Geneart 蛋白纯化服务

使用哺乳动物或昆虫细胞快速可靠地表达蛋白并进行生产

重组蛋白表达可用于生命科学研究的各个领域–从细胞蛋白分析到药物开发高产量蛋白生产。如果您对外包蛋白表达和纯化步骤感兴趣，我们的 GeneArt 蛋白纯化服务可以为您提供一种快速、可靠的方法，我们通过瞬时转染的哺乳动物或昆虫细胞获得正确折叠的天然蛋白。我们对整个工作流程中使用的条件进行了优化，通常可高效获得高产量纯化蛋白。然后，通过 ExpiCHO 表达系统为您提供蛋白服务。

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如何启动项目

下载并填写蛋白表达&纯化需求表 ，然后将其通过电子邮件（geneartprotein@thermofisher.com）发送至 GeneArt 蛋白服务团队。我们将为您回复报价和生产时间。（报价取决于项目具体信息，我们将在您咨询后为您提供报价。）

GeneArt 蛋白纯化服务的一般分步操作指南

蛋白序列和项目要求

启动项目的基本要求： 

  • 目标蛋白序列的电子文件 
  • 具体项目标准

DNA 优化和表达构建体的产生 

为了帮助确保获得最佳基因表达和最大设计灵活性，我们建议从每个蛋白表达项目着手，首先使用表达优化的基因序列和优化的表达载体。 

  • 使用 GeneOptimizer 软件进行 DNA 序列优化，保留其蛋白质的氨基酸序列。经证实，其可使许多蛋白具有更高且更可靠的表达水平（Fath 等，2011）。
  • 为了帮助实现最大表达，我们建议使用针对表达系统优化的载体。您也可以将您的表达载体邮寄给我们，或者由我们协助您选择一种表达优化载体。

了解更多：

  高级表达载体

质粒制备

为了为您提供转染即用型构建体，我们经验丰富的科学家使用成熟的方案、受质量控制的系统以及试剂来制备最佳纯化质粒 DNA（pDNA）。 

了解更多：

 

转染和表达

优化的表达质粒与我们适用于高产量重组蛋白表达的先进哺乳动物表达系统相结合，为您的结果带来不同。 

  • 优化的转染和细胞培养方案可最大程度地降低过程失败和延误的风险。 
  • 根据表达系统和表达蛋白的不同，培养时间介于 2-14 天之间，并可根据需要进行定制。 
  • 收获培养物上清液或细胞，并迅速有效地进行蛋白纯化。 

了解有关优化表达系统和转染条件的更多信息： 

mRNA 纯化

我们通常使用最先进的纯化方案，但也可以使用您发送给我们的定制方案。 

  • 第一轮纯化通常通过亲和色谱法进行（例如，使用 Fc 或 His 标签）。 
  • 也可以根据需要进行第二轮纯化（例如，使用 HPLC 体积排阻色谱法（SEC））来提高纯度。 

服务特色：

  • 亲和色谱法（提供几个标签）
  • 根据需要，额外进行抛光处理，获得高纯蛋白

归档和交付

对于所有蛋白表达和纯化项目，标准方法为执行几个基本的质量控制（QC）步骤并详细存档。包括采用 SDS-PAGE 和 Western blot 方法分析样品。我们还可以根据您的特定项目要求，提供其他质量控制方法，包括内毒素测试和 HPLC 法分析 SEC。我们可以根据需要自定义所有文档。成功通过所有 QC 检查后，放行纯化蛋白以进行装运。 

可交付的产品：

  • 转染所用的纯化蛋白和表达载体
  • 详细的文件资料，包括 SDS-PAGE 和 Western blot 分析数据

 

Step 1 : 测序

蛋白序列和项目要求

启动项目的基本要求： 

  • 目标蛋白序列的电子文件 
  • 具体项目标准
Step 2 : DNA 优化

DNA 优化和表达构建体的产生 

为了帮助确保获得最佳基因表达和最大设计灵活性，我们建议从每个蛋白表达项目着手，首先使用表达优化的基因序列和优化的表达载体。 

  • 使用 GeneOptimizer 软件进行 DNA 序列优化，保留其蛋白质的氨基酸序列。经证实，其可使许多蛋白具有更高且更可靠的表达水平（Fath 等，2011）。
  • 为了帮助实现最大表达，我们建议使用针对表达系统优化的载体。您也可以将您的表达载体邮寄给我们，或者由我们协助您选择一种表达优化载体。

了解更多：

  高级表达载体

Step 3 : 质粒制备

质粒制备

为了为您提供转染即用型构建体，我们经验丰富的科学家使用成熟的方案、受质量控制的系统以及试剂来制备最佳纯化质粒 DNA（pDNA）。 

了解更多：

 

Step 4 : 转染和表达

转染和表达

优化的表达质粒与我们适用于高产量重组蛋白表达的先进哺乳动物表达系统相结合，为您的结果带来不同。 

  • 优化的转染和细胞培养方案可最大程度地降低过程失败和延误的风险。 
  • 根据表达系统和表达蛋白的不同，培养时间介于 2-14 天之间，并可根据需要进行定制。 
  • 收获培养物上清液或细胞，并迅速有效地进行蛋白纯化。 

了解有关优化表达系统和转染条件的更多信息： 

Step 5 : mRNA 纯化

mRNA 纯化

我们通常使用最先进的纯化方案，但也可以使用您发送给我们的定制方案。 

  • 第一轮纯化通常通过亲和色谱法进行（例如，使用 Fc 或 His 标签）。 
  • 也可以根据需要进行第二轮纯化（例如，使用 HPLC 体积排阻色谱法（SEC））来提高纯度。 

服务特色：

  • 亲和色谱法（提供几个标签）
  • 根据需要，额外进行抛光处理，获得高纯蛋白
Step 6 : 归档和交付

归档和交付

对于所有蛋白表达和纯化项目，标准方法为执行几个基本的质量控制（QC）步骤并详细存档。包括采用 SDS-PAGE 和 Western blot 方法分析样品。我们还可以根据您的特定项目要求，提供其他质量控制方法，包括内毒素测试和 HPLC 法分析 SEC。我们可以根据需要自定义所有文档。成功通过所有 QC 检查后，放行纯化蛋白以进行装运。 

可交付的产品：

  • 转染所用的纯化蛋白和表达载体
  • 详细的文件资料，包括 SDS-PAGE 和 Western blot 分析数据

 

   

为什么选择 GeneArt 蛋白纯化服务？

GeneArt 蛋白纯化服务

 

所有内部生产： 从寡核苷酸合成到纯化蛋白的每个步骤都是机密信息，无需协调其他供应商
处理时间短： 从基因到蛋白仅需 30 个工作日起

可靠且先进的表达系统： FreeStyle 293、FreeStyle CHO、Expi 293、ExpiCHO、Bac-to-Bac 细胞系。所有市售试剂
卓越的基因表达优化： 专有 GeneOptimizer 软件

范围： 研究范围从 30 mL-25 L
定制服务： 即用型客户纯化方案，可扩展的功能

敬业且经验丰富的项目管理团队：在所有项目阶段都进行密切交流，拥有大型项目经验：
活跃 MSA 与大型制药公司
安全 E-business 解决方案：独特的门户网站

服务描述交付形式
从基因到蛋白
指定培养量		使用客户指定培养量的瞬时转染 HEK293、CHO 或昆虫细胞培养物进行蛋白表达和纯化
  • 使用指定培养量纯化的所有蛋白（或者，培养上清液或细胞）
  • 文件资料包括 SDS-PAGE 和 Western blot 分析数据
  • 表达质粒
从基因到蛋白
指定蛋白量
  • 使用瞬时转染 HEK293、CHO 或昆虫细胞培养物对客户指定保证量的蛋白进行蛋白表达和纯化
  • 试验性表达服务是强制性的
  • 客户指定量的纯化蛋白
  • 文件资料包括 SDS-PAGE 和 Western blot 分析数据
  • 表达质粒
从基因到蛋白
试验性的		确定瞬时转染 HEK293、CHO 或昆虫细胞产量的可行性研究
  • 用于客户指定蛋白量生产的报价
  • 文件资料包括 SDS-PAGE 和 Western blot 分析数据
  • 试验性研究得到的所有蛋白质
  • 表达质粒

请与我们的支持团队联系：geneartprotein@thermofisher.com，获取您的项目设置与报价。 

服务项目阶段或特征标准规格
哺乳动物表达系统
  • Invitrogen FreeStyle CHO-S 细胞
  • Invitrogen FreeStyle 293-F 细胞
  • Gibco Expi293 F 细胞
  • Gibco ExpiCHO-S 细胞
昆虫表达系统
  • Invitrogen Bac-to-Bac 表达系统
表达范围
  • 30 mL-25 L
  • WAVE 摇袋式细胞培养
纯化方法
  • 亲和性层析
  • 体积排阻色谱（SEC）
  • 离子交换色谱（IEX）
亲和标签
  • His-标签
  • Fc-标签（蛋白 A/G）
  • Strep-标签
  • GST-标签
  • 其他，根据需求提供
附加选项
  • 使用第 2 根柱进行纯化
  • 标签切割
  • 分析 SEC（HPLC）
  • 定制缓冲液
  • 内毒素测定
  • 分装服务
  • 浓度调节
  • 培养上清液（抗体）中的滴度测定
  • 其他，根据要求提供

请与我们的支持团队联系：geneartprotein@thermofisher.com，获取您的项目设置与报价。

质控标准文档
SDS-PAGE，考马斯亮蓝蛋白染色包含在标准 QC 中
分光光度法测定蛋白浓度包含在标准 QC 中
标签特异性抗体的 Western blot 分析包含在标准 QC 中
毛细管电泳，通过紫外吸收和/或荧光法进行检测根据要求
分析 SEC（HPLC）根据要求
LAL 法测定内毒素根据要求
服务选项
服务描述交付形式
从基因到蛋白
指定培养量		使用客户指定培养量的瞬时转染 HEK293、CHO 或昆虫细胞培养物进行蛋白表达和纯化
  • 使用指定培养量纯化的所有蛋白（或者，培养上清液或细胞）
  • 文件资料包括 SDS-PAGE 和 Western blot 分析数据
  • 表达质粒
从基因到蛋白
指定蛋白量
  • 使用瞬时转染 HEK293、CHO 或昆虫细胞培养物对客户指定保证量的蛋白进行蛋白表达和纯化
  • 试验性表达服务是强制性的
  • 客户指定量的纯化蛋白
  • 文件资料包括 SDS-PAGE 和 Western blot 分析数据
  • 表达质粒
从基因到蛋白
试验性的		确定瞬时转染 HEK293、CHO 或昆虫细胞产量的可行性研究
  • 用于客户指定蛋白量生产的报价
  • 文件资料包括 SDS-PAGE 和 Western blot 分析数据
  • 试验性研究得到的所有蛋白质
  • 表达质粒
项目标准

请与我们的支持团队联系：geneartprotein@thermofisher.com，获取您的项目设置与报价。 

服务项目阶段或特征标准规格
哺乳动物表达系统
  • Invitrogen FreeStyle CHO-S 细胞
  • Invitrogen FreeStyle 293-F 细胞
  • Gibco Expi293 F 细胞
  • Gibco ExpiCHO-S 细胞
昆虫表达系统
  • Invitrogen Bac-to-Bac 表达系统
表达范围
  • 30 mL-25 L
  • WAVE 摇袋式细胞培养
纯化方法
  • 亲和性层析
  • 体积排阻色谱（SEC）
  • 离子交换色谱（IEX）
亲和标签
  • His-标签
  • Fc-标签（蛋白 A/G）
  • Strep-标签
  • GST-标签
  • 其他，根据需求提供
附加选项
  • 使用第 2 根柱进行纯化
  • 标签切割
  • 分析 SEC（HPLC）
  • 定制缓冲液
  • 内毒素测定
  • 分装服务
  • 浓度调节
  • 培养上清液（抗体）中的滴度测定
  • 其他，根据要求提供
质量控制

请与我们的支持团队联系：geneartprotein@thermofisher.com，获取您的项目设置与报价。

质控标准文档
SDS-PAGE，考马斯亮蓝蛋白染色包含在标准 QC 中
分光光度法测定蛋白浓度包含在标准 QC 中
标签特异性抗体的 Western blot 分析包含在标准 QC 中
毛细管电泳，通过紫外吸收和/或荧光法进行检测根据要求
分析 SEC（HPLC）根据要求
LAL 法测定内毒素根据要求

案例研究：使用 GeneOptimizer 软件进行序列优化后的抗体表达改进示例

在本例中，我们比较了源自优化序列的两种抗体相对其野生型对应物的表达水平。使用 GeneOptimizer 算法对两个抗体编码基因的开放阅读框（ORF）进行了优化，以用于人类表达。内部进行基因合成，亚克隆到 Invitrogen pcDNA 3.3 载体中并进行质粒制备。使用 30 mL Invitrogen FreeStyle 293 细胞对得到的四个构建体（两种抗体，每种各一个野生型和一个优化序列）进行表达，一式两份。使用 ProtA BLItz 系统（ForteBio、PALL Corp.）测定表达水平。

归一化为野生型水平后的表达分析结果清晰表明，序列优化抗体显著增加（图 1）。这意味着可以以较低的总体项目成本快速高效获得高水平纯化蛋白。

Expression of wild type vs. sequence-optimized antibodies
Expression of wild type vs. sequence-optimized antibodies

图 1.野生型与序列优化抗体的表达对比。将平均蛋白表达归一化为野生型序列的平均表达。

 

定制服务

如果您已经拥有优化过的表达构建体和/或表达方案，也可以使用我们的设施和这些方案来纯化您的蛋白。有关更多详细详情，请发送电子邮件至 geneartprotein@thermofisher.com。

相关资源

仅供科研使用，不可用于诊断目的。

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