Search Thermo Fisher Scientific
PCR实验中的常见问题主要与以下几个因素有关:反应条件、序列准确性、扩增得率和特异性。本页将介绍出现这些问题的可能原因以及我们对于解决这些问题的建议。
可能原因 | 建议 |
---|---|
DNA模板 | |
完整性较差 | |
低纯度 |
|
用量不足 | |
复杂的目的片段(如,高GC含量或含二级结构) |
|
长片段 | |
引物 | |
设计存在问题 | |
引物陈旧 |
|
用量不足 |
|
其它反应组分 | |
DNA聚合酶不合适 |
|
DNA聚合酶用量不足 |
|
Mg2+ 浓度不足 |
|
PCR添加剂或辅助溶剂过多 | |
反应混合物中的dUTP或经修饰的核苷酸 |
|
不均匀的试剂 |
|
热循环条件 | |
变性效果不理想 |
|
退火效果不理想 |
|
延伸效果不理想 | |
PCR循环数不合适 |
|
可能原因 | 建议 |
---|---|
DNA模板 | |
DNA起始量过多 |
|
完整性较差 | |
复杂的序列(如,高GC含量或含二级结构) |
|
长片段 | |
引物 | |
设计存在问题 | |
用量过多 |
|
其它反应组分 | |
DNA聚合酶过多 |
|
DNA聚合酶不合适 |
|
Mg2+ 浓度过高 |
|
热循环条件 | |
变性不充分 | |
退火温度错误 |
|
退火温度过低 | |
退火时间过长 |
|
延伸温度过高 |
|
延伸时间不足 |
|
循环数过多 |
|
可能原因 | 建议 |
---|---|
DNA聚合酶的保真度较低 |
|
Mg2+ 浓度过高 |
|
dNTP浓度不平衡 |
|
循环数过多 |
|
紫外线损伤DNA |
|
测序错误 |
|
可能原因 | 建议 |
---|---|
引物设计存在问题 |
|
产物质量低 |
|
核酸酶污染 |
|
紫外线损伤DNA |
|
测序错误 |
|
可能原因 | 建议 |
---|---|
引物设计存在问题 |
|
交叉污染 |
|
交叉污染 |
|
关于更多疑难问题帮助,请访问我们的 终点PCR和PCR引物支持中心 或联系我们的 技术支持团队。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。