GeneArt CRISPR 核酸酶 mRNA

图 1.使用GeneArt CRISPR 核酸酶 mRNA 和体外转录 gRNA 完善 CRISPR/Cas9 基因组编辑的工作流程。

使用 CRISPR 技术进行基因组编辑需要非编码向导RNA (gRNA)，以便在感兴趣的目标序列上剪切基因组 DNA。 

使用我们的 GeneArt CRISPR 检索和设计工具来检索包含600,000 条 gRNA序列>的数据库，其中包含靶向人类和小鼠基因组中每个基因的特定gRNA序列。GeneArt预设计的 gRNA 针对基因敲除进行了优化。 检索结果会基于最小化潜在脱靶效应、潜在结合位点和显示gRNA位置的外显子图谱给出建议。使用此工具分析任何感兴趣的序列，并设计独特的 CRISPR 序列。

从三个选项中选择一个制备 gRNA 的方法： 

1.GeneArt 精密 gRNA 合成试剂盒，用于在四小时内组装模板，并快速合成可即刻转染的gRNA。

2.GeneArt CRISPR Strings 是一种合成DNA模板，它由 gRNA 与用于体外转录的 T7 启动子或用于即用型转染结构的 U6 启动子所组成，可通过GeneArt CRISPR 搜索和&设计工具购买，或填写GeneArt CRISPR Strings DNA 订购订单并将此表发送至genartsupport@thermofisher.com。 

3.省时省力，我们的 GeneArt 定制服务团队将为您设计、合成并纯化体外转录 (IVT) gRNA 序列。如需获取服务报价或进行订购，请致电 1-800-955-6288 x45682（北美）联系我们的定制服务部门，或发送电子邮件至 Thermo Fisher Scientific 定制服务部。

完整的 RNA 形式以及 Lipofectamine MessengerMax 转染试剂提供了卓越的递送效率，同时在干细胞和难转染的细胞系中保持了高效的基因组编辑效率。

在单个孔中同时转染多达4个gRNAs，并同时评估多个基因的切割效率。Cas9 mRNA 可用于一个以上 GeneArt CRISPR Strings DNA 的多重编辑。使用 这种方法来确定最适合编辑目标靶点的gRNA 序列，或者用一次转染编辑多个基因组位点。 

图 5.使用 GeneArt CRISPR mRNA 和 GeneArt U6 String DNA 进行多重基因组编辑。转染GeneArt CRISPR 核酸酶报告质粒的293细胞中的基因组编辑效率，和使用GeneArt CRISPR Nuclease mRNA +U6 gRNA string在HPRT、AAVS1和/或EMX1基因中进行单编辑、双重或三重编辑的基因组编辑效率。

虽然我们还没有试过在显微注射或其他体内介导的递送方法中利用GeneArt CRISPR核酸酶mRNA构建转基因模型系统，但很多文献介绍了它在包括小鼠、斑马鱼和果蝇在内的多个物种体内的应用。对于显微注射实验和小鼠模型构建，我们建议测试至少3个 gRNAs，并在所选的细胞系中验证这些 gRNAs。使用GeneArt CRISPR Strings™ DNA，您可以在一次转染中同时筛选多个 gRNAs。验证后，您可以将通过验证的 gRNA 克隆到表达质粒中，并从测序过的质粒中制备 IVT gRNA 模板。有关从 gRNA 表达质粒中制备 PCR 模板的详细说明，请参见用户手册。

图 6.使用 Cas9 mRNA 和体外转录 gRNA 进行高效多重基因组编辑。此处显示的是用一体化质粒转染的细胞或仅用一个靶标处理的细胞或同时用双重或三重靶标靶向的细胞的编辑效率。我们还在单个或多个 gRNAs 与RelA共转染的所有样品中检测到RelA特异性切割（结果未展示）。

CRISPR gRNA 设计需要帮助吗？ 让我们的 GeneArt CRISPR 搜索和设计工具引导您实现最佳设计。从今天开始设计

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