CFSE升级-CellTrace细胞增殖检测试剂盒-赛默飞

Invitrogen CellTrace 荧光染料可以永久标记细胞，且不影响细胞形态和生理学特性，目的是追踪细胞在体内或体外进行传代或分裂的情况。

性能卓越 —明亮的单峰染色，更加准确地观察多代细胞
信号稳定 —即使在染色后，仍可以在细胞内保留数天
没有毒性 —无报告表示对细胞的增殖能力和生物学功能有影响
多种选项 —可以选择多种荧光，与抗体或细胞功能标志物（如GFP）同时使用

页面内容:

CellTrace 细胞增殖试剂盒选择指南
CellTrace 细胞增殖试剂盒工作原理
CellTrace 细胞增殖试剂盒实验方案

“在流式细胞仪上，CellTrace Violet 是在荧光染料中适用所有细胞类型的最佳细胞增殖检测试剂。与 CFSE 相比，CFSE 在高浓度时有细胞毒性，而 CellTrace Violet 对细胞的标记非常亮且毒性低，并能稳定地分布到子代细胞中，确保获得最佳分群的荧光信号。”

—安德鲁-菲尔比（Andrew Filby），流式细胞仪平台管理人兼ISAC SRL 负责人，纽卡斯尔大学

CellTrace细胞增殖试剂盒选择指南

	CellTrace Blue 细胞增殖试剂盒	CellTrace Violet 细胞增殖试剂盒	CellTrace CFSE 细胞增殖试剂盒	ellTrace Yellow 细胞增殖试剂盒	CellTrace Far Red 细胞增殖试剂盒
检测原理	永久标记细胞，可在不影响细胞形态和生理学特性的前提下，最终追踪细胞在体内或体外进行传代或分裂的情况。
读值方法	根据细胞群内的荧光强度水平来确定，从标记起，细胞开始传代次数。
荧光标记	CellTrace Blue	CellTrace Violet	CellTrace CFSE	CellTrace Yellow	CellTrace Far Red
激光	UV	405	488	532, 561	633/635
Ex/Em (nm)	355 or 375/410	405/450	495/519	546/579	630/661
多重检测
20 tests	C34574	C34571	C34570	C34573	C34572
180 tests	C34568	C34557	C34554	C34567	C34564
参考文献	引用文献

CellTrace细胞增殖试剂盒工作原理

CellTrace细胞增殖试剂盒含有细胞膜通透性非荧光酯，可通过扩散透过细胞膜进入细胞，并与胺基反应形成荧光分子。这种无荧光的酯进入细胞后，可被胞内酯酶转化为荧光产物。活化的琥珀酰亚胺酯与蛋白质中的胺基基团共价结合，使染料能够长时间保留在细胞中。

经过后续细胞分裂阶段，各个子代细胞会从母细胞中接收到大约一半的荧光染料，从而可对体内标记且生长的细胞的荧光强度进行分析。

采用流式细胞仪对细胞群体的荧光强度进行分析，即可测定出自标记细胞起的传代次数（图1）。

图1. 细胞标记原理。 (A) 通过染料稀释度分析细胞增殖. (B) 流式结果显示了来自初始细胞群的明亮的同种荧光信号。在后续细胞分裂产生的大量细胞中，每个子代细胞都具有母细胞一半的荧光强度。

为了进一步了解这些试剂与亲脂性荧光染料在细胞增殖上的适用性，Filby 和同事们发布了一种方法，用于比较三种琥珀酰亚胺酯类染料（包括 Invitrogen CellTrace Violet 和 CellTrace Far Red 染料）和两种亲脂性染料的性能表现。

文献：通过染料稀释法评价琥珀酰亚胺和亲脂性荧光染料在非静态细胞中细胞增殖研究的适用性

细胞代数的灵敏性检测

在体外标记数天或约7-8个分裂周期后，CellTrace染料的信号仍未被细胞的自发荧光覆盖，其信号仍可被检测到。将CellTrace Violet细胞增殖试剂盒和配有紫激光器的流式细胞仪搭配使用时，最多可检测到10代细胞 (图2) 。

文献：CellTrace Violet, Yellow和Far read的对比性研究

图2. 人淋巴细胞染色. 使用10 µM CellTrace Violet对人CD8+ T淋巴细胞进行染色，使用OpTmizer™ T细胞扩增培养基在37°C下培养7天。每毫升细胞样本液中加入200 ng小鼠抗人CD3抗体和100 ng白介素-2刺激细胞。

流式多色实验适用的多种选项

多种CellTrace细胞增殖试剂盒适用于紫外光、紫光、蓝光、黄光 (561 nm) 和红光激光器（图3），研究人员可同时检测细胞增殖分析与其他应用（如免疫分型、细胞分选和细胞周期分析），从而在单次实验中获得最多的信息，同时补偿很小。

CellTrace Violet和CellTrace Far Red同样与常用的绿光荧光染料，如FITC和Alexa Fluor™ 488或GFP等同时使用 (图4) 。

海报：CellTrace Violet与其他常用流式试剂共用的研究
海报：CellTrace Yellow与其他常用流式试剂共用的研究
文献：CellTrace Far Red与GFP共用的研究

图3. 使用CellTrace试剂追踪细胞传代。 在不同实验条件下追踪细胞增殖的不同代数， (A) 采用CellTrace Blue试剂；(B)采用CellTrace Violet试剂；(C) 采用CellTrace CFSE试剂； (D) 采用CellTrace Yellow试剂； (D) 采用CellTrace Far Red试剂。

图4. CellTrace Violet染色剂的适用性。在培养的非同期骨肉瘤细胞中，CellTrace Violet与GFP的光谱兼容性示例。 (A) 无GFP表达的未染色细胞。(B) 稳定表达GFP的未染色细胞。 (C) 使用5 µM CellTrace Violet染料染色且无GFP表达的细胞。(D)使用5 µM CellTrace Violet染色同时表达GFP的细胞。

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