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根据目标物种选择二抗
二抗是宿主动物接种来自其他物种的抗体而产生的。例如，抗小鼠抗体是通过向小鼠之外的其他动物注射接种纯化的小鼠抗体所产生的。山羊、驴、绵羊、鸡和兔是生成二抗最常用的宿主物种，但我们还提供其他物种选择，如马、羊驼、猫、奶牛、狗等。
阅读本页可更多了解以下内容：(1) 如何选择二抗；(2) 如何生成二抗；(3) 如何纯化二抗，例如亲和纯化和交叉吸附抗体。
选择二抗
有时候，常用二抗可能过于特异（例如，仅识别一抗的一种宿主物种）或过于广谱（例如，识别完整的 IgG 及其任何片段）。在大多数情况下，通过细心设计实验体系并选择合适的探针标记，可以克服这些限制。
以下为选择二抗时需要考虑的注意事项：
- 确定一抗的宿主物种（例如，小鼠抗微管蛋白、兔抗 CD4）
- 选择适当的二抗宿主物种（山羊抗小鼠 IgG、驴抗兔 IgG）
- 考虑二抗的交叉反应性或特异性问题：
- 交叉吸附——在多重标记应用中或使用具有内源性抗体的样品时
- 特异性——与一抗的正确片段、种类或链结合
- 检测或纯化方法
- 标记——与正确的酶、标签或荧光基团适当偶联以用于所选择的检测方法
- 与蛋白 A、蛋白 G 或蛋白 L 结合的能力——确保所选的二抗对上游或下游使用的分子具有足够的亲和力（如蛋白 A 包被的微孔板）
- 考虑供应二抗的要求：供应的状态——无菌液体或冻干、悬浮于 PBS 或 Tris 缓冲液中、含有载体蛋白如明胶或白蛋白还是添加了蔗糖或微生物抑制剂等稳定剂
物种缩写
生产二抗
最常用的二抗类型都是通过接种靶标物种的一群免疫球蛋白而产生的。例如，采用纯化的小鼠 IgG 接种山羊，将会产生可以与所有种类的重链和轻链、小鼠 IgG 片段以及其他共用同一保守结构域（例如，IgM 和 IgG 共用同一 kappa 轻链）的其他分子结合的山羊抗小鼠 IgG。相反，仅用小鼠 IgG1 抗体接种山羊，则仅产生靶向小鼠 IgG1 抗体及与其共用同一保守结构域的分子的抗体。
纯化二抗
由于许多免疫球蛋白域结构具有高度保守性，区分特异性二抗必须经过亲和纯化和交叉吸附，从而最大限度减少与其他免疫球蛋白的交叉反应。上述实例证明，固定的小鼠 IgG1 抗体可用于亲和纯化所有与小鼠 IgG1 结合的山羊抗体。这类抗小鼠 IgG1 可通过含有小鼠 IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM 等的色谱柱去除任何与非 IgG1 同种型交叉反应的抗体，得到进一步纯化。
此外，还可通过含固定血清蛋白（来自于一抗物种之外的其他物种）的色谱柱，进一步纯化二抗。这种交叉吸附法（以下称“交叉吸附”）是一种额外的纯化步骤，推荐用于使用多物种来源一抗以及待测样品中可能存在免疫球蛋白或其他血清蛋白的应用。