二代测序 (NGS)

Thermo Scientific T4 DNA Polymerase—T4 DNA 聚合酶是一种用于补平5‘ 突出末端以形成平末端的酶。它是模板依赖的 DNA 聚合酶，可催化单链 DNA 的5´–3´合成。该酶具有 3´–5´ 核酸外切酶活性，但缺乏 5´–3´ 核酸外切酶活性。T 4DNA 聚合酶在单链 DNA 上比在双链 DNA 上显示出更强的 3´–5´ 核酸外切酶活性，其核酸外切酶活性是DNA polymerase I, E.coli和 Klenow 片段的200倍以上。

Invitrogen DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment——这种 DNA 聚合酶可用于补平 5´ 突出末端以形成平末端，以及去除 3´ 突出末端。它缺乏完整 DNA 聚合酶 I 的 5´–3´ 核酸外切酶活性，但具有 5´–3´ DNA 聚合酶和 3´–5´ 核酸外切酶活性。

dNTP——为了使用的方便性和灵活性，我们可提供多种形式、配方和浓度的高质量核苷酸。我们的 dNTP 高度稳定，纯度大于99%，核苷酸中不含核酸酶、人类和E.coliDNA。

Thermo Scientific T4 Polynucleotide Kinase——该酶在寡核苷酸上添加5´-磷酸基，方便后续进行连接反应。T4多核苷酸激酶（T4 PNK）催化γ-磷酸从 ATP 转移到单链或双链 DNA 和 RNA 、寡核苷酸或核苷3’-单磷酸（正向反应）的5‘-OH 基团上。该反应是可逆的。在存在 ADP 的情况下，T4多核苷酸激酶表现出5´-磷酸酶活性，并催化5´-P-寡聚-多聚核苷酸与 ATP 之间的磷酸基团交换（交换反应）。这种酶也是一种3' -磷酸酶。

Thermo Scientific Klenow, exo- ——Klenow, exo- 是 DNA polymerase I 的大片段。其具有 5´–3´ 聚合酶活性，但缺乏 DNA 聚合酶 I 的 3´–5´ 和 5´–3´ 核酸外切酶活性。该酶的 3´–5´ 核酸外切酶活性通过在 3´–5´ 核酸外切酶活性位点进行突变而消除。

dATP——我们提供各种浓度、配方和体积的高质量 dATP，以提供最大的便利性和灵活性。我们的 dATP 具有高度稳定性，纯度超过99％，并且不含核酸酶、人类和E.coli DNA。

Thermo Scientific T4 连接酶——该酶催化双链 DNA 或 RNA 中比邻的5'-磷酸基和3'-羟基末端之间磷酸二酯键的形成。该酶可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂合体中的单链缺口。其还可以连接粘性末端或平末端 DNA 片段，但是对单链核酸没有活性。

在大多数情况下，您制备的文库在测序之前需要进行扩增。 由于 NGS 是一种高灵敏 技术，因此建议您使用高保真 DNA 聚合酶，以确保模板 无错误，从而可以进行最准确的测序。Thermo Scientific 和 Invitrogen 高保真 DNA 聚合酶凭借出色的扩增能力和高保真性来扩增DNA 片段，甚至从最困难的模板中也可以准确快速地扩增 PCR 产物。

耐受抑制剂。使用Platinum SuperFi DNA 聚合酶或同类高保真 DNA 聚合酶扩增2 kb 的人类 gDNA 片段 (A—Q5 Hot Start High-Fidelity, B—KAPA HiFi HotStart PCR Kit, C—KOD Hot Start, and D—PrimeSTAR GXL) ，反应混合物中含有1-无抑制剂、2-肝素（0.15 µg / µl）、3-木聚糖（0.5 µg / µl）或4-腐植酸（0.5 ng / µl）。所用分子量标准为ZipRulerExpress DNA Ladder2