開始から完了までを網羅した革新的なウェスタンブロッティング

iWesternコンポーネントバンドルの4つのコンポーネントの紹介

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扱いが難しく時間のかかりがちなウェスタンブロットという手法から望ましい結果を引き出すことは、数十年来の課題でした。Invitrogen iWesternワークフローによるウェスタンブロッティングの効率化は、このような課題に対する独創的なアプローチです。iWesternワークフローに用いられるすべての装置は、ウェスタンブロットの優れた結果を少ない作業時間で取得できるよう、細心の注意を払って開発されています。iWesternワークフローの中核となる4つの革新的なウェスタンブロッティング装置は、処理効率、再現性、性能に重点を置いて設計されています（図1）。

タンパク質の分離

Invitrogenミニゲルタンクは、インテリジェントに設計されたタンパク質電気泳動用タンクです。前方を向いたウェル構成を有するサイドバイサイド設計のため、サンプルのローディングが容易で、電気泳動中に両方のゲルを同時に可視化することも可能です。2つの独立したバッファータンクを備えているため、単一ゲルのみで実行する場合、必要な泳動バッファーが少なくて済みます。ミニゲルタンクは、さまざまなフォーマットと化学的特性を備えた180種類を超えるゲルに対応し、目的の実験に最適なゲルを選択できるという柔軟性をもたらします。

当社のタンパク質ゲルウェルカムパックは、それぞれにミニゲルタンクが含まれています（図2）。タンパク質ゲルウェルカムパックには、2箱のゲル（ゲルケミストリーを選択可）と、電気泳動に必要なバッファーが含まれています。標準のiWesternワークフローバンドルには、Invitrogen Boltゲルウェルカムパックが含まれており、ウェスタンブロッティングで最適なパフォーマンスを発揮するBis-Trisゲルケミストリーが採用されています。iWesternワークフローバンドルはカスタマイズも可能です。標的タンパク質の存在量、サイズ、およびダウンストリームアプリケーションに合わせて、別のタンパク質ゲルウェルカムパックとゲルケミストリーを選択できます（表1）。

タンパク質の転写

iBlot 3ウェスタンブロット転写システムは、実績あるiBlotテクノロジーと、優れたパフォーマンスと利便性をもたらす革新的で堅牢な新設計の組み合わせにより構成されています。iBlot 3システムは、電源が内蔵され、すぐに使えるようにパッケージ化された転写スタックを備えた、まさに自己完結型のプラグ・アンド・プレイシステムです。セットアップ、撤収、後片付けは、ウェットタンク搬送に必要な面倒で手間のかかる手順と比較して、わずか数分で完了します。 

2つの転写ステーションは独立して制御されるため、2つのミディまたは4つのミニゲル転写を最短3分で同時実行できます。転写効率に優れたこのデバイスには冷却機能も組み込まれているため、転写の一貫した再現性も確保されます。

タンパク質の検出

Invitrogen iBindウェスタンデバイスは、面倒なウェスタンブロット処理工程の多くを自動化し、ブロット間の一貫性を向上させる、シンプルで非電源の装置です。オリジナルのiBindウェスタンデバイスが対応できるのは同時に1つのミニブロットの処理までですが、iBind Flexウェスタンデバイスは最大で1つのミディブロット、2つのミニブロット、または6つの垂直カットストリップブロットの処理に対応します。どちらのシステムも、発色、化学発光、蛍光による検出プロトコルに対応しています。

一次抗体、二次抗体、洗浄溶液をロードするだけで、その後は装置を離れることができます。Sequential lateral flowテクノロジーが採用されているため、トレイ、タイマー、シェーカーは不要です。イムノブロッティングプロセス全体が3時間以内に完了し、使用する一次抗体は従来のメソッドよりも最大80%削減されます。標準のiWesternワークフローバンドルにはiBindスターターキットが付属しており（図4）、この中には最初の開始時に必要な消耗品が含まれていますが、スループットの向上が必要な場合は、カスタマイズしてiBind Flexスターターキットを含めることも可能です。

タンパク質のイメージングと解析

Invitrogen iBrightイメージングシステム（図5）は、高性能なオールインワン装置であり、ウェスタンブロットやゲルからのデータ分析と画像のキャプチャに対応しています。パワフルな9.1メガピクセルカメラ（図6）を始め、特許取得済みのSmart Exposure™取得テクノロジー、Thermo Fisher Cloudへの接続性、操作性に優れたインターフェース、一連の自動化機能を完備したiBrightイメージングシステムは、研究者の経験レベルを問うことなく、ウェスタンブロットイメージングの迅速かつ簡単に処理を可能にします。

利用可能な2つのiBright装置のうち、iBright CL1500システムは、化学発光ウェスタンブロットと染色されたタンパク質および核酸ゲルのイメージングとドキュメント化を想定しています。もう一方のiBright FL1500システム（図5）は、iBright CL1500システムと同じイメージングモードに加え、5チャンネルの蛍光ブロットイメージング機能を、可視および近赤外での励起と発光チャンネルの両方で利用できます。標準のiWesternワークフローバンドルには、iBright FLイメージングシステムが含まれています。

iWesternワークフローによるウェスタンブロットプロトコルの最新化

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