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本节提供各种手册、宣传册、应用资料、技术指南、视频、网络讲座以及其他资源,可帮助您充分利用 Thermo Scientific NanoDrop One/OneC、Eight 或 Lite Plus 分光光度计或者 3300 荧光光度计。
有关 NanoDrop 2000/2000c、8000、Lite 和 1000 分光光度计的类似材料,请参阅本页底部的已停产 NanoDrop 仪器资源 。
NanoDrop 定量技术的突出特点或许正是使用简单、便捷。开创性的 NanoDrop 基座系统有助于显著减少分析所需的样品体积并简化操作。只需移取一滴(约 1.0-2.0 µL)DNA、RNA 或蛋白质样品到基座上,然后下拉检测臂即可。不需要使用比色皿或毛细管,结果将在几秒钟内显示。
NanoDrop 分光光度计的设计基于紫外-可见光谱(UV-Vis)吸光度的原理。核酸的吸光度峰位于 260 nm 处。纯化蛋白质的吸光度峰位于 280 nm 处,而不含色氨酸及酪氨酸残留的肽和蛋白质的吸光度峰位于 205 nm 处。许多提取方案残留污染物的吸光度峰位于 280 nm 处或 230 nm 处。
光信号的产生
核酸(DNA 和 RNA)和蛋白质的光度测量基于其固有的吸光特性。当测量吸收光谱时,核酸的特征吸光度峰位于 260 nm 处。
根据在所需波长下测量的吸光度值,使用比尔-朗伯方程自动计算核酸和蛋白质的浓度,其中:
根据比尔-朗伯方程可知,对于低浓度样品,光程越长,准确度和信噪比越高。NanoDrop 仪器能够自动优化液体样品柱的长度,从而可在较宽的浓度范围内实现出色的准确度。
对比参考仪器验证的 NanoDrop One dsDNA 定量准确度。制备浓度范围为 3-28,000 ng/µL 的一系列 dsDNA 稀释液,使用 NanoDrop One 和 Evolution 300 分光光度计在 260 nm 下进行分光光度法定量。(A) 绘制了整个仪器浓度范围内的线性度对比图。回归线表明,NanoDrop One dsDNA 浓度结果与在参照仪器 Thermo Scientific Evolution 300 分光光度计上获得的结果具有良好的一致性(R2 = 0.9991)。(B) 还绘制了低浓度范围 (3-495 ng/μL) 内的特写线性度对比图。回归线表明,NanoDrop One 与 Evolution 300 的结果密切相关(R2 = 1),且检测范围的下端显示出极高的线性度。有关方法说明和更多详细数据,请参阅 NanoDrop One 核酸技术指南。
样品纯度可通过不同波长下的吸光度比值来进行评估。样品污染可能会导致核酸浓度过高和/或下游过程或测量结果不准确。
紫外吸光度法的关键纯度比值
比值 | 分析物 | 视为“纯净” | 可能导致比值异常的因素 |
A260/A280 | 核酸 | DNA:~1.8 | 低比值指示有污染物: · 蛋白质 · 来自提取方案的残留苯酚或其他试剂 |
A260/A230 | 核酸 | DNA/RNA:~2.02.2 | 低比值指示的污染物: · 蛋白质 · 碳水化合物残留(通常出现在植物中) · 核酸提取中的残留苯酚 · 胍类残留(通常用于色谱柱试剂盒中) · 用于沉淀的糖原 高比值指示的因素: · 空白测量问题 |
A260/A280 | 蛋白质 | ~0.6 | 高比值指示的污染物: · 核酸 |
除纯度比值外,杂质还可能改变光谱曲线,导致峰谷偏移(如图所示)。
污染物导致光谱曲线发生偏移
不含有染污物的纯化 DNA 样品的光谱(A,红色),以及含胍类(B,绿色)和苯酚(C,棕色)污染物的同一样品的光谱。
运行 Acclaro 样品智能软件的 NanoDrop 仪器可以使用此类全光谱数据来鉴别各种污染物,如特征中所述。
在美国和加拿大,如需技术支持,请致电 877-724-7690(按 4),或发送电子邮件至 nanodrop@thermofisher.com,联系 NanoDrop 技术支持。如需国际协助,请发送电子邮件至 nanodrop@thermofisher.com 或联系您当地的 NanoDrop 经销商。
通过查阅上述文档、文献、视频和网络讲座,您应该能够自行解决许多技术支持问题。此外,我们还提供许多免费在线教育材料,包括这些 涵盖光谱学、蛋白质生物学以及核酸定量的学习中心和网站页面。
查找有助于您充分利用 NanoDrop 2000/2000c、8000、Lite 或 1000 分光光度计的手册、宣传册、应用资料、技术指南、视频和其他资源。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.