SPE method development

样品制备的 SPE 方法

固相萃取 (SPE) 方法基于 6 个步骤，示例方法如下所示。如果您需要开发或优化 SPE 方法，此页面上的信息可帮助您轻松着手。在开始开发 SPE 方法之前，请参阅 SPE 固定相选择以确定用于分析物的 SPE 固定相。对于 SPE 方法本身，您可以从头开始或以现有方法开始。

下载 SPE 指南

SPE 方法示例

Six Steps of SPE to a clean extract
化合物尼氟灭酸、尼氟酸 D3 (IS)
基质人血浆
SPESOLA WAX 10mg 1mL 纯化柱 60109-005
活化500µL 甲醇 500µL 水
上样以 0.5mL/min 的流速上样
清洗500µL 25mM 醋酸铵 (NH4 +CH3 COO-) 缓冲水溶液 500µL 甲醇
洗脱500µL 含 2% 氨水 (NH4 OH) 的甲醇，流速为 0.5mL/min 氮吹干燥并在 100µL 2% 甲酸水溶液中复溶

适用于 SOLA 和 SOLAμ 产品的通用 SPE 方法

Thermo Scientific SOLA SPE 纯化柱和孔板技术指南

通用 SOLA 产品方法旨在作为大多数样品萃取方案的起点

 SOLA HRP
反相		SOLA SCX
混合模式阳离子交换剂		SOLA SAX
混合模式阴离子交换剂		SOLA WAX
混合模式弱阴离子交换剂		SOLA WCX
混合模式弱阳离子交换剂
活化500µL 甲醇
平衡500µL 水500µL 含 1% 甲酸的水溶液500µL 含 1% 氨水的水溶液500µL 含 1% 甲酸的水溶液500µL 含 1% 氨水的水溶液
上样50 至 500µL 样品，流速为 1mL/min50 至 500µL 样品，流速为 1mL/min，含 1% 甲酸50 至 500µL 样品，流速为 1mL/min，含 1% 氨水50 至 500µL 样品，流速为 1mL/min，含 1% 甲酸50 至 500µL 样品，流速为 1mL/min，含 1% 氨水
清洗 1500µL 含 5% 甲醇的水溶液500µL 含 1% 甲酸的水溶液500µL 含 1% 氨水的水溶液500µL 含 1% 甲酸的水溶液500µL 含 1% 氨水的水溶液
清洗 2 500µL 含 1% 甲酸的甲醇溶液500µL 含 1% 氨水的甲醇溶液500µL 含 1% 甲酸的甲醇溶液500µL 含 5% 氨水的甲醇溶液
洗脱200µL - 500µL 甲醇200µL - 500µL 含 1% 氨水的甲醇溶液200µL - 500µL 含 1% 甲酸的甲醇溶液200μL - 500μL 含 5% 氨水的甲醇溶液200μL - 500μL 含 1% 甲酸的甲醇溶液

适用于 HyperSep 产品的优化 SPE 方法

制药/生物制药应用

方法使用产品编号
小牛血清中的对乙酰氨基酚使用 60mg 3mL HyperSep Retain PEP 固相萃取柱60107-203
60mg 3mL HyperSep Retain-CX 萃取柱60107-303
从胎牛血清中萃取和净化对乙酰氨基酚60mg 6mL HyperSep Retain PEP 和 -CX 萃取柱60107-203 和 60107-308
溶液中的对乙酰氨基酚60mg 3mL HyperSep Retain PEP 萃取柱60107-203
血清或血浆中苯二氮卓类药物的 HPLC 分析200mg 6mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-722
尿液中的苯二氮卓类药物的 GC 或 GC/MS 确认分析200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
全血中苯二氮卓类药物的 GC 或 GC/MS 确认分析100mg 1mL HyperSep Diol 萃取柱60108-572
苯二氮卓类药物筛查：血液、血清、尿液和组织的 GC-GC/MS 分析200mg 6mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-722
苯二氮卓类药物筛查：血液、血清、尿液和组织的 LC/MS/MS 分析200mg 6mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-722
Beta 受体激动剂分析60mg 3mL HyperSep Retain-CX 萃取柱60107-303
尿液中 Beta 受体激动剂的 GC/MS 确认分析200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
血液、尿液中 Beta 受体阻滞剂的 GC/MS 确认分析200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
血液、血浆/血清和尿液中咖啡因、茶碱和可可碱的提取200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
水中头孢哌酮的检测60mg 3mL HyperSep Retain PEP 萃取柱60107-203
溶液中克伦特罗的检测60mg 3mL HyperSep Retain-CX 萃取柱60107-303
尿液中氯硝西泮和 7-氨基氯硝西泮的 GC/MS 确认分析200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
食品中三聚氰酸和三聚氰胺的 LC/MS/MS 检测200mg 6mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-722
200mg 6mL HyperSep Retain-AX 萃取柱60107-412
尿液中 DHEA、睾酮和表睾酮的 GC 或 GC/MS 确认分析200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
大鼠血清中多虑平的检测60mg 3mL HyperSep Retain PEP 萃取柱60107-203
血清药物分析60mg 3mL HyperSep Retain PEP 萃取柱60107-203
血液、血浆/血清中加巴喷丁的 GC 或 GC/MS 分析100mg 1mL HyperSep C1860108-302
血液、血浆/血清中加巴喷丁的 LC/MS 分析200mg 6mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-722
溶液中富马酸酮替芬的检测60mg 3mL HyperSep Retain PEP 萃取柱60107-203
水中洛伐他汀的检测60mg 3mL HyperSep Retain PEP 萃取柱60107-203
血清或血浆中甲基丙二酸的 GC/MS 分析500mg 6mL HyperSep SAX 萃取柱60108-434
溶液中那氟沙星的检测60mg 3mL HyperSep Retain-AX 萃取柱60107-403
尿液或血清中尼古丁和可替宁的 GC 或 GC/MS 确认分析200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
全血中奥氮平的检测200mg 3mL HyperSep 氰基萃取柱60108-747
血液血浆中的油酸及其代谢物的检测200mg 3mL HyperSep Retain-AX 萃取柱60107-401
人尿液中的鸦片剂——丙烷衍生物的 GC 或 GC/MS 确认分析200mg 6mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
尿液中的鸦片剂——肟类化合物三甲基硅烷化的 GC 或 GC/MS 方法确认分析200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
尿液中鸦片剂的 GC/MS 确认分析200mg 6mL HyperSep Retain-CX 萃取柱60107-314
尿液、血液和血浆/血清中帕罗西丁的 LC/MS/MS 确认分析200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
大鼠血清中普萘洛尔的检测60mg 3mL HyperSep Retain PEP 萃取柱60107-203
溶液中舒喘宁的检测60mg 3mL HyperSep Retain-CX 萃取柱60107-303
血液、血浆/血清中舍曲林和去甲舍曲林的 HPLC 分析200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742
全血中他克莫司、环孢霉素和雷帕霉素的检测200mg 6mL HyperSep Retain PEP 萃取柱60107-212
血浆/血清中三环类抗抑郁药的 HPLC 分析200mg 10mL HyperSep Verify-CX 萃取柱60108-742）

网络讲座/视频：

进行 SPE 时应记住的有用提示

  1. 在活化中或上样之前应防止硅胶吸附剂干涸，因为这会影响回收率。每种溶剂都应在前一种溶剂流完之后立即加入。请注意，对于聚合物基质材料，干涸不会造成问题，因为其在加入适当的溶剂后可保持平衡。
  2. 在洗脱之前，充分干燥的纯化柱可确保最佳的分析物回收率
    1. 在全真空条件下轻触纯化柱两侧以确认干燥度
    2. 纯化柱不应有冰凉触感
  3. 应始终使用每日制备的溶剂，因为某些溶剂的强度会随着时间推移而减弱。

优化上样步骤——pH 注意事项

样品的 pH 值会极大地影响分析物的回收率。当样品处于与吸附剂材料相互作用的最佳状态时，样品的 pH 值即为最佳。表 1 提供了分析物 pH 值对不同 SPE 吸附剂的作用的相关信息。

表 1.优化上样步骤

反相相互作用中的上样量

  • 中性化合物不受 pH 值影响（无需调整样品的 pH 值）
  • 对于带电荷的化合物，应使用能够中和化合物电荷的 pH 值。pH 值调节应符合下列原则：
    • 对于碱性化合物，中性分子存在于至少比化合物的pKa低2个pH单位的位置
    • 对于酸性化合物，中性分子存在于至少比化合物的pKa高2个pH单位的位置

正相 SPE 中的上样

  • pH 值通常不会影响正相相互作用，因为所使用的通常是非极性有机溶剂，而不是水。
  • 无需验证上样的 pH 值

离子交换 SPE 中的上样

  • pH 和 pKa 是重要考量因素。
  • 从 pH 值至少高于分析物的 pKa 2 个单位的样品溶液中提取酸性化合物
  • 从 pH 值至少低于分析物的 pKa 2 个单位的样品溶液中提取碱性化合物

优化清洗和洗脱步骤

通常情况下，应准备各种清洗和洗脱溶液以确定回收分析物的理想溶液配比。例如，要使用 HyperSep Retain PEP 纯化柱确定睾酮的清洗和洗脱溶液，可以依次使用浓度递增的甲醇水溶液清洗样品。根据图 1 中的数据，50% 的甲醇可以用作清洗液，而 90% 的甲醇可以洗脱睾酮。

Optimization of wash and elution step
图 1.通过测试甲醇水溶液的递增浓度来优化清洗和洗脱步骤。

可调整哪些参数以实现系统优化？

优化 SPE 过程的上样、清洗和洗脱步骤有助于提高回收率，提供更清洁的样品提取物，从而改进分析结果并提升分析仪器的耐用性。在这里，你将找到关于影响SPE参数的提示和技巧。

  • 离子强度
  • 样品容量
  • pH 值
  • 有机溶液极性
  • 吸附剂质量
  • 纯化柱体积
  • 有机强度
  • 吸附剂类型

SPE 中影响回收率的可调整参数汇总

pH 值因素会影响回收率。可以使用适当的缓冲液优化 pH 值，以确保加载到 SPE 柱上的样品处于正确的优化状态。

pH 值水平清洗溶剂洗脱溶剂
  • 上样
  • 使用的缓冲液
  • 洗脱
  • 使用不会洗脱出目标分析物的清洗溶剂
  • 选择一种强度足以去除目标化合物的溶剂，并且可溶解分析物。
  • 极性
  • 溶解度
  • 洗脱强度