快速评价 RNA 的完整性和质量

Qubit RNA IQ 检测的开发是为了快速评价 RNA 样本的完整性和质量 (IQ)。它使用两种染料:一种可与较大且完整和/或结构化的 RNA 结合,而另一种可与较小的降解 RNA 结合。

RNA 质量检测

产品

检测次数

货号

Qubit RNA IQ 检测试剂盒

75

Q33221

275

Q33222

Qubit RNA IQ 标准品

1套

Q33235


操作简单

若要进行 Qubit RNA IQ 检测,仅需向 RNA IQ 工作缓冲液中加入最低至 1 µL 的样本(含 0.5-1.5 μg RNA),并可在 Qubit 4 或 Qubit Flex 荧光计上测定即可。此检测无需特殊处理、繁琐的样本制备或等待结果。样本的 IQ 评分是一个介于 1 和 10 之间的数值,代表样本中的大小 RNA 分子的百分比。

Qubit RNA IQ 检测结果

 

RNA IQ 评分是一个从 1 至 10 的数值,类似于其他 RNA 质量评分。这一评分基于一种专有算法,代表了样本中结构化大 RNA 分子与小 RNA 分子的比例。低评分 (A) 表明样本主要由小 RNA 分子组成,而高评分 (B) 表明样本主要由结构化大 RNA 分子组成。

如上表所示,与 Agilent™ Bioanalyzer™ 系统等其他方法相比,Qubit RNA IQ 检测更加简单、快捷。此外,Qubit RNA IQ 评分与 RT-qPCR RNA 质量测定结果的一致性要优于 Bioanalyzer 的 RNA 完整性数 (RNA),如 Sample Data(样本数据)页面所示。

使用 Qubit RNA IQ 检测和 Agilent Bioanalyzer 测量 RNA 样品质量的方案


样本数据

这一数据示例表明,Qubit RNA IQ 检测中的两种试剂分别对大 RNA 分子和小 RNA 分子具有高度特异性,而 RNA IQ 评分会随大 RNA 分子百分比的增加而相应增大。

适用于大小 RNA 分子的 RNA IQ 检测试剂的选择性

在 Qubit 4 荧光计上使用 Qubit RNA IQ 检测分析含 100 ng/mL rRNA(大肠杆菌)和不同浓度 (0–50 ng/µL) siRNA 的 3 个重复样本。显示这些样本的 (A) 相对荧光单位 (RFU) 和 (B) IQ 评分的图。数据表明,染料分别特异于大 RNA(如 rRNA)和小 RNA(如 siRNA)分子,且 IQ 评分与样本中大 RNA 分子的百分比密切相关。

该数据示例表明,当暴露于 RNase A 时,RNA 样品会随着时间推移降解,且 RNA IQ 评分降低。正如我们预计的那样,更高剂量的 RNase A 可加速降解。

由 Qubit RNA IQ 检测测量的 RNase A 对 rRNA 降解的时间趋势

将 100 ng/mL rRNA 溶液的 3 个重复样本与不同数量的 RNase A 在含多个染料和检测缓冲液的最终检测溶液中一起培养。(A) RNA IQ 评分反映出高剂量 RNase A 会在 60 分钟内加速 RNA 的降解。(B) 暴露于 10 fM RNase A 下会导致一小时内大 RNA 分子的荧光逐渐下降,而小 RNA 分子的荧光会相应增加。(C) 在 100 fM RNase A 下,这些变化的速度更快。


组合使用 Qubit 荧光计与 NanoDrop 紫外荧光法以测定 RNA 的数量、质量和纯度

任何 RNA 分析的可靠性和可重复性都取决于已知质量、浓度及纯度的 RNA。组合使用基于 Qubit 4 或 Flex 荧光计的 Qubit RNA IQ 检测与基于 NanoDrop 分光光度计的紫外吸光度测量,是评价 RNA 样本质量、浓度以及纯度的快速、简便方法。

NanoDrop 分光光度计只需 1 µL 样本。仅需简单测量 3 次,您就可以测得样本中的总核酸 (260 nm)、所有蛋白质污染物 (280 nm) 以及所有苯酚或其他溶剂污染物 (230 nm) 的量。

Qubit RNA XR(扩展范围)、BR(宽范围)和 HS(高灵敏度)检测都可用于 RNA 的定量。这些检测中包含有可与完整 RNA 特异性结合的染料,因而可用于纯 RNA 样本或含在 260nm 下也有吸光值的 DNA 的 RNA 样本。