Qubit RNA IQ 检测

快速评价 RNA 的完整性和质量

Qubit RNA IQ 检测的开发是为了快速评价 RNA 样本的完整性和质量 (IQ)。它使用两种染料：一种可与较大且完整和/或结构化的 RNA 结合，而另一种可与较小的降解 RNA 结合。

RNA 质量检测

产品	检测次数	货号
Qubit RNA IQ 检测试剂盒	75	Q33221
Qubit RNA IQ 检测试剂盒	275	Q33222
Qubit RNA IQ 标准品	1套	Q33235

操作简单

若要进行 Qubit RNA IQ 检测，仅需向 RNA IQ 工作缓冲液中加入最低至 1 µL 的样本（含 0.5-1.5 μg RNA），并可在 Qubit 4 或 Qubit Flex 荧光计上测定即可。此检测无需特殊处理、繁琐的样本制备或等待结果。样本的 IQ 评分是一个介于 1 和 10 之间的数值，代表样本中的大小 RNA 分子的百分比。

Qubit RNA IQ 检测结果

RNA IQ 评分是一个从 1 至 10 的数值，类似于其他 RNA 质量评分。这一评分基于一种专有算法，代表了样本中结构化大 RNA 分子与小 RNA 分子的比例。低评分 (A) 表明样本主要由小 RNA 分子组成，而高评分 (B) 表明样本主要由结构化大 RNA 分子组成。

如上表所示，与 Agilent™ Bioanalyzer™ 系统等其他方法相比，Qubit RNA IQ 检测更加简单、快捷。此外，Qubit RNA IQ 评分与 RT-qPCR RNA 质量测定结果的一致性要优于 Bioanalyzer 的 RNA 完整性数 (RNA)，如 Sample Data（样本数据）页面所示。

使用 Qubit RNA IQ 检测和 Agilent Bioanalyzer 测量 RNA 样品质量的方案

仪器与检测	Qubit 4 荧光计及 RNA IQ 检测	Agilent 2100 Bioanalyzer™ 检测仪和 RNA 纳米芯片*
检测所需设备及试剂*	Qubit 4 荧光计	Agilent 2100 Bioanalyzer 检测仪
	Qubit RNA IQ 检测试剂盒	RNA 6000 Nano 检测试剂盒
	移液器	移液器
	Qubit 检测管	微量离心管
		芯片注胶平台
		IKA 涡旋仪
		小型离心机
		计算机
		热盖仪或水浴
		不含 RNase 的水
设备设置	打开 Qubit 4 荧光计	依次用新 DNA 试剂盒替换芯片注胶平台上的注射器
		调整芯片注胶平台的底盘
		调整芯片注胶平台的注射器夹
		调整 Bioanalyzer 芯片选择器
		设置涡旋混合仪
		加载芯片前启动软件
样品制备时间	~5 分钟	~30-45 分钟
样本制备	1.添加 RNA IQ 染料到 RNA IQ 缓冲液中以制备 Qubit RNA IQ 工作缓冲液	1.制备 RNA 分子量大小标记
	2.添加样本 [1-20 μL (0.5––1.5 μg)] 和标准品到 Qubit RNA IQ 工作溶液中	2.制备凝胶（包含 10 分钟离心的步骤）
		3.制备凝胶染料预混液（包含 10 分钟离心的步骤）
		4.凝胶染料预混液加到芯片中
		5.marker加到芯片中
		6.加如 RNA 分子量大小标记和样本（包含 1 分钟 IKA 涡旋的步骤）
样本稳定性	~1 小时	在 5 分钟内使用芯片
分析运行时间	每样品 <4 秒	每芯片 30 分钟
常规维护	无	每月需要进行密封性测试以检测芯片注胶平台的性能
		电泳检测方法：每日使用电极清洁器清洁电极
		每月通过使用牙刷及蒸馏水彻底清洁电极
		每月一次（或在任何液体溅落后）用异丙醇清洁聚焦滤镜
维护所需产品	无	RNaseZAP（电极清洁）
* 相关信息汇总自 Agilent G2938-90037 和 G2946-90003 用户手册以及 Thermo Fisher Scientific MAN0017210 快速参考卡片。

样本数据

这一数据示例表明，Qubit RNA IQ 检测中的两种试剂分别对大 RNA 分子和小 RNA 分子具有高度特异性，而 RNA IQ 评分会随大 RNA 分子百分比的增加而相应增大。

适用于大小 RNA 分子的 RNA IQ 检测试剂的选择性

在 Qubit 4 荧光计上使用 Qubit RNA IQ 检测分析含 100 ng/mL rRNA（大肠杆菌）和不同浓度 (0–50 ng/µL) siRNA 的 3 个重复样本。显示这些样本的 (A) 相对荧光单位 (RFU) 和 (B) IQ 评分的图。数据表明，染料分别特异于大 RNA（如 rRNA）和小 RNA（如 siRNA）分子，且 IQ 评分与样本中大 RNA 分子的百分比密切相关。

该数据示例表明，当暴露于 RNase A 时，RNA 样品会随着时间推移降解，且 RNA IQ 评分降低。正如我们预计的那样，更高剂量的 RNase A 可加速降解。

由 Qubit RNA IQ 检测测量的 RNase A 对 rRNA 降解的时间趋势

将 100 ng/mL rRNA 溶液的 3 个重复样本与不同数量的 RNase A 在含多个染料和检测缓冲液的最终检测溶液中一起培养。(A) RNA IQ 评分反映出高剂量 RNase A 会在 60 分钟内加速 RNA 的降解。(B) 暴露于 10 fM RNase A 下会导致一小时内大 RNA 分子的荧光逐渐下降，而小 RNA 分子的荧光会相应增加。(C) 在 100 fM RNase A 下，这些变化的速度更快。