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更出色的EdU细胞增殖检测方法-代替您繁琐的BrdU细胞增殖检测法Invitrogen Click-iT EdU细胞增殖分析试剂采用Click-iT化学技术,可为新合成的DNA检测与定量提供比传统BrdU细胞增殖检测方法更优秀的替代物。 当在DNA合成过程中掺入修饰的核苷EdU(5-乙炔基-2'-脱氧尿苷)时,可以通过快速的“Click-iT化学”反应检测到它,并且对细胞的破坏作用最小。 |
Click-iT EdU检测技术相比于BrdU具有更简便、更快速、更易操作的优点。 与使用溴脱氧尿苷(BrdU)检测法不同,Click-iT EdU检测法不是基于抗体,因此并不需要DNA变性以检测掺入的核苷。 此外,Click-iT EdU可以与R-PE、R-PE tandems 和GFP等荧光蛋白复用提高效力。当您平行比较这些方法时,Click-iT EdU和Invitrogen Click-iT Plus EdU在测定细胞增殖方面的优势是显而易见的。(表格1)。
Click-iT EdU试剂盒 | Click-iT Plus EdU试剂盒 | BrdU | |
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多重 | 与大多数标准荧光染料(不包括FP和双联体)联用 |
与所有标准荧光染料(包括GFP和其他FP及敏感的双联体)联用
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可变的
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基础实验所需的试剂 |
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出结果时间 (标记+检测) |
通常 < 90分钟
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5小时至过夜
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步骤数 |
6
(无需多个破膜步骤, 不需要 Dnase 处理) |
~10
| |
DNA变性 |
无
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需要
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Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 流式试剂盒 | Click-iT Plus EdU Pacific Blue 流式试剂盒 | Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式试剂盒 | Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 流式试剂盒 | Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647流式试剂盒 | |||
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检测基本原理 | 作为传统BrdU检测的替代方法,将修饰的胸苷类似物EdU掺入增殖细胞中新合成的DNA中。使用明亮且光稳定的Invitrogen Alexa Fluor染料,通过快速、高度特异性的点击反应标记细胞。 | ||||||
多重 | Click-iT EdU Plus试剂盒具有最大限度的多色检测性能。 温和的点击化学方案不会破坏细胞表位(与BrdU方案不同)并且与标准抗体标记(小分子有机染料,如 FITC 或 Alexa Fluor染料,以及敏感的双联体,例如 Invitrogen R-PE-Cy5或APC-Cy7),荧光蛋白和常见的细胞染色方法兼容。 | ||||||
读取 | 荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。 | ||||||
荧光标记 | Alexa Fluor 350 吡啶甲基叠氮化物 | Pacific Blue 吡啶甲基叠氮化物 | Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物 | Alexa Fluor 594 吡啶甲基叠氮化物 | Alexa Fluor 647 吡啶甲基叠氮化物 | ||
激光(nm) | UV | 405 | 488 | 532 或 561 | 633/635 | ||
Ex/Em (nm) | 350/438 | 410/455 | 495/519 | 532 或 561/615 | 650/668 | ||
样品类型 | 针对活细胞进行了优化,固定之后进行点击检测步骤。 | ||||||
参考文献 | |||||||
产品规格 | 50 个反应 | 50 个反应 | 50 个反应 | 100 个反应 | 50 个反应 | 50 个反应 | 100 个反应 |
货 号 | C10645 | C10636 | C10632 | C10633 | C10646 | C10634 | C10635 |
Click-iT EdU Pacific Blue流式细胞分析试剂盒 | Click-iT EdU Alexa Fluor 488流式细胞分析试剂盒 | Click-iT EdU Alexa Fluor 647流式细胞分析试剂盒 | |||
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检测基本原理 | 标准的Click-iT EdU 试剂盒兼容性有限;它们与有机染料标签(如FITC或Alexa Fluor染料)兼容,但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白(R-PE)和基于R-PE的双联体(即R-PE-Cy5结合物)不兼容。 | ||||
多重 | 标准的Click-iT EdU试剂盒兼容性有限;它们与有机染料标签(如FITC 或 Alexa Fluor 染料)兼容,但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白(R-PE)和基于R-PE的双联体(即R-PE-Cy5结合物)不兼容。 若想与荧光蛋白和基于 APC 和 R-PE 的灵敏双联体兼容,我们建议使用 Click-iT EdU Plus 流式细胞分析试剂盒。 | ||||
读取 | 荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。 | ||||
荧光标记 | Pacific Blue 叠氮化物 | Alexa Fluor 488 叠氮化物 | Alexa Fluor 647 叠氮化物 | ||
激光器 | 405 nm | 488 nm | 633/635 nm | ||
Ex/Em (nm) | 410/455 | 495/519 | 650/668 | ||
样品类型 | 针对活细胞进行了优化,固定之后进行点击检测步骤。 | ||||
参考文献 | |||||
产品规格 | 50 个反应 | 50 个反应 | 100 个反应 | 50个反应 | 100 个反应 |
货 号 | C10418 | C10424 | C10420 | C10425 | C10419 |
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 流式试剂盒 | Click-iT Plus EdU Pacific Blue 流式试剂盒 | Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式试剂盒 | Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 流式试剂盒 | Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647流式试剂盒 | |||
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检测基本原理 | 作为传统BrdU检测的替代方法,将修饰的胸苷类似物EdU掺入增殖细胞中新合成的DNA中。使用明亮且光稳定的Invitrogen Alexa Fluor染料,通过快速、高度特异性的点击反应标记细胞。 | ||||||
多重 | Click-iT EdU Plus试剂盒具有最大限度的多色检测性能。 温和的点击化学方案不会破坏细胞表位(与BrdU方案不同)并且与标准抗体标记(小分子有机染料,如 FITC 或 Alexa Fluor染料,以及敏感的双联体,例如 Invitrogen R-PE-Cy5或APC-Cy7),荧光蛋白和常见的细胞染色方法兼容。 | ||||||
读取 | 荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。 | ||||||
荧光标记 | Alexa Fluor 350 吡啶甲基叠氮化物 | Pacific Blue 吡啶甲基叠氮化物 | Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物 | Alexa Fluor 594 吡啶甲基叠氮化物 | Alexa Fluor 647 吡啶甲基叠氮化物 | ||
激光(nm) | UV | 405 | 488 | 532 或 561 | 633/635 | ||
Ex/Em (nm) | 350/438 | 410/455 | 495/519 | 532 或 561/615 | 650/668 | ||
样品类型 | 针对活细胞进行了优化,固定之后进行点击检测步骤。 | ||||||
参考文献 | |||||||
产品规格 | 50 个反应 | 50 个反应 | 50 个反应 | 100 个反应 | 50 个反应 | 50 个反应 | 100 个反应 |
货 号 | C10645 | C10636 | C10632 | C10633 | C10646 | C10634 | C10635 |
Click-iT EdU Pacific Blue流式细胞分析试剂盒 | Click-iT EdU Alexa Fluor 488流式细胞分析试剂盒 | Click-iT EdU Alexa Fluor 647流式细胞分析试剂盒 | |||
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检测基本原理 | 标准的Click-iT EdU 试剂盒兼容性有限;它们与有机染料标签(如FITC或Alexa Fluor染料)兼容,但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白(R-PE)和基于R-PE的双联体(即R-PE-Cy5结合物)不兼容。 | ||||
多重 | 标准的Click-iT EdU试剂盒兼容性有限;它们与有机染料标签(如FITC 或 Alexa Fluor 染料)兼容,但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白(R-PE)和基于R-PE的双联体(即R-PE-Cy5结合物)不兼容。 若想与荧光蛋白和基于 APC 和 R-PE 的灵敏双联体兼容,我们建议使用 Click-iT EdU Plus 流式细胞分析试剂盒。 | ||||
读取 | 荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。 | ||||
荧光标记 | Pacific Blue 叠氮化物 | Alexa Fluor 488 叠氮化物 | Alexa Fluor 647 叠氮化物 | ||
激光器 | 405 nm | 488 nm | 633/635 nm | ||
Ex/Em (nm) | 410/455 | 495/519 | 650/668 | ||
样品类型 | 针对活细胞进行了优化,固定之后进行点击检测步骤。 | ||||
参考文献 | |||||
产品规格 | 50 个反应 | 50 个反应 | 100 个反应 | 50个反应 | 100 个反应 |
货 号 | C10418 | C10424 | C10420 | C10425 | C10419 |
Click-iT EdU 技术的优势在于化学方面 - 独特的小分子和低背景的标记物以及检测基团之间特异性共价反应。 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)是含有炔烃的核苷类似物。 在铜催化反应中,炔与染料标记的叠氮化物反应,形成稳定的共价键。 小分子的叠氮化物试剂可以有效地接触DNA而无需对细胞进行破坏处理。 这样大大地简化了测定,获得的结果与使用传统的BrdU相似(或更好)(图1和图2)。
图1: 使用 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式细胞检测试剂盒和FxCycle Violet 染色剂进行细胞增殖分析。 根据 Invitrogen Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488流式细胞检测试剂盒操作步骤,用 10 μM EdU 处理 Jurkat 细胞1小时并用 Invitrogen Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物染色,然后用Invitrogen Violet 染色剂染色。 使用 488 nm (Click-iT EdU Alexa Fluor 488 染色剂)或 405 488 nm (对于FxCycle Violet 染色剂)激发波长,通过流式细胞术分析细胞。 (A) 显示S期细胞(DNA合成、包括 EdU 掺入)和G2/M或G0/G1细胞明显分离的直方图。 (B) 显示使用 FxCycle Violet 染色剂时的 DNA 含量分布直方图,G0/G1 和 G2/M 期峰由 S 期分割。 (C) 显示共阳性细胞的双参数 Click-iT Plus EdU 和 FxCycle 图,直接测量S期细胞百分比。
图 2. 使用mCherry荧光蛋白和 FxCycle Far Red染色剂进行 Alexa Fluor 488 Click-iT Plus EdU标记。 将表达mCherry的A549细胞使用10 µM EdU处理2小时,并按照推荐的染色方案检测。 图 A 为用 Alexa Fluor 488吡啶叠氮化物标记的细胞的直方图,用于鉴定S期细胞。 图 B 和 C 分别为存在(图B)和不存在铜时(图C)的Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 吡啶叠氮化物标记细胞发出的mCherry荧光,证明在点击反应中mCherry荧光保留。 图 D 为 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 和 Invitrogen FxCycle Far Red染色剂染色的DNA含量双参数图;共阳性的细胞处于S期。
与初代Click-iT EdU流式细胞检测相比,Click-iT Plus配方具有更好的多色兼容检测能力。 Click-iT Plus EdU检测可与R-PE和R-PE双联体,以及各种荧光蛋白(如GFP和mCherry)配合使用,同时还具有初代Click-iT EdU检测精确、快速的特点。
图 3. 用于评估人类T细胞CD3和DNA链断裂的免疫表型分析实验结果。 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488流式细胞检测试剂盒和 Hu CD3 PE-Cy7 荧光的双参数图。
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