免疫检查点和共刺激分子抗体

T细胞活化通常是自限性的，因为活化的T细胞表达介导PD-1（也称为PDCD-1）的受体，其介导来自抗原呈递细胞（APC）的抑制信号。PD-1可以结合两种不同但相关的配体PD-L1和PD-L2。在与这些配体中的任一种结合后，PD-1产生的信号降低TCR介导的增殖和细胞因子产生。增加的PDL-1表达与许多鼠和人类癌症相关，并且可以在IFN-γ刺激后进一步上调。因此，PD-L1可能在肿瘤的免疫逃避中起重要作用。

PD-1和B7-H1的流式细胞术分析。用ConA刺激C57BL / 6脾细胞，然后用APC抗小鼠CD3e（货号A18605）和0.5μgPE抗小鼠CD279（PD-1）（货号A18700）（右上panel）或 0.5μgPE亚美尼亚仓鼠IgG同型对照（左上panel）染色。用APC抗小鼠CD3e和PE大鼠IgG2a kappa同型对照（左下panel）或PE抗小鼠CD274（B7-H1）（货号A14764）（右下panel）染色C57BL / 6脾细胞。淋巴细胞门中的细胞用于分析。

DR3 / TNFRSF25是TNF受体超家族的成员。在富含淋巴细胞的组织中优先表达该受体，并且它可能在调节淋巴细胞稳态中起作用。DR3的唯一已知配体是TNF超家族成员TL1A（TNF样细胞因子1A，TNFSF15）。该受体的信号转导由各种含有死亡结构域的衔接蛋白介导。小鼠的敲除研究表明DR3 / TNFRSF25在去除胸腺中自身反应性T细胞中的作用。研究还表明TL1A和DR3在各种人类疾病和动物疾病模型中的作用，包括类风湿性关节炎（RA），胶原诱导的关节炎（CIA）和炎性肠病（IBD）。

DR3 / TNFRSF25的免疫荧光分析。使用ABfinity抗DR3 / TNFRSF25重组兔单克隆抗体（货号702277，2μg/mL）和山羊抗兔IgG（H+ L）超级二抗，Alexa Fluor 48（货号A27034，1：2,000）标记，固定和透化的Ramos细胞。Panel a显示了被染色的DR3 / TNFRSF25蛋白（绿色）；Panel b中，使用带有DAPI（货号S36938）的SlowFade Gold Antifade Mountant对细胞核（蓝色）进行染色；Panel c表示使用Alexa Fluor 555罗丹明鬼笔环肽（货号R415，1：300）对细胞骨架F-肌动蛋白染色； Panel d是Panel a，b和c的组合图像，清楚地证明了DR3 / TNFRSF25在膜中的定位。图像以60倍放大率采集。

在许多类型的人急性髓细胞白血病（AML）中，T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3（TIM-3）在人髓细胞白血病干细胞的表面上表达，而非在造血干细胞（HSC）上表达。TIM-3在霍奇金病组织中过表达，并可能参与霍奇金和里德 - 斯腾伯格（H＆RS）细胞与其周围细胞之间的相互作用。半乳糖凝集素是β-半乳糖苷结合蛋白家族，其涉及调节细胞 - 细胞和细胞 - 基质相互作用。半乳糖凝集素-9（Gal-9）是TIM-3的配体；这些蛋白质一起构成了对白血病干细胞（LSC）自我更新和人类AML发展至关重要的自分泌环，因此可能在该疾病的发病机理和/或其相关的免疫缺陷中起作用。 

                                         Galectin-9

CTLA4是免疫球蛋白超家族的成员，编码向T细胞传递抑制信号的蛋白质。该基因的突变与胰岛素依赖型糖尿病，格雷夫斯病，桥本甲状腺炎，乳糜泻，系统性红斑狼疮，甲状腺相关性眼眶病和其他自身免疫性疾病有关。CD80（B7-1）和CD86（B7-2）是T细胞关键共刺激分子CD28和抑制性受体CTLA-4（CD152）的配体。两种B7分子均在专职抗原呈递细胞上表达，对于T细胞活化非常关键。尚未完全阐明CD80和CD86能力的差异；现有研究的结果与它们各自在启动或维持T细胞免疫应答中的作用相冲突。

CTLA-4的免疫细胞化学分析结果。使用浓度为15μg/ mL的山羊抗人CTLA-4多克隆抗体（货号PA5-47547）以在室温下，检测用PMA和钙离子霉素处理的固定的人外周血单核细胞3小时。使用荧光染料偶联的抗山羊IgG二抗（红色）染色细胞，并用DAPI（蓝色）复染。特异性染色定位于细胞表面。

TIGIT是最近发现的共抑制受体，在多种淋巴样细胞表面表达，特别是在Foxp3 +调节性T细胞上。TIGIT的表达在肿瘤浸润性T细胞上显著富集。脊髓灰质炎病毒受体（PVR，CD155）是在V-C-C排列中具有3个Ig结构域的Ig超家族的成员，是TIGIT的高亲和力受体。TIGIT与其受体CD155结合，引起IL-10分泌增加和IL-12B分泌减少，并通过促进成熟免疫调节树突细胞的产生来抑制T细胞活化。

CD155（绿色）的免疫荧光分析显示HeLa细胞膜中的染色。采用TBS中含 0.1% Triton X-100在室温下透化处理被福尔马林固定的细胞 5-10 分钟，然后在室温下采用 3% BSA-PBS 封闭30分钟。用CD155单克隆抗体（货号MA5-13493）在3％BSA-PBS中以1:20的稀释度检测细胞，并在4℃孵育过夜。用PBST洗涤细胞，并在室温下在避光孵育DyLight偶联的二抗。用鬼笔环肽（红色）染色F-肌动蛋白，并用Hoechst或DAPI（蓝色）染色细胞核。图像在60倍放大率下采集。

LAG3（CD223）是在活化的T细胞，NK细胞，B细胞和浆细胞样树突细胞上表达的细胞表面分子。与其主要配体II类MHC结合，LAG3在调节树突细胞功能中起作用。基于研究，它还与PD-1在几种可移植肿瘤中的肿瘤浸润性CD4 +和CD8 + T细胞上广泛共表达。

人PBMC的流式细胞术分析。用山羊抗人LAG-3多克隆抗体（货号PA5-47298）染色未处理（A）或用1μg/mL PHA处理（B）5天的细胞，然后用APC偶联的抗山羊IgG二抗和PE偶联的小鼠抗人CD3ε单克隆抗体染色。基于对照抗体染色画门分析。