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BacMam 系统可让您在相关细胞模型中快速运行您需要的检测并获得高质量结果。该技术具有以下主要优点：

  • 高效转导哺乳动物细胞系，包括原代细胞和干细胞
  • 安全（在哺乳动物细胞中不复制）且无可见的细胞病变效应
  • 冻存的预转导细胞可直接用于检测
  • 通过不同转导量轻松调控基因表达
  • 在适当化学计量条件下实现多组分复合物的可重复的共转导和表达

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BacMam 介导的基因递送机制

BacMam 技术的基础是，使用双链 DNA 昆虫病毒（杆状病毒）作为载体实现基因在哺乳动物细胞中的高效递送和表达。通过哺乳动物表达盒对杆状病毒进行了工程改造，从而实现在哺乳动物细胞中的转基因表达。杆状病毒在哺乳动物细胞中不复制，因此具有很好的安全性，并且细胞耐受性良好。BacMam 试剂已用于基于细胞的检测、活细胞成像、干细胞生物学及许多其他应用（查看参考文献）。

采用标准转导流程（图1）将基因引入哺乳动物细胞中。细胞通过内吞作用摄取 BacMam 颗粒并释放，待其迁移至细胞核后实现转录和表达。 基因表达在转导后 4-6 小时内开始并在转导24小时内接近最高水平。 

根据转导效率、细胞类型和细胞分裂速率，转基因在5到14天内仍可检出。

 

BacMam transduction process

 图1.BacMam 介导的基因递送。

BacMam 工作流程和方案

在您的正常工作流程中，BacMam 试剂的使用方式与用于细胞研究的任何其他试剂相同；从冰箱中取出试剂，将其加入细胞中，孵育并检测（图2）。在包括原代细胞和干细胞的大多数细胞系中，转导高效且可重现。BacMam 平台能够以批量处理模式轻松转导大量细胞；已转导的细胞可以分装冻存以供日后使用，在您需要时可直接用于检测—不会丧失活性。可在解冻和铺板后数小时内对细胞进行检测。

BacMam 2.0 Workflow
图2—BacMam 2.0 工作流程。 简单地培养细胞，加入病毒，孵育和可视化 BacMam 2.0 荧光蛋白表达。

BacMam 技术具有非常出色的耐受性且没有明显的细胞病变效应，甚至在病毒颗粒与细胞 [感染复数 (MOI)] 比率非常高 (1,000) 时，也是如此。因此，可通过调整剂量将基因表达轻松滴定到所需水平。现有两种基本转导方案：贴壁细胞转导（图3）和悬浮细胞转导（图4）。贴壁细胞转导效率更高，而悬浮细胞转导的工作流程更为便利，推荐将其用于高通量检测筛选应用。

 


（ 放大）
 
图3.贴壁细胞转导方案。		 

 


（ 放大）
 
图4.悬浮细胞转导方案。		 

参考文献

  1. Boyce, FM & Bucher, NL (1996) Baculovirus-mediated gene transfer into mammalian cells.PNAS, 93:2348-2352
  2. Kost, TA, Condreay, JP & Jarvis, D.L.(2005) Baculovirus as versatile vectors for protein expression in insect and mammalian cells.Nature Biotechnol 23:567-575.
  3. Condreay JP, Kost TA (2007) Baculovirus Expression Vectors for Insect and Mammalian Cells.Current Drug Targets 8(10): 1126-1131.
  4. Ames RS, Kost TA, Condreay JP (2007) BacMam technology and its application to drug discovery.Expert Opin Drug Discov 2:1669-1681.
  5. Kost TA, Condreay JP, Ames RS, Rees S, Romanos MA (2007) Implementation of BacMam virus gene delivery technology in a drug discovery setting.Drug Disc Today 12:396-403.
  6. Hu Y-C (2008) Baculoviral vectors for gene delivery: A review.Current Gene Ther 8:54-65.
  7. Airenne KJ, Mähönen AJ, Laitinen OH, Ylä-Herttuala S (2009) Baculovirus-Mediated Gene Transfer: An Emerging Universal Concept, pp 263-291. In Gene and Cell Therapy, Third Edition, NS Templeton Ed.CRC Press, Boca Raton, FL.

如需定制 BacMam 服务，请发送电子邮件至 discoveryservices@invitrogen.com

仅供科研使用，不可用于诊断目的。

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