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慢病毒载体生产
针对悬浮培养慢病毒生产进行了优化
Gibco LV-MAX 慢病毒生产体系
- 高滴度—超过1 x 108 TU/mL （未浓缩的LVVs-GFP）
- 可扩展的悬浮培养体系—规格可从96孔深孔板扩展到2L生物反应器
- 无血清—消除了动物源成份及相关的风险
- GMP积极开发计划
Gibco LV-MAX 慢病毒生产体系是首个针对化学成分明确的无血清环境下的悬浮培养慢病毒生产进行过优化，包含最大限度提高生产所需的所有高质量成份的系统。
为改进慢病毒生产而优化的多成份体系
LV-MAX 慢病毒生产体系可提供可扩展、高产量的慢病毒载体生产平台。其基于在LV-MAX生产培养基中培养的HEK 293来源的病毒生产细胞高密度培养物。通过我们先进的脂质体纳米微粒 转染试剂结合新型的慢病毒特异性增强剂和添加剂（图1），调控实现最佳的慢病毒滴滴度。所有成份协同作用，相对于传统的聚乙烯亚胺(PEI)血清培养体系，有助于生成更优良的功能性慢病毒微粒（图2）。上述数据证明，相对于使用不完全的或未经优化的系统，我们的完整体系在提高慢病毒载体(LVV)方面的突出积极影响（图3）。
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图 1.LV-MAX 慢病毒生产体系实验方案概览
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图 2：采用LV-MAX体系的病毒滴度显著提高采用我们的LV-MAX慢病毒生产体系或替代转染试剂和细胞，在30 mL摇瓶之中生产慢病毒。LV293 = Gibco 病毒生产细胞（HEK 293来源的悬浮细胞），293F = Gibco FreeStyle 293-F细胞系，PEI = 聚乙烯亚胺。
以更低的成本实现更高产量的慢病毒生产
相对于基于PEI的系统，LV-MAX体系的贴壁细胞慢病毒产量提高近15倍，悬浮细胞慢病毒产量提高近10倍，且成本下降了50%以上。
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| 目前的生产方法 | 转用LV-MAX体系的节省量* |
|---|---|
| 贴壁PEI | 58% |
| 悬浮PEI | 52% |
| * 采用LV-MAX方法获得1 x 108 TU/mL滴度、采用PEI方法获得1 x 107 TU/mL滴度进行贴壁和悬浮生产时的成本（基于目录价格）和慢病毒载体产量比较。成本考虑因素包括培养基、转染试剂和培养器皿。 | |
图 3.采用LV-MAX慢病毒生产体系，慢病毒产量大幅提升。采用LV-MAX慢病毒生产体系的悬浮细胞慢病毒产量（未过滤）与采用PEI介导的慢病毒载体转染方法的贴壁HEK 293T/FT 细胞和悬浮HEK293细胞慢病毒产量比较。通过转导HT1080细胞并分析GFP阳性细胞进行慢病毒滴度测定。同时展示了带来的成本节省情况。
更自信地规模化扩展
LV-MAX慢病毒生产体系支持在不同的悬浮培养皿中进行稳定的慢病毒生产。您可以根据自己在发现研究早期的需要扩大或缩小自己的规模以实现更高的通量，亦可在维持无血清体系高产量的前提下无缝、高效规模化扩展（图4）。无论何种规模，您均可更自信地开展生产。
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图 4.LV-MAX慢病毒生产体系在HEK 293来源的悬浮细胞之中的可扩展性。采用LV-MAX 慢病毒生产体系，通过96孔深孔板到2 L生物反应器，进行不同体积的慢病毒生产。通过转导HT1080细胞并分析GFP阳性细胞，测定慢病毒滴度；在不同体积规格下，观测到了相似的滴度。
可实现出色的贴壁培养慢病毒生产的先进脂质体纳米微粒技术
Invitrogen Lipofectamine 3000转染试剂是高效、高性价比的慢病毒生产工具。即便是较大或难以包装的基因，通过这种多功能试剂亦可实现高病毒滴度。
Invitrogen Lipofectamine 3000试剂
- 高滴度—涵盖了较大或难以包装的基因
- 作用温和—减少了试剂用量，提高了细胞活力
- 灵活—与我们现有的实验方案兼容
- 性价比高—所需的辅助试剂和人力成本更少
Lipofectamine 3000试剂、Lipofectamine 2000试剂和PEI的平行比较结果显示，Lipofectamine 3000试剂介导的慢病毒生产产量相对于其他转染试剂提高了约5–10倍（图5）。
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图 5.采用Lipofectamine 3000试剂进行的贴壁细胞慢病毒生产。分别将Lipofectamine 3000试剂、Lipofectamine 2000试剂和PEI加入到含HEK 293T/FT细胞的6孔培养板中，获得pLenti6.3/V5-GW/EmGFP和Invitrogen ViraPower慢病毒包装混合物。转导HT1080细胞并分析GFP阳性细胞，测定慢病毒滴度。
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