所有176种限制性内切酶均使用统一缓冲液

所有176种限制性内切酶均使用统一缓冲液，酶切就是如此简单。

赛默飞FastDigest限制性核酸内切酶是一套用于快速酶切的高级内切酶，是一种由176种限制性内切酶组成的高级酶切系统，统一缓冲液可实现100%的酶活性。具有如下优势：

  • 在5-15分钟内完成酶切
  • 缓冲液与下游应用100%兼容
  • 酶切后可直接上样进行凝胶电泳

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赛默飞FastDigest限制性内切酶具有40余年经验积淀支撑

FastDigest系列内切酶是目前业内最丰富的限制性核酸内切酶产品系列之一。在酶学领域数十年的专业积累、丰富的同裂酶选择、顶级生产设施带来的高纯度酶生产能力，共同助力打造出首款使用统一缓冲液体系的限制性内切酶系统。

FastDigest限制性内切酶的优势

 FastDigest 限制性内切酶传统限制性内切酶
缓冲液体系一种统一缓冲液多达20种缓冲液
双重/多重限制性酶切无拘无束——所有176种酶均使用一种统一缓冲液，且在其中均具有100%活性受缓冲液兼容性限制
反应时间5-15分钟1小时至过夜
酶切后可直接上样进行凝胶电泳是否
下游实验应用100%兼容缓冲液部分兼容
星号活性否是
活性定义在 FastDigest 缓冲液中，1 μL FastDigest 酶可在5至15分钟内切割 1 μg 底物 DNA在酶的最佳缓冲液中，1单位酶可在60分钟内水解 1 μg λDNA

缓冲液具有100%活性

FastDigest绿色缓冲液及FastDigest无色缓冲液是我们独有的酶切缓冲液，对所有FastDigest限制性内切酶都具有100%活性。该缓冲体系可使用任意限制酶组合实现双重和多重酶切。无需连续酶切或更换缓冲液。

5分钟内在FastDigest绿色缓冲液中完成单重、双重和三重酶切

5分钟内在FastDigest绿色缓冲液中完成单重、双重和三重酶切

5分钟质粒DNA酶切比较：

  • 泳道 M：Thermo Scientific GeneRuler Express 分子量标准（货号: SM1553）
  • 泳道1：对照，未酶切的质粒 DNA
  • 泳道2：FastDigest EcoRI
  • 泳道3：FastDigest EcoRI和FastDigest KpnI
  • 泳道4：FastDigest EcoRI、FastDigest KpnI和FastDigest SmaI

缓冲液与下游实验应用100%兼容

DNA/RNA修饰酶，如连接酶、磷酸酶、激酶和嗜温DNA聚合酶在FastDigest无色和FastDigest绿色缓冲液中具有100％活性。因此，在下游应用中使用的酶可以直接加到FastDigest反应混合物中。不需要缓冲液更换或纯化步骤。

DNA/RNA 修饰酶货号在FastDigest绿色缓冲液/FastDigest缓冲液中的活性
DNA 聚合酶 I，大肠杆菌EP0041
EP0042		100%
Klenow 片段EP0051
EP0052		100%
Klenow 片段 (exo-)EP0421
EP0422		100%
T4 DNA 聚合酶EP0061
EP0062		100%
T7 DNA 聚合酶EP0081100%
T4 DNA 连接酶*EL0011
EL0012		75–100%
FastAP 热敏碱性磷酸酶EF0651
EF0652
EF0654		100%
T4 多聚核苷酸激酶EK0031
EK0032		100%

* T4 DNA连接酶活性需要0.5 mM ATP。

FastDigest限制性内切酶能在5-15分钟内完成酶切

使用统一缓冲液在5-15分钟内完成双重和多重酶切：

  • 节省时间和精力，提高酶切通量。
  • 针对不同种类的DNA模板（质粒DNA、PCR产物、基因组DNA）提供相应建议的酶切时间。
  • 快速酶切，无需酶切过夜。
  • 反应时间短，无星号活性。
常规限制性内切酶
连续酶切		FastDigest 限制性内切酶
一种反应混合物
Apal的反应体系构建约2分钟FastDigest ApaI和XhoI的反应体系构建约2分钟
孵育60分钟孵育5分钟
Xhol的反应体系构建约2分钟——
孵育60分钟——
总时间>2小时总时间 7分钟

使用绿色缓冲液，酶切后可直接进行凝胶电泳

5分钟内在FastDigest绿色缓冲液中完成单重、双重和三重酶切

基于方便性考虑，我们开发了FastDigest绿色缓冲液，其与FastDigest无色缓冲液具有同样的性能，但可将酶切反应混合物直接上样进行凝胶电泳。10X FastDigest绿色缓冲液包含密度试剂和两种示踪染料，从而可以实现直接上样电泳。蓝色染料在1%琼脂糖凝胶中的迁移率与3-5 kb DNA片段接近，并在424 nm时出现激发峰；而黄色染料在1%琼脂糖凝胶中的迁移速度稍快于10 bp DNA片段，并在615nm时出现激发峰。

FastDigest 绿色缓冲液

含有FastDigest绿色缓冲液的反应混合物：

  • 泳道1：电泳前，上样至凝胶孔
  • 泳道2：电泳后分离

FastDigest限制性内切酶反应时间短，无星号活性

FastDigest限制性内切酶与FastDigest（无色或绿色）缓冲液结合使用，可消除星号活性：

  • 反应时间短（5-15分钟），无需长时间酶切
  • 统一缓冲液，具有适用于所有酶的最佳pH和盐浓度
  • 优化的酶和甘油浓度

使用常规限制性内切酶，当在较长的反应时间、高酶浓度和高甘油浓度、高 pH 值或低离子强度情况下，可能表现出星号或“松弛”活性。FastDigest限制性内切酶很好的解决了所有这些问题，可在5分钟内实现单重、双重甚至三重酶切，无任何星号活性出现。

5分钟内在FastDigest绿色缓冲液中完成单重、双重和三重酶切

FastDigest限制性内切酶在5分钟内完成质粒DNA的单重和双重酶切，无星号活性迹象

5分钟质粒DNA酶切比较：

  • 泳道1：FastDigest SmaI
  • 泳道2：FastDigest EcoRI
  • 泳道3：FastDigest SmaI 和 FastDigest EcoRI 双酶切
  • 泳道 M：GeneRuler 1 kb Plus DNA 分子量标准（货号: SM1333）
  • 泳道 C：对照，未酶切的质粒 DNA

参考文献

应用文献
使用 FastDigest EcoRI 和 BamHI 限制性内切酶制备 Golden Gate 克隆载体。Wang T, Wang D, Lyu Y, et al.(2018) Construction of a high-efficiency cloning system using the Golden Gate method and I-SceI endonuclease for targeted gene replacement in Bacillus anthracis.J Biotechnol 271:8–16. 
FastDigest BpiI (BbsI) Type IIS 型限制性内切酶用于构建 gRNA。 Kurata M, Wolf NK, Lahr WS, et al.(2018) Highly multiplexed genome engineering using CRISPR/Cas9 gRNA arrays.PLoS ONE 13(9):e0198714. 
FastDigest TaaI 限制性内切酶用于 PCR 产品的 RFLP 分析。Fong WY, Ho CC, Poon WT.(2017) Comparison of Direct Sequencing, Real-Time PCR-High Resolution Melt (PCR-HRM) and PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) Analysis for Genotyping of Common Thiopurine Intolerant Variant Alleles NUDT15 c.415C>T and TPMT c.719A>G (TPMT*3C).Diagnostics (Basel) 7(2):27. 
使用 FastDigest HindIII 限制性内切酶进行 ddPCR 前基因组 DNA的 片段化。 Li B, Kaushik S, Kalinowski P, et al.(2018) Droplet digital PCR shows the D-Loop to be an error prone locus for mitochondrial DNA copy number determination.Sci Rep 8(1):11392. 

相关资源

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