Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪特点

Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪的速度极快，分选速度超过 70,000 个事件/秒 (eps)，分析速度超过 100,000 eps。        Bigfoot 能够 6 路分选到各种试管、4路分选到96孔和384孔板、垂直分选到1536孔板。 此外， 虚拟18路分选 允许研究人员从单个或多个样品中同时分选出多个细胞亚群。对于批量分选，InfiniSort 功能可实现按顺序执行多个试管或微孔板分选。

Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪可在8秒内完成96孔板分选，在11秒内完成384孔板分选。    

微孔板分选不仅速度快，而且非常准确。利用 HRP 染色法，通过 TMB 底物的显色反应对分选液滴进行确认，实验证实单个液滴可以小体积分选到96孔 PCR 板或384孔 PCR 板内，且靶向分选的准确率达100%。我们的 Bigfoot白皮书 详细解释了为实现如此快速而准确的分选而开发的创新设计。

Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪的一个特色是带整合式 II 类生物安全柜，它符合国家卫生基金会国际标准第49条所规定的人员和产品保护标准，其功能与 II 类 A2 生物安全柜相同。这款定制设计的安全柜可保护操作人员和样品免受气溶胶的损害和污染，且不会影响高参数细胞分选仪的性能或实验流程。单独的气溶胶管理系统符合 ISAC 关于流式细胞分选仪的指导原则。

体贴周到的整合式生物安全柜设计方便仪器操作和简化用户的实验流程。可移动窗格可轻松升降，便于安全地接触上样区域或分选喷嘴。样品区域的内部控制面板可减少仪器操作人员频繁进出分选区域的需要。流经生物安全柜的空气可排入实验室，或者通过选配的罩棚进入外部排气系统。

Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪的所有配置在作为传统细胞分选仪时都能发挥令人满意的功能，应用补偿模式来解决荧光染料间的溢漏问题。Sasquatch 软件可以构建并分析高达 60 x 60 补偿矩阵（使用所有60个检测器）的超多色实验方案。无需更改实验方案或分析方法，即可将现有的传统流式实验方案轻松迁移到 Bigfoot 仪器上运行，同时细胞分选应用具有高通量、高性能、易用性和安全性的优势。

此外，大多数 Bigfoot 配置均支持全光谱解析技术，可使用光谱解析而不是传统补偿模式来分析不同荧光染料发出的信号。 由于光谱解析技术可以对每个荧光染料的全光谱信号进行分析，所以可以在同一实验中使用具有相似信号的荧光染料，从而增加实验中可以同时检测的荧光通道数量。这对于深度免疫表型分析、生物标记物筛选以及其他多色应用尤其重要。

利用 Bigfoot 的全光谱解析配置，可以在同一台流式细胞分选仪上同时运行传统补偿和光谱解析两种模式，可以在需要进行多色实验时转换数据分析模式。

全光谱流式技术的一个重要优势是在统一实验中可以同时检测到更多参数（荧光染料）。Bigfoot 流式细胞分选仪最多可配置 9 个激光器和 60 个检测器，从而支持在超多色流式实验方案中对细胞亚群进行光谱分析和分选。例如，该图显示了 56 个荧光染料的组合光谱特征图，不仅显示了每个荧光染料独特的光谱特征，还显示出可以添加其它荧光染料的位置。

全光谱解析的第二个优势是自发荧光可视为另一个荧光染料的光谱特征，从而去除自发荧光的干扰。与传统的流式细胞仪不同，自发荧光不会限制染料的选择，可根据实验需要进行评估或去除。

有关全光谱流式细胞术的硬件、光学系统、分析、优势和劣势的详细介绍，请参阅流式学习中心中的全光谱流式细胞术基础原理一文。 

某些全光谱流式细胞分析仪会在采集所有细胞后进行光谱解析，但这不能满足细胞分选的需要，因为细胞分选是在其数据采集和分析的过程中同时进行的。 Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪可进行实时光谱解析，并将解析后的结果用于细胞分选。 大量平行的、流水线式数据处理模块消除了因数据解析速度跟不上细胞获取速度时造成的硬件丢失率。高分辨率的光谱解析算法也会提高分选细胞的纯度。

Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪尤其适合于超多色实验方案或高通量相关的分选应用。

通过先进的自动化设计和软件向导，不同经验水平的操作人员都能自信地使用和控制该仪器。例如，液滴延迟时间——含有细胞的液滴与样品流之间的断点——对于细胞能否被准确分选至关重要。整合式控制系统可自动持续确保全天候液流的稳定性和准确的液滴延迟。

为了简化实验流程并减少操作失误，Bigfoot 每天开机后即可运行自动化启动、流路校准、仪器质控和液滴延迟，简化分选前的仪器设置，使得系统准备就绪时即可运行实验。电子系统可根据喷嘴大小和压力值自动设置最佳的激光延迟时间。如果检测到气泡，系统会及时通知操作人员并停止分选以节省珍贵样品。整合式温控装置 (4–37 °C) 和涡旋仪可保持样品的完整性，而收集管温度控制可保持分选细胞的活性。

Sasquatch (SQ) 软件的用户界面直观、整洁，其内置实验流程简化了细胞采集、分析和分选步骤。先进的荧光染料选择器有助于设计传统补偿或全光谱实验方案，并会提示存在冲突的染料。实验向导可协助运行对照样品、发现潜在问题以及应用光谱解析算法。

软件分析功能包括图形叠加、彩色设门、反向设门、索引分选和各种统计图，并且软件可以生成与其他分析软件兼容的 FCS 文件。该软件还可生成关于系统使用、仪器质控、趋势分析和分选摘要的清晰报告。

Bigfoot 系统提供从六个进样位置进行上样，可根据使用的适配器自动检测样品管尺寸（1.5、5 或 15 mL）。多位上样器只需一次或两次上样便可完成一个5到10色流式实验的对照样品上样。多管上样能力对于研究越来越常见的20色以上流式实验时尤为重要。所有与样品相关的硬件系统，包括多位上样器，都包含在整合式生物安全柜内，以确保最佳的安全性、效率和性能。

一个上样管预留给校准微球，从而省却了每天从冰箱中取出微球并进行稀释这样一个准备日常质控品的步骤。机载清洗工作站可在8秒内完成一个完整的清洗和反冲循环，从而使样品之间的残留量极低。当样品量不足时，样品底部气泡检测器会在 50 毫秒内作出响应，停止进样，清洗进样针，并在无需用户介入的情况下移至下一个样品管。

在分选区，Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪的空气激发感应装置确保对脆弱细胞的影响很小，在不降低得率的情况下最大限度地保证高速分选时的细胞活性。精确的液滴定向确保了单细胞分选的准确度、回收率和速度。 分选收集支架可兼容1.5、5、15和 50 mL 试管，多达1,536个孔的微孔板，显微镜载玻片，以及10×基因芯片。喷嘴更换向导简化了更换50、70、100、120和 150 μm 不同喷嘴吸头的设置。

Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪专为不同研究领域的细胞分选应用而设计，在保证高配置、高性能的同时，最大程度地增加了灵活性、易用性以及简化您的实验流程。例如，校准微球预留于六位上样器中的其中一个，无需每天制备新的质控品。（大约每个月更换一次质控微球管即可。）在整合式生物安全柜内有宽敞的操作空间，用于放置样品架或板以及方便接触内置涡旋仪、样品管架和生物危害品袋。这使得实验人员可以在不破坏安全保障的情况下完成许多常规实验操作。

虽然 Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪的设计旨在适合个人实验室的工作流程，但因其高配置、高性能、高速度、自动化的特点，它也非常适合作为流式平台的细胞分选主力。

眼见为实，在这段视频中，三位参与我们贝塔测试计划的流式平台负责人讲述了他们使用 Bigfoot 全光谱流式细胞分选仪的亲身体验。他们分享了 Bigfoot 系统相比于其他品牌的细胞分选仪在性能、自动化、易用性、占地面积小、噪音低和灵活性等方面的优势。“我称之为流式细胞仪中的瑞士军刀，”英国剑桥Babraham研究所的 Rachael Walker 博士说。