使用流式细胞术进行肿瘤免疫学研究

肿瘤微环境通常包含多种细胞类型,包括肿瘤细胞、基质细胞、免疫细胞、内皮细胞和非致病性细胞。这些细胞通过直接细胞接触以及分泌蛋白和小分子化合物的方式共同组成了复杂、动态的肿瘤微环境系统。这些细胞和化学因子参与肿瘤的发展、转移和对宿主的免疫逃避。因此,了解肿瘤微环境对克服肿瘤在治疗过程中产生的耐药性非常关键。

工作原理:肿瘤微环境中的免疫监视作用

肿瘤细胞发生突变导致肿瘤来源抗原(TDAs)的形成

1.肿瘤细胞发生突变导致肿瘤来源抗原(TDAs)的形成,其在免疫原性细胞死亡时被释放出来,并被树突状细胞等抗原递呈细胞(APCs)捕获

APCs 通过将 TDA s呈递给初始 T 细胞来启动和激活 T 细胞

2.APCs 通过将 TDAs呈递给初始 T 细胞来启动和激活T细胞,并启动针对肿瘤细胞的免疫应答

启动和激活的效应T细胞浸润肿瘤组织

3.启动和激活的效应T细胞浸润肿瘤组织;T 细胞识别、结合和杀死表达TDA的恶性肿瘤细胞

肿瘤可以通过上调免疫检查点蛋白的表达来消耗T细胞

4.肿瘤可以通过上调免疫检查点蛋白的表达来消耗T细胞,或通过招募调节性T细胞来抑制T细胞的免疫功能(Tregs)


肿瘤微环境中的典型细胞类型

肿瘤微环境中的典型细胞类型

每种免疫细胞都具有特定的功能,以识别和清除肿瘤细胞。在实验室中鉴定免疫细胞通常需要进行复杂的多色免疫表型分析实验,以区分细胞表面标志物的细微差异。使用机械解离(并尽可能避免使用消化酶进行分离)的组织样本制备方法通常能更好地保护抗原表位,但通过这种方法制备的样品在进行流式分析时可能会引起仪器堵塞。Attune NxT流式细胞仪是一种基于非压力系统的仪器,能够分析粗略制备的实体瘤组织样品,而极少引起管路堵塞。


实体瘤样品制备和检测的典型实验流程

分离肿瘤样品

分离肿瘤样品

在含有蛋白的培养基(如 FBS) 中用无菌刀片机械解离肿瘤细胞

含有蛋白的培养基(如 FBS)中用无菌刀片机械解离肿瘤细胞

在含有蛋白质的培养基(如 FBS)中分离细胞
用PBS洗细胞

用PBS洗细胞

用细孔筛网过滤细胞

用细孔筛网过滤细胞

使用流式细胞仪上机检测

使用具有防堵塞功能的流式细胞仪进行上机检测,例如 Attune NxT流式细胞仪