ADC 发现用抗体内化和降解检测

细胞表面受体与其特异性抗体结合时，可诱导发生受体介导的内吞作用。这一过程对于研究癌细胞的靶向药物递送，特别是抗体-药物偶联物 (ADC) 的递送至关重要。ADC 是与强效细胞毒性分子连接的单克隆抗体，可被运输到溶酶体以释放药物并杀死肿瘤细胞，或通过内体通路回收。

了解细胞内运输途径对推进药物发现至关重要。ADC 或抗体可以与我们的 pH 值敏感的 pHrodo 染料连接以监测内化或与 LysoLight 染料连接，以确认药物的溶酶体降解，为有效的药物发现提供易于使用的工具。

了解基于 pHrodo 染料或 LysoLight 染料的检测试剂盒产品：

• 使用 pHrodo Deep Red 进行特异性晚期内体检测
• 使用 SiteClick pHrodo 标记系统进行可重现的位点特异性标记
• 使用 Zenon pHrodo 试剂快速筛查抗体内化
• 使用溶酶体 Deep Red 直接检测溶酶体降解

Invitrogen pHrodo 试剂盒和试剂 利用 pH 值敏感性技术，使研究人员能够以高特异性进行内吞作用或吞噬作用的研究。pHrodo 染料有红色、绿色和深红色，在细胞外环境的中性 pH 值条件下不发荧光。只有在内体或溶酶体的酸性环境时， pH 敏感性染料才会发出明亮的荧光。这可大幅度减少背景荧光，并且在内化测定中无需使用淬灭剂或洗涤步骤进行检测。

Invitrogen pHrodo 染料的 pH 敏感性技术可与其他标记技术结合使用。其中包括 SiteClick 抗体标记的位点特异性技术和快速 Zenon 抗体标记方法，以满足您的特定内化检测需求。

Invitrogen LysoLight 抗体标记试剂盒和反应性染料是一个强大工具，可用于监测抗体、蛋白质或抗体-药物偶联物 (ADC) 的分解代谢溶酶体降解的。与我们依赖于 pH 梯度的 pHrodo 技术不同，即使在晚期内体中，LysoLight 偶联抗体或蛋白质也不发荧光。一旦到达溶酶体的高蛋白酶含量环境，LysoLight 染料就会发出独特的荧光，表明蛋白水解。

该机制提供了出色的灵敏度和特异性，以了解蛋白质或 ADC 的内化和运输。研究人员还可以使用 LysoLight 技术来评估靶向蛋白质降解产物候选药物走向分解代谢或回收途径的倾向。这有助于靶向蛋白质降解领域的研究人员对候选物进行微调，以获得最大的治疗潜力。LysoLight 试剂盒和试剂可与多种平台兼容，如流式细胞分析、高内涵成像和 IncuCyte® 活细胞分析系统。

阅读蛋白质降解机制文章以了解更多信息。

细胞表面受体与其特异性抗体结合时，可诱导发生受体介导的内吞作用。它们通常被作为靶向传递治疗用药物、毒素、酶或DNA的载体进行研究。

我们可提供多种抗体标记染料，用于基于洗涤或淬灭的检测，对抗体内化进行检测。

一些荧光强度不受环境影响的荧光基团（如Invitrogen Alexa Fluor染料），用于抗体内化研究时需要使用淬灭剂。而pHrodo iFL 染料在中性pH条件下不发出荧光，内化后在酸性pH环境下可发出明亮的荧光，且无需使用淬灭剂（如图），是一类便捷高效的抗体内化检测工具。

pHrodo iFL 系列和pHrodo深红色染料在中性pH下几乎不发出荧光，随着染料被内化且pH降低，远红、红色或绿色荧光信号会逐渐增强，而荧光信号的增强可用于检测胞吞途径的过程。区别于pHrodo iFL 绿色和红色染料，pHrodo深红染料的pKa更低，直到晚期内化阶段才会发出荧光。

pHrodo iFL Green和pHrodo iFL Red活性染料是在pHrodo染料（用于吞噬、内吞、和内化过程的指示剂）基础上进行升级改进而来的。pHrodo iFL染料的溶解性进行了优化，提高了与标记抗体的结合，避免可能会在结合过程中发生沉淀。荧光染料可采用三种不同的抗体标记技术进行了标记结合，以满足您检测抗体内化的需要。

SiteClick抗体标记系统可以简单且位点特异地将化合物（包括荧光染料或毒素等）连接至几乎所有IgG抗体只有在重链才存在的N端多糖位置，远离抗原结合结构域，实现每一次标记之间和不同抗体之间（无论哪种构型和宿主种属）的出色可重复性。抗体可以通过在糖残基上插入叠氮基团进行酶修饰，而使其可以发生点击化学反应，然后与一系列Click-iT sDIBO Alkynes（可标有Alexa Fluor染料、生物素或其他所需连接分子的活性形式）通过Click化学反应进行标记物连接。

Zenon抗体标记产品提供了一种非常快速（约十分钟内）标记IgG抗体的方法，从而成为抗体内化筛选的一种非常高效有用的工具。Zenon标记方法采用了与pH敏感的pHrodo iFL染料或经典的Alexa Fluor染料偶联结合的Fab片段。这些Fab片段可直接结合至IgG抗体的Fc区，且不影响目标抗体的抗原识别位点，同时也具有很好可靠的标记恒定度。Zenon技术可标记低至1 μg 的抗体，与传统的使用氨基或巯基反应性标记方法不同，Zenon抗体标记可兼容BSA以及其他的稳定蛋白。

pHrodo iFL染料可通过抗体上的赖氨酸用于传统的抗体标记。这些氨基反应性的pHrodo iFL STP酯具有绿色和红色两种版本，可作为单独包装或微量蛋白标记试剂盒提供，后者包含标记及纯化蛋白或抗体所需的全部试剂。