから細胞核の中に転写されます。 ループで繋がったターゲット遺伝子のセンスおよびアンチセンス配列を含む shRNA は核から細胞質に移動し、そこで Dicer が shRNA を small/short interfering RNAs（siRNA）に加工します。 この時点でタンパク質発現のノックダウンに進みます。 当社は、改良ベクターテクノロジーである BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Vectors を提供しており、これは従来の shRNA ベクターと比較してより多くの利点を有しています。

当社は、shRNA ベクターを作成するためのシンプルで効率化したアプローチを実現する 2 種類のキットを提供しています。 BLOCK-iT™ U6 RNAi Entry Vectors は shRNA の構成的発現を実現し、BLOCK-iT™ Inducible H1 Entry Vectors は、テトラサイクリンによりshRNA 配列の発現を誘導するためのプロモーターを使用しています。 目的の shRNA を含んでいる BLOCK-iT™ エントリーベクターを哺乳細胞に直接トランスフェクションするか、shRNA カセットを他の BLOCK-iT™-DEST ベクター（アデノウイルスまたはレンチウイルスのデリバリー用ベクターを含む）に容易に導入できます。

shRNA ベクターを簡単に 5 分で作成するには BLOCK-iT™ Inducible H1 RNAi Entry Vector Kit をご使用ください。 BLOCK-iT™ Inducible H1 RNAi Entry Vector Kit を使用すると、エントリークローンを直接トランスフェクションでき、 Zeocin™ を使用して安定株のな選別ができます。 テトラサイクリン抑制遺伝子を発現している細胞株では、目的の shRNA 発現を細かくコントロールできるため、以下のことが可能です。

• RNAi 反応の開始をコントロールして、経時的変化を観察
• shRNA 発現導入を終結させることにより、ターゲット遺伝子の回収時に表現型変化を研究
• 目的遺伝子が細胞の生存または増殖に必要であっても、安定したトランスフェクション細胞株の機能損失を研究

または、一過性の shRNA 発現が必要な場合は、BLOCK-iT™ U6 RNAi Entry Vector Kit を使用して、多数の哺乳細胞タイプで shRNA 配列を導入および発現できます。

shRNA カセットを一つまたは複数の BLOCK-iT™ DEST ベクターに導入して、shRNA を高効率で哺乳細胞にデリバリーおよび発現できます。 各デスティネーション（DEST）ベクターは Gateway® テクノロジーによりデザインされているため、RNAi カセットを BLOCK-iT™ pENTR™ ベクターから BLOCK-iT™-DEST ベクターへ 1 時間以内に導入できます。 細胞タイプや選別ニーズに合わせて使用するベクターをお選びください。 最適な BLOCK-iT™ ウイルスベクターを選択することで、トランスフェクションが困難な細胞や初代細胞、非分裂性の細胞タイプなど、ほぼすべてのタイプの哺乳細胞に導入できます。

• pLenti4/BLOCK-iT™-DEST：テトラサイクリン制御誘導系に対応する、Zeocin™ 選別マーカー付きレンチウイルス
• pLenti6/BLOCK-iT™-DEST：構成的 shRNA 発現細胞の迅速で効率的な選別を可能とする、ブラストサイジンマーカー付きレンチウイルス
• pAd/BLOCK-iT™-DEST：シャトルベクターやその他の面倒なメソッドを必要とせず、アデノウイルスの効率的で容易な生殖に使用

速やかにトランスフェクションできる細胞タイプを使用している場合は、長期の shRNA 発現用に pBLOCK-iT™6- DEST ベクターを選択できます。 Geneticin® または ブラストサイジンでのセレクションには、shRNA カセットをこれらのベクターに導入します。

BLOCK-iT™ shRNA ベクター表