监管机构希望所有生物制品都经过病毒检测，以降低病毒污染的风险。 Sf-弹状病毒、小鼠细小病毒（MMV）和疱疹病毒都是病毒污染物，对药物开发和生产过程构成了潜在威胁。 使用 ViralSEQ 实时 PCR 系统可获得可再现的准确度和快速结果，以降低风险，加速批次处理，该系统是整体工作解决方案的一部分，旨在应对 GMP 环境中的生物生产检测挑战。

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基因治疗和疫苗生产中的 Sf-弹状病毒检测

重要的是要有一种准确的方法来定量 Sf-弹状病毒，这是一种已知的感染性污染物，通常发现于基因治疗和疫苗开发中使用的 Sf9/Sf21 细胞。Applied Biosystems ViralSEQ 定量 Sf-弹状病毒试剂盒可准确定量 Sf-弹状病毒基因组 RNA。

该试剂盒:

  • 提供了一种负义特异性 RT-qPCR 分析方法，用于精确定量 Sf-弹状病毒基因组 RNA
  • 对正链 mRNA 或其他 非靶物种无交叉反应
  • 提供 RNA 对照和 2 组引物，用于确保定量准确度

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ViralSEQ Quantitative Sf-rhabdovirus Kit image


Sf-弹状病毒定量操作流程分步指南

使用 PrepSEQ 核酸样品制备试剂盒，贯穿整个生物工艺流程，从样品基质中提取核酸。

将 纯化的 RNA 添加到 ViralSEQ Sf-弹状病毒试剂盒分析混合物中，以制备用于逆转录的样品 

使用步骤 1 中提取和制备的核酸进行反转录，以产生 cDNA，用于进一步扩增，以便随后准确定量阴性菌株特异性 DNA。

在实时 PCR 仪器上运行含有 cDNA 和反应混合物的 96 孔板。

使用 AccuSEQ 实时 PCR 软件分析数据， 这是一种直观易用的数据解释分析工具。该软件在实验和孔板设置过程中引导用户并提供易于使用的工具，用于定义和设置标准品、对照品和未知物。AccuSEQ 软件的设计旨在分析从 ViralSEQ、MycoSEQ 和 resDNASEQ 试剂盒获得的结果。

产品

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Step 1 : 样本制备

使用 PrepSEQ 核酸样品制备试剂盒，贯穿整个生物工艺流程，从样品基质中提取核酸。

将 纯化的 RNA 添加到 ViralSEQ Sf-弹状病毒试剂盒分析混合物中，以制备用于逆转录的样品 

Step 2 : 反转录

使用步骤 1 中提取和制备的核酸进行反转录，以产生 cDNA，用于进一步扩增，以便随后准确定量阴性菌株特异性 DNA。

Step 3 : 实时荧光定量 PCR

在实时 PCR 仪器上运行含有 cDNA 和反应混合物的 96 孔板。

Step 4 : 分析

使用 AccuSEQ 实时 PCR 软件分析数据， 这是一种直观易用的数据解释分析工具。该软件在实验和孔板设置过程中引导用户并提供易于使用的工具，用于定义和设置标准品、对照品和未知物。AccuSEQ 软件的设计旨在分析从 ViralSEQ、MycoSEQ 和 resDNASEQ 试剂盒获得的结果。

产品

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哺乳动物细胞培养生产过程中的小鼠细小病毒 (MMV) 和疱疹病毒检测

在过去 20 年中，这些病毒污染对多细胞培养生产车间造成了诸多不利影响。ViralSEQ 检测系统是一种集成 DNA 纯化和基于实时 PCR 的检测方法，可快速、灵敏地检测一系列样本类型中的 MMV 和疱疹病毒。该系统可检测所有已知 MMV 和疱疹病毒毒株，并与 Prep SEQ 1-2-3 核酸提取试剂盒兼容，该试剂盒经过优化，可高效回收 DNA。

  • 通常在 4 小时内快速提供结果
  • 特定于无法检出的与无关 DNA 无交叉反应
  • 使用 TaqMan® 技术进行高灵敏度检测，<每个反应 10 份 DNA 拷贝（病毒颗粒相当于 0.002 TCID50）
  • 分辨阳性对照/提取 DNA 对照品可最大限度地减少因为与对照 DNA 发生交叉污染而出现的假阳性检测结果
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高灵敏度和宽动态范围。
ViralSEQ MMV 分析可以检测每个反应 107  到 10 拷贝数的 MMV 基因组 DNA。

MMV 和疱疹病毒检测操作流程分步指南

使用 PrepSEQ 1-2-3 核酸提取试剂盒提取核酸（用于 MMV 的 DNA 或用于疱疹病毒的 RNA）。您在此步骤中纯化的 DNA（用于 MMV 检测）将用作实时 PCR 的模板，而 RNA（用于疱疹病毒检测）将用作一步逆转录实时 PCR 的模板。

通过将纯化的 DNA (MMV) 或 RNA（疱疹病毒）与 ViralSEQ MMV 检测试剂盒或 ViralSEQ 疱疹病毒检测试剂盒中包含的预混液和 TaqMan 测定混合物组合，以此制备实时 PCR 反应。

在实时 PCR 仪器上运行含有提取核酸和反应混合物的 96 孔板。

使用 AccuSEQ 实时 PCR 软件分析数据， 这是一种直观易用的数据解释分析工具。该软件在实验和孔板设置过程中引导用户并提供易于使用的工具，用于定义和设置标准品、对照品和未知物。AccuSEQ 软件的设计旨在分析从 ViralSEQ、MycoSEQ 和 resDNASEQ 试剂盒获得的结果。

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Step 1 : 样本制备

使用 PrepSEQ 1-2-3 核酸提取试剂盒提取核酸（用于 MMV 的 DNA 或用于疱疹病毒的 RNA）。您在此步骤中纯化的 DNA（用于 MMV 检测）将用作实时 PCR 的模板，而 RNA（用于疱疹病毒检测）将用作一步逆转录实时 PCR 的模板。

通过将纯化的 DNA (MMV) 或 RNA（疱疹病毒）与 ViralSEQ MMV 检测试剂盒或 ViralSEQ 疱疹病毒检测试剂盒中包含的预混液和 TaqMan 测定混合物组合，以此制备实时 PCR 反应。

Step 2 : 实时荧光定量PCR

在实时 PCR 仪器上运行含有提取核酸和反应混合物的 96 孔板。

Step 3 : 分析

使用 AccuSEQ 实时 PCR 软件分析数据， 这是一种直观易用的数据解释分析工具。该软件在实验和孔板设置过程中引导用户并提供易于使用的工具，用于定义和设置标准品、对照品和未知物。AccuSEQ 软件的设计旨在分析从 ViralSEQ、MycoSEQ 和 resDNASEQ 试剂盒获得的结果。

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