使用流式细胞术对CART 细胞进行表型分析

过继免疫治疗指将免疫细胞输入患者体内以进行持续的抗肿瘤治疗。嵌合抗原受体(CARs)细胞是一种过继免疫制剂,通过在T细胞上嵌合重组的肿瘤抗原受体,来识别表达该特异性抗原的靶细胞。CAR T细胞可清除某些 B 细胞白血病中的恶性肿瘤细胞,并在治疗实体肿瘤方面也取得了一定的进展。

流式细胞术可加速对下一代 CAR 治疗的科学研究。了解检测 T 细胞衰竭和基因转录本的工具。

工作原理:CAR T 细胞如何诱导肿瘤细胞死亡

CAR T细胞诱导肿瘤细胞死亡

CAR T细胞流式检测实验流程

从供者样品中分离 T 细胞

从供者样品中分离 T 细胞

从供者样品中分离 T 细胞

使用抗体包被的 Dynabeads 磁珠刺激 T 细胞进行扩增

在 T 细胞内构建重组的肿瘤抗原受体

在 T 细胞内表达重组的抗原受体构建体

利用 NGS 或 PrimeFlow方法检测重组抗原受体的表达情况

利用 NGSPrimeFlow 方法检测重组抗原受体的表达情况

细胞活性和功能检测

细胞活性和功能检测

利用小鼠模型进行肿瘤消退实验

小鼠模型肿瘤消退检测


CAR T 细胞制备过程中的流式应用

T 细胞活化和扩增监测

T 细胞活化和扩增监测

如果没有特定刺激信号,T 细胞不会进行发生增殖。利用 Dynabeads 磁珠和细胞健康检测试剂盒,对细胞工程改造过的 T 细胞进行增增和活性检测。利用偶联了共刺激信号抗 CD3 和抗 CD28 抗体的临床级Dynabeads磁珠进行T细胞的分离、活化和扩增,该过程不需要滋养层细胞或人工添加细胞因子来刺激 T 细胞。然后,使用 细胞增殖和活性染料检测 T 细胞的扩增情况。

CAR T 细胞衰竭检测

CAR T细胞衰竭检测

肿瘤微环境内的免疫抑制分子可以抑制包括CAR T 细胞在内的 所有T 细胞的功能。可利用免疫组化方法分析CAR T 细胞浸润的肿瘤切片和流式细胞术分析消化后的肿瘤细胞进行检测。可进行细胞绝对计数并检测同一个样本中多个标志物,包括常见的免疫抑制指标 IDO1、PD-L1、FoxP3、TDO、IL-10 以及 TGFβ