- 可转导 - 适用于大多数细胞类型,包括原代细胞和干细胞
- 快速 - 可在不到一周内开发出检测试剂盒,无需生成稳定细胞系
- 简单 - 采用单一抗体均相检测形式
- 灵活 - 测量多种修饰,如磷酸化、乙酰化或泛素化
获取检测信息 使用 Assay Maker™
检测概述
基于 BacMam 的细胞检测是用于探查所选细胞背景中特定信号转导事件的一种高效、易于优化且稳健的方法。基于 BacMam 的细胞检测结合了两种强大的技术:BacMam 介导的基因递送和 LanthaScreen ® TR-FRET 技术。每种技术都具有独特的优势,包括可递送到不同的细胞类型中,以及快速并适合高通量应用的测定读数。
检测工作流程
与其他类型的细胞检测相比,基于 BacMam 的细胞检测可最大限度地减少生成稳定细胞系的需求,同时还可选择细胞背景,从而缩短检测开发时间。用 BacMam 试剂转导细胞后,利用 LanthaScreen® 技术进行读数。此检测形式采用简单的“只需加样”方案,所需的手动操作时间很短(
图1)
图1. 基于 BacMam 的细胞检测工作流程。使用可编码 GFP 融合蛋白的 BacMam 试剂处理细胞,并以384孔形式铺板。在转导后24小时,对细胞进行刺激以诱导 GFP 底物的翻译后修饰(例如磷酸化[如图所示])。然后在存在铽抗修饰特异性抗体的情况下裂解细胞,之后进行LanthaScreen® 检测读数。
试剂盒的转导性
使用 BacMam 试剂成功转导的细胞类型包括大量转化细胞系(例如 U2-OS、HEK 293 和 HeLa)、许多原代细胞(例如成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞)及干细胞(例如脂肪细胞来源的干细胞和间充质干细胞)。已经证明可对这些细胞进行高效转导,而不会产生不良影响(图2)。
有关更多 BacMam 适用细胞类型的信息,请访问 www.invitrogen.com/bacmam
图2.在各种细胞背景下采用基于 BacMam 的细胞检测试剂盒检测组蛋白 H3 第9位赖氨酸乙酰化。(A) 786-0;(B) U2-OS;(C) HCT-116。用 BacMam 组蛋白 H3 试剂对细胞进行转导并将细胞接种到低血清检测培养基的384孔检测板上进行过夜培养。然后使用所示量的曲古抑菌素 A(HDAC 抑制剂)处理细胞3小时,随后进行 LanthaScreen® 检测。所有三项检测的响应比均高于3.0。基于 BacMam 的细胞检测在各种细胞类型中得到相似的结果。
检测灵活性 - 测量多种翻译后修饰
核小体功能受磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等多种动态翻译后修饰的高度调控。在基于 BacMam 的细胞检测中使用 LanthaScreen® 技术,可检查对特定底物的多种翻译后修饰,前提是具有修饰特异性抗体。对于组蛋白 H3 的 Lys9 乙酰化和组蛋白 H3 的 Ser10 细胞周期依赖性磷酸化,可分别使用铽标记的抗组蛋白 H3 乙酰基-Lys9 和抗磷酸化 Ser10 特异性抗体进行检测(图3和4)。通过基于 BacMam 的细胞检测,能够检测负责翻译后修饰的多种酶活性,包括组蛋白等具有挑战性的靶标。
图3. 采用基于 BacMam 的细胞检测试剂盒检测组蛋白 H3 第9位赖氨酸乙酰化。用 BacMam 组蛋白 H3 试剂对 U2-OS 细胞进行转导并 将细胞接种到低血清检测培养基的384孔检测板上进行过夜培养。然后用指定量的 HDAC 抑制剂处理细胞3小时,随后进行 LanthaScreen® 检测。BacMam 组蛋白 H3 [AcLys9] 细胞检测试剂盒具有广泛效力,可用于检测已知的 HDAC 抑制剂。
图4. 采用基于 BacMam 的细胞检测试剂盒检测组蛋白 H3 第10位赖氨酸磷酸化。用 BacMam 组蛋白 H3 试剂对 U2-OS 细胞进行转导并将细胞接种到低血清检测培养基的384孔检测板上进行过夜培养。(A) 然后使用所示量的花萼海绵体诱癌素 A 处理细胞1小时,随后进行 TR-FRET 检测。(B) 使用极光激酶抑制剂 VX680 对细胞进行 1 小时预处理,然后用花萼海绵体诱癌素 A 额外孵育一小时,随后进行 LanthaScreen® 检测。BacMam 组蛋白 H3 [pSer10] 细胞检测可成功测量极光激酶活性。
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订购信息
基于 BacMam 的细胞检测评价试剂盒提供了约800次检测(384孔板形式)的试剂。 试剂盒包含以下试剂:
- BacMam 试剂
- 铽标记抗体
- 裂解缓冲液
- 增强剂
试剂盒中的所有试剂都可以提供大包装。
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