Qubit 단백질 어세이

신속하고 정확한 단백질 정량

Qubit 단백질 어세이 키트는 단백질 정량을 용이하게 하는 동시에 정확한 정량을 제공하도록 설계되었습니다. Qubit 단백질 어세이는 10-15분의 실온 인큐베이션만 필요하므로 긴 인큐베이션 기간 또는 온도를 높일 필요가 없습니다.

두 키트를 함께 사용할 경우, 중첩 농도 범위 문제가 해결되어 12.5 μg/mL-20mg/mL 사이의 초기 시료 농도에 대해 정확한 결과를 제공하며 단백질간 변동이 낮게 나타납니다. 환원 시약(DTT, β-mercaptoethanol), 염, 자유 뉴클레오티드, 아미노산, 용매, DNA, 계면활성제(Qubit 단백질 BR 어세이에 포함) 같은 일반 오염물질은 어세이에서 허용가능합니다. 다른 오염 물질은 이 절차를 약간 수정해야 할 수도 있습니다.

참고: Qubit 단백질 어세이는 Qubit 4 및 Flex 형광측정기에서 모두 실행할 수 있지만 Qubit 단백질 BR 어세이는 Qubit 4 모델에서만 실행할 수 있습니다.

단백질 정량 어세이 개요

특징	Qubit Protein BR Assay	Qubit Protein Assay
적합한 용도	광범위한 단백질 농도 및 유형	<100µg/mL의 희석 시료 테스트
호환 플랫폼	Qubit 4 형광측정기	Qubit Flex, Qubit 4 형광측정기*
특징	2점 표준 곡선을 사용한 간단하고 빠른 분석	3점 표준 곡선을 사용한 간단하고 빠른 분석
필요한 시료 부피	10 또는 20µL	1–20 μL
호환성	계면활성제 환원제(예: TCEP, DTT)	환원제(예: TCEP, DTT)
비호환성	글리신	계면활성제(예: SDS, Tween 20, Triton X-100)
초기 시료 범위	100µg/mL-20mg/mL	12.5µg/mL-5mg/mL
정량 범위	1-400µg	0.25-5µg
카탈로그 번호:	A50668 (100 assays) A50669 (500 assays)	Q33211 (100 assays) Q33212 (500 assays)

*Qubit 단백질 어세이는 이전 Qubit 모델, Qubit 2 및 Qubit 3에서도 지원됩니다.

넓은 동적 범위

Bradford 어세이와 같은 표준 어세이와 비교할 때 Qubit 단백질 어세이의 넓은 동적 범위를 사용하여 대부분의 시료를 용매없이 사용할 수 있습니다(희석하지 않음). 이를 통해 기존 단백질 정량 방법에 수반되는 추측 및 희석 단계가 필요하지 않습니다.

Qubit 단백질 어세이는 Bradford 어세이와 같은 표준 단백질 정량 어세이보다 훨씬 넓은 동적 범위를 제공합니다. Qubit 단백질 어세이는 12.5µg/mL까지 단백질을 정확하게 정량할 수 있으며, Qubit 단백질 BR 어세이(Qubit 4 형광측정기와 호환)는 최대 20,000µg/mL의 정량 범위를 제공합니다.

간단하고 빠른 정량

Qubit 단백질 어세이는 일반적으로 단백질 정량을 위해 5-7점 표준 곡선이 필요한 기존 분석법과는 달리, 2개 또는 3개의 표준만 준비하므로 쉽게 수행할 수 있습니다.

Qubit 단백질 BR 어세이 워크플로우

Qubit 단백질 어세이 워크플로우

정확한 단백질 정량

단백질은 구성 및 구조에서 다양합니다. 아미노산 서열, 등전점(pI), 2차 구조 및 측면 사슬 또는 보결 분자단의 차이로 인해 정량에 차이가 있을 수 있습니다. Qubit 단백질 BR 어세이는 Bradford 어세이와 같은 기존 분석과 비교하여 낮은 단백질-단백질 가변성으로 정확한 단백질 정량을 제공합니다.

단백질 발현을 연구하기 위해 웨스턴 블랏 분석을 위한 전기영동 젤(gel)을 로딩할 때 정확한 단백질 로딩은 필수적입니다. 이 실험에서는 다섯 개의 서로 다른 세포 용해물에 대해 10-µg 단백질 로드(load)를 측정하기 위해 Qubit 단백질 BR 어세이 및 기존 Bradford 단백질 어세이를 사용했습니다. iBright FL 1500 이미징 시스템에서 총 단백질 레인 로드(total protein lane loads)를 추정하기 위해 No-Stain Protein Label Reagent가 사용되었습니다. Qubit 단백질 BR 어세이는 로드(load)간 변동 계수(CV) 11%로 용해물의 단백질 농도를 정확하게 측정했지만, Bradford 어세이는 CV가 28%로 높은 가변성을 보였습니다.

복잡한 단백질 혼합물에서 단백질 로드(load)를 정확하게 측정

Qubit 단백질 BR 어세이 및 표준 Bradford 어세이를 사용해 여러 포유류 세포 유형으로부터의 용해물 농도를 측정하였습니다: 293T, A549, HepG2, HeLa, iPSCs. 용해물은 Invitrogen NuPAGE 4–12% Bis-Tris 미니 단백질 젤 상에서 분리되었고 No-Stain Protein Labeling Reagent로 라벨링되었습니다. (A) 젤 이미지는 iBright FL1500 이미징 시스템에서 획득했고 (B) 정규화 계수는 Invitrogen iBright 분석 소프트웨어를 사용해 측정되었습니다. Qubit 단백질 BR 어세이의 CV는 Bradford 어세이에 비해 상당히 낮았습니다.

버퍼 호환성 표

Qubit 단백질 어세이는 일반 버퍼 성분과 호환됩니다.

오염물질	Qubit 단백질 BR 어세이	Qubit 단백질 어세이
오염물질	시료 내 호환 농도
β-Mercaptoethanol	1mM	10mM
Acetonitrile	20%
Ammonium sulfate	200mM	50mM*
Bicine	100mM
Borate (50 mM pH 8.5)	무용매
B-PER reagent	무용매
CHAPS	5%
Carbonate-bicarbonate	무용매
DTT	5mM	10mM*
DMSO	10%
EDTA	50mM	10mM
Glucose	1M
Glycerol	10%	10% *
Guanidine-HCl	4M
Imidazole	200mM	12.5mM
I-PER	무용매
Mem-PER	무용매
MES	125mM
MOPS	100mM
M-PER	무용매
Sodium acetate	100mM
Sodium azide		10mM
Sodium chloride	5M	200mM*
NE-PER (CER)	무용매
NE-PER (NER)	무용매
NP-40	5%	Ø
Phosphate-buffer saline (PBS), pH 7.4	무용매	10mM KPO₄, 150mM NaCl*
Potassium phosphate, pH 7.4		5mM
PMSF	1mM
RIPA	무용매
SDS	5%	0.1%
Sucrose	20%	500mM
T-PER	무용매
트리신(Tricine)	50mM
Tris-buffer saline (TBS)	무용매
Tris-Glycine, pH 8.0	Ø
Tris-Glycine SDS, pH 8.3	Ø
Tris-HCl	500mM
Tris-HEPES SDS, pH 8.0	무용매
Triton X-100	5%	Ø
Tween 20	3%	Ø
Urea	3M
Y-Per	Ø
GPCR Extraction & Stabilization Reagent	1:2
Cell Surface Protein Isolation Kit	무용매

*허용 가능한 결과이지만 표준 곡선이 약간 왜곡됩니다. 최상의 결과를 위해 동일한 양의 오염물질을 표준 시료에 첨가합니다.

방법. Qubit 단백질 BR 어세이 및 Qubit 단백질 어세이는 일반적으로 사용되는 버퍼과 오염물이 포함된 1,000µg/mL BSA 시료와 함께 지침에 따라 수행되었습니다. 어세이는 3회 수행되었으며, RFU 값은 0.9% NaCl, 0.05% NaN₃의 BSA 값과 비교되었습니다. 물질의 존재로 인한 단백질 농도 추정의 오차가 10% 미만인 경우 지정된 농도의 시험된 물질과 호환되는 것으로 간주하였습니다. 나열된 농도는 단백질 시료의 실제 농도를 나타냅니다. Ø는 테스트한 최저 농도에서는 호환되지 않는 화합물을 나타냅니다. 빈 필드는 해당 어세이로 화합물을 테스트하지 않은 것을 나타냅니다.

호환성 검사에 사용된 버퍼 조성

버퍼	조성
Sodium carbonate-bicarbonate, pH 9.4	0.2 M sodium carbonate-bicarbonate, pH 9.4
PBS(Phosphate-buffered saline)	100mm sodium phosphate, 150mm NaCl, pH 7.2
RIPA buffer	25mM Tris, 150mM NaCl, 1% DOC, 1% NP-40, 0.1% SDS, pH 7.6
TBS(Tris-buffered saline)	25mM Tris, 150mM NaCl, pH 7.4
Tris-Glycine, pH 8.0	25mM Tris, 192mM glycine, pH 8.0
Tris-glycine-SDS, pH 8.3	25mM Tris, 192mM glycine, 0.1% SDS, pH 8.3
Tris-HEPES-SDS	100mM Tris, 100mM HEPES, 3mM SDS