双荧光和明场细胞计数

Invitrogen Countess 3 FL 全自动细胞计数仪具有荧光功能，可从 14 种具有不同光谱范围的光立方中选择两种安装，光立方可轻松更换。Countess 3 FL 仪器可以在荧光模式以及明场模式下计数细胞并测量活性，同时也能使用荧光试剂在短至30秒的时间内报告荧光蛋白表达、凋亡、转染效率以及测量细胞活性。借助在开发过程中利用人工智能，我们的团队采用深度学习神经网络算法来生成高度准确的细胞计数，即使对于最具挑战性的细胞样品类型也是如此。

 

荧光细胞计数还允许使用基于荧光的细胞检测，这些检测通过使用荧光细胞染料或荧光标记细胞，对复杂样品具有更强的特异性。

Countess 3 FL 自动细胞计数仪特点

Countess 3 FL 和 Countess 3 共同的特色：准确、快速、简单、自动化；它们提供覆盖多种细胞系的活性检测和单细胞数据，兼容可重复使用计数板；并且它们具有支持 21CFR 第11 部分电子记录合规性要求的选配软件。此外，Countess 3 FL 荧光功能开辟了更多的选择和应用。

荧光应用

细胞活性、凋亡、转染效率、荧光蛋白表达等

可更换 LED 光立方

将您的荧光蛋白和染料选择扩展到 GFP 和 RFP 之外

优化过的 ReadyCount 试剂

专为 Countess 3 FL 细胞计数仪而设计

荧光计数应用

除了细胞计数外，Countess 3 FL 仪器的荧光能力通常用于评估细胞活性、凋亡、转染效率和荧光蛋白表达。应用范围适用于任何自发荧光或可以使用荧光染料进行标记的细胞参数。您可以在样品数据中找到说明培养细胞质量控制、CAR-T 细胞筛选、CRISPR-Cas9 编辑效率以及其他荧光应用的数据。

 

细胞活性。评估细胞活性是日常细胞培养中的一个关键步骤，是准确高效的下游应用所必需的步骤。Countess 3 FL 荧光选项提供了一种灵敏并具体的活性检查，可在下游样本分析之前快速轻松地进行。

 

尽管台盼蓝广泛用于明场细胞计数中的活性评估，但在某些情况下它可能会改变细胞形态。例如，当用台盼蓝为死鼠 PBMC 细胞染色时，它们可能会膨胀并下沉到与活细胞不同的焦面，从而使准确检测和计数变得复杂。作为一种荧光替代品，Invitrogen ReadyCount Green/Red 活性染料包含优化过的吖啶橙和碘化丙啶 (AO/PI) 组合。荧光染色可以在不改变细胞形态的情况下，为混合细胞群中的活/死状态提供出色的灵敏度和更高的特异性。

利用荧光进行活性测定

使用 ReadyCount Green/Red 活性染料对小鼠 PBMC 进行了染色，并用 Countess 3 FL 全自动细胞计数仪进行了计数。在荧光模式下，预先优化过的 AO/PI 混合物具有更高的活/死细胞特异性。死细胞 (38%) 被 PI 染为红色，并使用 Texas Red 2.0 光立方进行检测，而所有有核细胞 (99%) 因被 AO 染料染色而发出绿色荧光，并使用 GFP 2.0 光立方进行检测。

细胞凋亡检测

使用 4 µM 星孢菌素对 U2OS（人骨肉瘤上皮）细胞进行培养以诱导调往，使用 CellEvent Caspase 3/7 Green 检测试剂和 SYTOX Deep Red 核酸染料进行标示，并在配备了 GFP 2.0 和 Cy5 2.0 光立方的 Countess 3 FL 细胞计数仪上进行计数。分析发现了凋亡（绿色，83%）、死亡（红色，32%）和“将死”（青色，16%）细胞。百分比总和超过 100%，因为表达这两种染料的细胞中有 16% 在所有三个类别中都有计数。

细胞凋亡检测。荧光染料可检测细胞凋亡的不同方面和阶段，如质膜改变（Annexin V）、线粒体变化 (JC-1) 或半胱天冬酶激活（Caspase 3/7）。将其中一种与细胞活性染料配对，使用 Countess 3 FL 进行检测，可以识别凋亡细胞以及活细胞和死细胞。

转染效率。评估细胞群中成功转染或转导细胞的百分比对于研究至关重要。通常，转染或转导与 GFP 等荧光蛋白报告基因相关。Countess 3 FL 全自动细胞计数仪装入选择好的光立方后，可通过一种快速简单的方法轻松获得转染效率数据。

转染效率

用 GFP 表达载体转染 Jurkat 细胞。（左）在 EVOS M5000 成像系统上采集的这幅图像中，可用看到细胞附着在血管上。（右）在配备 EVOS GFP 光立方的 Countess 3 FL 细胞计数仪上对胰酶消化后的细胞进行计数。分析表明，50% 的细胞转染成功。

“我们比较了血球计数板和 Countess II，结果总是很接近。荧光检测功能让我们可以测定转染和转导效率。当需要检测超过两种荧光时，很容易更换荧光检测所需的光立方。自动对焦非常有效和准确，同时可以手动对焦。”

David Waynar，

Santa Cruz Biotechnology

EVOS LED 光立方

使用 Countess 3 FL 全自动细胞计数仪的荧光功能，您可以轻松可视化荧光蛋白，并在细胞培养室中进行凋亡或增殖检测。

 

Countess 3 FL 仪器有两个可选荧光通道，可检测插入的光立方测定的荧光颜色。Countess 3 FL 仪器可搭配 14 种不同且可更换的光立方，不限于只能检测表达 GFP 和 RFP 的细胞。

 

在 Countess 3 FL 上为这些荧光应用提供动力的 Invitrogen EVOS LED 光立方可提供超过50,000个小时的明亮（可调）照明，但随着时间的推移，它仍可保持恒定，并且降低程度小。全新 EVOS LED 光立方不仅经济环保，还具备可精准控制、易维护和出色的稳定性等诸多特点。

 

每个光立方都包含 LED、发光元件和滤光片。光立方可由用户更换，由 Countess 3 FL 系统自动检测，方便即插即用。

提示：Countess 3 FL 细胞计数仪不附带用于根据所用染料和荧光蛋白进行定制的光立方。

 

选择光谱与您想使用的染料和应用相匹配的光立方。光立方易于更换，可随时根据新的应用要求购买。支持种类丰富的染料。支持种类繁多的染料。

 

尽管许多研究人员都选择 GFP 和 RFP 进行荧光蛋白检测，但有14种不同的 EVOS LED 光立方可供选择。DAPI 是传统使用的细胞核染料。该表显示了七种常用光立方可检测的常用染料。

 

假设您对测量细胞群中细胞的凋亡和活性都感兴趣。您可以使用测量半胱天冬酶活化的细胞凋亡指示剂，如 CellEvent 半胱天冬酶 -3/7 绿色荧  光检测试剂盒与 EVOS GFP 2.0 光立方反应。 此外，可使用 SYTOX Red 死细胞 stai 等活性染料 和 EVOS Cy5 2.0 轻 DUB ETO 以测量已经过度凋亡的死细胞。这种染色组合，连同两种 EVOS 光立方，提供了一种快速简单的多重通道方法来获得细胞凋亡和活性数据。

七种常见的光立方及其兼容的常见染料

货号 

光立方

激发波长 (nm) 

发射波长 (nm)

常见兼容染料/荧光蛋白
AMEP4950DAPI 2.0357/44447/60DAPI、Hoechst、NucBlue、Alexa Fluor 350、BFP
AMEP4951GFP 2.0470/22525/50GFP、Alexa Fluor 488、SYBR Green、FITC、Calcein、Fluo-4、MitoTracker Green、pHrodo Green
AMEP4954YFP 2.0500/24542/27EYFP、吖啶橙 (+DNA)
AMEP4952RFP 2.0531/40593/40RFP、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 555、Cy3、PE、dTomato、MitoTracker Orange、Rhodamine Red、SYTOX Orange
AMEP4955Texas Red 2.0585/29628/32Texas Red、Alex Fluor 568、Alexa Fluor 594、MitoTracker CMXRos、mCherry、pHrodo Red、Cy3.5、CellTracker Red CMTPX
AMEP4956Cy5 2.0628/40692/40Cy5、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor660、DRAQ5
AMEP4667Cy7710/40809/81Cy7、IRDye™ 800CW、DyLight 750

优化过的 ReadyCount 试剂

荧光染色可以提供关于细胞的丰富数据，特别是在混合样本中。但市售染料可能难以混合、定量以获得最佳数据信息。Invitrogen ReadyCount 试剂是经过与 Countess 3 FL 全自动细胞计数仪配合使用预先优化且批间稳定的荧光染料。

 

ReadyCount 试剂可在混合细胞群内对特异有核细胞进行染色，与适当的 EVOS 光立方匹配时降低复杂性并提高计数和样品可再现性。只需将 10 µL 的细胞样本与 10 µL 的染料混合，将溶液吸取到 Countess 腔室或可重复使用计数板中，然后将计数板插入仪器。

ReadyCount Red 死细胞染料

用 ReadyCount Red 死细胞染料染色并使用 Texas Red 光立方成像的热灭活 Jurkat 细胞，可确认死细胞检测。

该试剂为死细胞染色，可搭配 EVOS RFP 2.0 或 Texas Red 2.0 光立方进行检测。

ReadyCount Blue 细胞核染料

使用 ReadyCount Blue 细胞核染料染色并使用 DAPI 光立方成像的活 Jurkat 细胞，可确认活细胞检测。

该试剂为核酸染色，可搭配 EVOS DAPI 2.0 光立方进行检测。

ReadyCount Green/Red 细胞活性染料是一种优化过的 AO/PI 混合物，可将有核细胞染为绿色，将死细胞染为红色，在与 EVOS GFP 和 RFP 或 Texas Red 光立方配合使用时，会发出荧光并计数。细胞以 1.0 倍放大率显示（左）和以 4.0 倍放大率显示（右）。

例如，ReadyCount Green/Red 细胞活性染料是吖啶橙和碘化丙啶 (AO/PI) 的优化混合物，两者分别是有核细胞和活性的标准染料。即使是在使用台盼蓝也极难计数的外周血单核细胞 (PBMC) 样本中，AO/PI 染料也可区分红细胞 (RBC)、血小板和碎片。

订购信息

要查看 ReadyCount Green/Red 活性染料的说明，请参阅上面的荧光计数应用。

视频和演示

细胞计数仪规格

 

技术规格处理时间：<30 秒
样本浓度范围：1 x 10⁴–1 x 10⁷ 个细胞/mL
颗粒直径范围：约 4–60 µm
细胞直径范围：约 4–60 µm
规定的样本体积：10 μL
USB 驱动器：32 GB（兼容 FAT32 、exFAT 或 NTSF）
光学器件：500 万像素摄像头、2.5 倍光学放大倍率
物理特性仪器尺寸：
9 in. 宽 x 5½ in. 深 x 9 in. 高；228.6 mm 宽 X 139.7 mm 深 x 228.6 mm 高
重量：8 lb；17.6 kg
计数区域

面积：2.26 mm x 1.69 mm (3.82 mm²)

Graphic image depicting the area of a typical standard hemocytometer and the area counted by the Countess 3 Cell counter which is significantly larger
仪器附带配件用于存储和向计算机传送数据的 USB 驱动器
Countess 一次性玻片架
Countess 可重复使用玻片架
Countess 细胞计数板（50 片）
电源线和 4 个适用于大多数国家的电源插头适配器
快速参考卡（QRC）
另售配件Countess 可重复使用计数板
高功率 USB Wi-Fi 模块（适配器）
Countess 一次性细胞计数板
台盼蓝染料
Countess SAE 软件解决方案
Countess 3 细胞计数标准玻片

订购信息

* 自带不需要额外付费的延长保修

从以下项目中选择后，将提供自定义报价：
  • Countess 3 FL 全自动细胞计数仪
  • Countess 3 FL 可重复使用计数板
  • Countess 一次性细胞计数板（50 片）
  • Countess 一次性细胞计数板（500 片）
  • Invitrogen 台酚蓝染料 (0.4%)
  • EVOS 光立方，GFP 2.0
  • EVOS 光立方，RFP 2.0
  • EVOS 光立方，DAPI 2.0
  • ReadyCount Green/Red 活性染料
  • 3 年快速换机延保

仅供研究使用。不可用于诊断程序。