抗体内化

一些荧光强度不受环境影响的荧光基团（如Invitrogen Alexa Fluor染料），用于抗体内化研究时需要使用淬灭剂。而pHrodo iFL 染料在中性pH条件下不发出荧光，内化后在酸性pH环境下可发出明亮的荧光，且无需使用淬灭剂（如图），是一类便捷高效的抗体内化检测工具。

pHrodo iFL 系列和pHrodo深红色染料在中性pH下几乎不发出荧光，随着染料被内化且pH降低，远红、红色或绿色荧光信号会逐渐增强，而荧光信号的增强可用于检测胞吞途径的过程。区别于pHrodo iFL 绿色和红色染料，pHrodo深红染料的pKa更低，直到晚期内化阶段才会发出荧光。

低 pKa 的 pHrodo Deep Red 经过优化，用于晚期内体和溶酶体检测。使用 pHrodo Deep Red 标记赫赛汀（用于治疗乳腺癌和胃癌的单克隆抗体）。使用由 pHrodo Deep Red 标记的赫赛汀和 CellLight 早期内体-RFP（左）、CellLight 晚期内体-RFP（中）和 CellLight 溶酶体-RFP（右）处理 SKBR3 细胞。过夜孵育后，在 37℃ 下使用 NucBlue Live 核染料将样本染色 30 分钟。使用 EVOS M7000 细胞成像系统获得荧光图像并叠加。重叠的荧光信号（白色）表明，用 pHrodo Deep Red（洋红色）标记的内化赫赛汀抗体在晚期内体和溶酶体中发出荧光，但在早期内体中不发出荧光。这些数据表明，晚期内体和溶酶体中的酸性 pH（5.5–6.0）环境，可以激活 pHrodo Deep Red 从无荧光变为深红色荧光。

pHrodo iFL Green和pHrodo iFL Red活性染料是在pHrodo染料（用于吞噬、内吞、和内化过程的指示剂）基础上进行升级改进而来的。pHrodo iFL染料的溶解性进行了优化，提高了与标记抗体的结合，避免可能会在结合过程中发生沉淀。荧光染料可采用三种不同的抗体标记技术进行了标记结合，以满足您检测抗体内化的需要。

pHrodo iFL染料可通过抗体上的赖氨酸用于传统的抗体标记。这些氨基反应性的pHrodo iFL STP酯具有绿色和红色两种版本，可作为单独包装或微量蛋白标记试剂盒提供，后者包含标记及纯化蛋白或抗体所需的全部试剂。