GeneArt CRISPR Nuclease Vectors | Thermo Fisher Scientific

定制您的载体

强大的 CRISPR 基因编辑技术以惊人的速度给科学研究带来革新。阅读关于 DIY CRISPR 工作流程的五步方法，重点关注 CRISPR-Cas9 载体设计、其构建和细胞递送、突变体基因分型和表征的可能方法。我们对每一步都进行了细化和优化，确保各种细胞类型都能获得更高的编辑效率。

Step 1设计
Step 2转化
Step 3递送
Step 4检测
Step 5鉴定

CRISPR-Cas9 系统是一个双组分系统，由靶向特异性 CRISPR gRNA 和 Cas9 核酸酶组成。基因组编辑的成功，需要Cas9 和 gRNA 在靶细胞中同时表达。我们为靶向特异性 gRNA 和 Cas9 核酸酶表达质粒的设计和改造提供必要的工具，使您能够实施不同的实验策略。

适用于 CRISPR-Cas9 设计的产品

为了设计您的载体，您可以分别为 Cas9 和 gRNA 选择两个独立的质粒，或者为两个基因选择同一个质粒：

从开放资源中获得（例如，非营利性质的全球质粒库 Addgene）的用于 Cas 核酸酶表达的质粒
从开放资源获得（例如，非营利性全球质粒库Addgene）的 gRNA 克隆载体
同时克隆 Cas9 和 gRNA 的GeneArt CRISPR核酸酶载体

一体式质粒系统

转染、富集、筛选并发表——使用我们的 GeneArt CRISPR 核酸酶载体试剂盒均可完成。CRISPR 核酸酶系统是一种即用型的一体式表达载体系统，包括一个 Cas9 核酸酶表达框和一个可快速克隆靶点特异性 crRNA 的向导 RNA 克隆表达框。您可以利用该系统的单个质粒，以序列特异性的方式编辑并改造您选择的基因组位点。在用 GeneArt CRISPRs 编辑出相关靶标后，可以用 GeneArt TALs 验证生物学相关的突变，以减少潜在的脱靶情况。

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GeneArt CRISPR 核酸酶载体试剂盒

GeneArt CRISPR 核酸酶载体试剂盒是一种报告基因载体系统，可用于 CRISPR-Cas 基因组编辑所需的功能元件的表达。该试剂盒使用同样表达 Cas9 核酸内切酶的质粒载体，使表达非编码向导 RNA（包括 crRNA 和 tracrRNA）变得更加简单。

使用带有橙色荧光蛋白 (OFP) 的 GeneArt CRISPR 核酸酶载体，可利用流式细胞术分选表达 crRNA 的细胞，而使用带有 CD4 的 GeneArt CRISPR 核酸酶载体，可实现表达 crRNA 的细胞的微珠富集。

GeneArt® CRISPR nuclease vectors

GeneArt CRISPR 核酸酶载体 (A) GeneArt CRISPR 核酸酶：OFP 报告基因质粒图谱和 GeneArt CRISPR 核酸酶的特征：OFP 报告基因。我们提供 6,732 至 6,752 个核苷酸的线性载体，如图所示，每条链的 5´ 端有 5 bp 的突出末端。 (B) GeneArt CRISPR 核酸酶：CD4 富集质粒图谱及 GeneArt CRISPR 核酸酶特征；CD4富集。我们提供 7,336 至 7,355 个核苷酸的线性载体，如图所示，每条链的5´端有 5 bp 的突出末端。线性化的 GeneArt CRISPR 核酸酶载体提供了一种快速有效的方法，将编码 crRNA 的双链寡核苷酸克隆到表达框中，从而实现 Cas9 核酸酶的序列特异性靶向编辑。

为了构建自己的 gRNA 表达质粒，您可能需要：
	含有 gRNA 序列的寡核苷酸快速消化限制酶和克隆酶，包括 IIS 型限制性内切酶
要轻松克隆新的 CRISPR 核酸酶序列或进行亚克隆工作，您可能需要：
	Invitrogen Platinum SuperFi II DNA 聚合酶（可提供不同形式的产品） Zero Blunt TOPO PCR 克隆试剂盒（可提供用于 TOPO Blunt 端亚克隆的其它产品）

为每个基因定制 CRISPR；我们会为您设计靶标&对它进行克隆。
直接转染。

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一旦编码 CRISPR-Cas9 系统的DNA片段被克隆，载体就可以在 大肠杆菌 细胞内扩增，从而产生足够数量的表达质粒。我们提供各种大肠杆菌感受态细胞，其选择取决于转化方法和您实验的需求。

目前有不同的方法来验证您构建的质粒是否正确，例如聚合酶链反应、限制酶消化或测序。选择取决于您是否有兴趣确定质粒是否包含您的 DNA 插入片段，插入片段的方向是否正确，或者插入片段的序列是否正确。我们提供分子生物学工具以实施您可能选择的任何分析方法。

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用于质粒转化和克隆筛选的产品
为了有效转化构建的 CRISPR 质粒，您需要大肠杆菌感受态细胞：
	One Shot MAX Efficiency DH5a T1R 化学感受态细胞（可提供不同产品和包装规格）
	分离足够数量和最大纯度的质粒 DNA，用于随后递送至真核细胞。产生高产量的无内毒素质粒（可提供不同产品和包装规格）。 PureLink Expi 无内毒素大量质粒纯化试剂盒
在进行以下步骤之前，您可能希望验证您构建的质粒是否正确。在不同的分析方法之间进行选择：
	Invitrogen Platinum II 热启动绿色 PCR 预混液 (2X) ，用于通过 PCR 进行快速菌落筛选（可提供不同产品形式）用于质粒 DNA 限制性分析的FastDigest 限制性酶用于序列分析的Sanger 测序试剂

其他产品

了解更多

CRISPR-Cas9 系统极大地简化了基因组编辑，在干细胞工程、基因治疗、组织和动物疾病模型以及抗病转基因植物等广泛应用中具有广阔前景。

转染是将 CRISPR-Cas9 DNA、mRNA 或蛋白系统导入真核细胞的过程。递送技术差异很大，包括脂质纳米颗粒介导的转染、病毒递送和物理方法，如电穿孔转染。

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用于 CRISPR 构建体递送至真核细胞的产品
	Lipofectamine 转染试剂用于通过脂质纳米颗粒介导的转染将 DNA 和 RNA 轻松地递送至各种类型细胞 Neon 转染系统用于通过电穿孔法实现难转染的真核细胞的递送 Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 试剂 - 一种用于递送 TrueCut Cas9 v2 和 TrueGuide 合成 sgRNA 的优选解决方案

细胞培养工具和基础：

血清 — 满足您特定的细胞培养需求—从基础研究到特殊实验
细胞培养耗材 — 实现最佳细胞生长和细胞培养的一致性
细胞培养基础—找到成功细胞培养所需的工具和资源

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无论您使用哪种基因组编辑策略，仔细监测编辑过程会帮助您得到稳定可靠的实验结果。首先准确进行细胞计数和存活率检测，然后筛选和验证细胞的基因型。突变序列的基因分型技术取决于 CRISPR 编辑引入的突变类型。以下是最常见的技术：

PCR 扩增和用于较大 Indels 检测的凝胶电泳技术
用于 Indel 检测的错配切割分析（T7 Endonuclease I 切割分析）
用于 HDR 分析的 PCR 扩增和限制酶消化
PCR 扩增和克隆，以及 Sanger 测序
PCR 扩增和 NGS 下一代测序技术

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用于检测 CRISPR 介导的基因组修饰的产品
	用于产生合成 DNA 片段的克隆的试剂盒和试剂，所述 DNA 片段具有用于后续 Sanger 测序的基因组靶标序列测序用 Zero Blunt TOPO PCR 克隆试剂盒 FastDigest 限制性内切酶
	用于快速定量测量目的基因的 CRISPR-Cas9 切割效率的试剂盒 GeneArt 基因组切割检测试剂盒
	用于分离质粒 DNA 和使用凝胶电泳进行快速、实时 DNA 分析的试剂盒： E-Gel Power Snap 电泳系统启动试剂盒，EX 2% f GeneJET 质粒小提试剂盒
	从粗样品或 PCR 扩增的样品中准确扩增目标基因组区域： Invitrogen Platinum SuperFi II PCR 预混液 —适用于 DNA 片段内的错配分析、克隆和序列分析 Invitrogen Platinum 直接 PCR 通用预混液 —从 CRISPR 编辑细胞的粗样品中扩增 Invitrogen Platinum II Green 热启动 PCR 预混液 (2X) - 目标基因组区域的快速 PCR 扩增
	将 Applied Biosystems 热循环器的可靠性和优秀性能，与灵活的配置和适合您当下工作方式的控制功能相结合 ProFlex PCR 系统
	在短短 1.5 小时内，生成覆盖所有基因组区域的 NGS 文库，以检测 CRISPR 在靶编辑并寻找潜在的脱靶效应。用于 Illumina NGS 系统的 Collibri DNA 文库制备试剂盒

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CRISPR 通常用于敲除、敲入或基因表达调控，其效果可以使用细胞分析技术来测量。实时 PCR 允许在基因水平上监测表达的变化，例如无义介导的 mRNA 降解会降低转录水平，而蛋白免疫印迹技术用于观察细胞群体中蛋白表达的变化；流式细胞术用于高通量的单细胞多参数分析。成像分析用于直接分析蛋白表达、区室化和细胞形态的变化，而高含量分析 (HCA) 提供自动化的定量成像分析。

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用于进一步 CRISPR 分析和富集被编辑细胞的产品
	为了通过实时 PCR 进行表达分析，从编辑过的细胞中分离转录 RNA，并将其反转录成 cDNA： RNA 提取试剂盒 SuperScript IV VILO 预混液
	对于差异基因表达检测，您可以进行全转录组测序。我们建议准备能够在 Illumina 下一代测序 (NGS) 系统上进行链特异性 RNA 测序的 cDNA 文库 RNA 测序用 Collibri 文库制备试剂盒
	用于单细胞多参数分析的Attune NxT 流式细胞仪为了保证每种分析方法的可信度，请使用超纯无脱氧核糖核酸酶/无核糖核酸酶蒸馏水

用于进一步 CRISPR 分析和富集被编辑细胞的产品

为了通过实时 PCR 进行表达分析，从编辑过的细胞中分离转录 RNA，并将其反转录成 cDNA：

对于差异基因表达检测，您可以进行全转录组测序。我们建议准备能够在 Illumina 下一代测序 (NGS) 系统上进行链特异性 RNA 测序的 cDNA 文库

RNA 测序用 Collibri 文库制备试剂盒

用于单细胞多参数分析的Attune NxT 流式细胞仪
为了保证每种分析方法的可信度，请使用超纯无脱氧核糖核酸酶/无核糖核酸酶蒸馏水

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基因表达分析和实时聚合酶链反应 (qPCR) 信息

Step 1 : 设计

适用于 CRISPR-Cas9 设计的产品

为了设计您的载体，您可以分别为 Cas9 和 gRNA 选择两个独立的质粒，或者为两个基因选择同一个质粒：

从开放资源中获得（例如，非营利性质的全球质粒库 Addgene）的用于 Cas 核酸酶表达的质粒
从开放资源获得（例如，非营利性全球质粒库Addgene）的 gRNA 克隆载体
同时克隆 Cas9 和 gRNA 的GeneArt CRISPR核酸酶载体

一体式质粒系统

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GeneArt CRISPR 核酸酶载体试剂盒

GeneArt® CRISPR nuclease vectors

为了构建自己的 gRNA 表达质粒，您可能需要：
	含有 gRNA 序列的寡核苷酸快速消化限制酶和克隆酶，包括 IIS 型限制性内切酶
要轻松克隆新的 CRISPR 核酸酶序列或进行亚克隆工作，您可能需要：
	Invitrogen Platinum SuperFi II DNA 聚合酶（可提供不同形式的产品） Zero Blunt TOPO PCR 克隆试剂盒（可提供用于 TOPO Blunt 端亚克隆的其它产品）

为每个基因定制 CRISPR；我们会为您设计靶标&对它进行克隆。
直接转染。

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Step 2 : 转化

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用于质粒转化和克隆筛选的产品
为了有效转化构建的 CRISPR 质粒，您需要大肠杆菌感受态细胞：
	One Shot MAX Efficiency DH5a T1R 化学感受态细胞（可提供不同产品和包装规格）
	分离足够数量和最大纯度的质粒 DNA，用于随后递送至真核细胞。产生高产量的无内毒素质粒（可提供不同产品和包装规格）。 PureLink Expi 无内毒素大量质粒纯化试剂盒
在进行以下步骤之前，您可能希望验证您构建的质粒是否正确。在不同的分析方法之间进行选择：
	Invitrogen Platinum II 热启动绿色 PCR 预混液 (2X) ，用于通过 PCR 进行快速菌落筛选（可提供不同产品形式）用于质粒 DNA 限制性分析的FastDigest 限制性酶用于序列分析的Sanger 测序试剂

其他产品

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Step 3 : 递送

CRISPR-Cas9 系统极大地简化了基因组编辑，在干细胞工程、基因治疗、组织和动物疾病模型以及抗病转基因植物等广泛应用中具有广阔前景。

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用于 CRISPR 构建体递送至真核细胞的产品
	Lipofectamine 转染试剂用于通过脂质纳米颗粒介导的转染将 DNA 和 RNA 轻松地递送至各种类型细胞 Neon 转染系统用于通过电穿孔法实现难转染的真核细胞的递送 Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 试剂 - 一种用于递送 TrueCut Cas9 v2 和 TrueGuide 合成 sgRNA 的优选解决方案

细胞培养工具和基础：

血清 — 满足您特定的细胞培养需求—从基础研究到特殊实验
细胞培养耗材 — 实现最佳细胞生长和细胞培养的一致性
细胞培养基础—找到成功细胞培养所需的工具和资源

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Step 4 : 检测

PCR 扩增和用于较大 Indels 检测的凝胶电泳技术
用于 Indel 检测的错配切割分析（T7 Endonuclease I 切割分析）
用于 HDR 分析的 PCR 扩增和限制酶消化
PCR 扩增和克隆，以及 Sanger 测序
PCR 扩增和 NGS 下一代测序技术

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用于检测 CRISPR 介导的基因组修饰的产品
	用于产生合成 DNA 片段的克隆的试剂盒和试剂，所述 DNA 片段具有用于后续 Sanger 测序的基因组靶标序列测序用 Zero Blunt TOPO PCR 克隆试剂盒 FastDigest 限制性内切酶
	用于快速定量测量目的基因的 CRISPR-Cas9 切割效率的试剂盒 GeneArt 基因组切割检测试剂盒
	用于分离质粒 DNA 和使用凝胶电泳进行快速、实时 DNA 分析的试剂盒： E-Gel Power Snap 电泳系统启动试剂盒，EX 2% f GeneJET 质粒小提试剂盒
	从粗样品或 PCR 扩增的样品中准确扩增目标基因组区域： Invitrogen Platinum SuperFi II PCR 预混液 —适用于 DNA 片段内的错配分析、克隆和序列分析 Invitrogen Platinum 直接 PCR 通用预混液 —从 CRISPR 编辑细胞的粗样品中扩增 Invitrogen Platinum II Green 热启动 PCR 预混液 (2X) - 目标基因组区域的快速 PCR 扩增
	将 Applied Biosystems 热循环器的可靠性和优秀性能，与灵活的配置和适合您当下工作方式的控制功能相结合 ProFlex PCR 系统
	在短短 1.5 小时内，生成覆盖所有基因组区域的 NGS 文库，以检测 CRISPR 在靶编辑并寻找潜在的脱靶效应。用于 Illumina NGS 系统的 Collibri DNA 文库制备试剂盒

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Step 5 : 鉴定

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用于进一步 CRISPR 分析和富集被编辑细胞的产品
	为了通过实时 PCR 进行表达分析，从编辑过的细胞中分离转录 RNA，并将其反转录成 cDNA： RNA 提取试剂盒 SuperScript IV VILO 预混液
	对于差异基因表达检测，您可以进行全转录组测序。我们建议准备能够在 Illumina 下一代测序 (NGS) 系统上进行链特异性 RNA 测序的 cDNA 文库 RNA 测序用 Collibri 文库制备试剂盒
	用于单细胞多参数分析的Attune NxT 流式细胞仪为了保证每种分析方法的可信度，请使用超纯无脱氧核糖核酸酶/无核糖核酸酶蒸馏水

用于进一步 CRISPR 分析和富集被编辑细胞的产品

为了通过实时 PCR 进行表达分析，从编辑过的细胞中分离转录 RNA，并将其反转录成 cDNA：

对于差异基因表达检测，您可以进行全转录组测序。我们建议准备能够在 Illumina 下一代测序 (NGS) 系统上进行链特异性 RNA 测序的 cDNA 文库

RNA 测序用 Collibri 文库制备试剂盒

用于单细胞多参数分析的Attune NxT 流式细胞仪
为了保证每种分析方法的可信度，请使用超纯无脱氧核糖核酸酶/无核糖核酸酶蒸馏水

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