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双通路 TaqMan 基因表达测定
实时荧光定量 PCR (qPCR) 中的双通路检测可在一次 qPCR 反应中同时检测两个靶序列。其关键优势在于能够尽量降低移液误差的影响并尽可能提高实验效率。 只有在使用基于 TaqMan 的 qPCR 化学试剂时才可实现双通路检测。 目前无法使用 SYBR Green qPCR 化学试剂对靶标进行双通路检测。
Applied Biosystems TaqMan 基因表达测定容易进行双通路检测，因为预设计和定制 TaqMan 基因表达测定均附带 FAM 或 VIC 荧光报告基团染料。较常见的双通路反应是在同一孔内结合感兴趣的靶标和内源性对照测定。内源性对照基因或一组这样的基因通常用于控制 RNA 起始样本量造成的实验变异性，并且显示了组织、细胞类型和处理方案中相对恒定和中等丰度的表达水平。
为何进行双通路检测？
样本珍贵——当 cDNA 有限时，双通路检测可对多个靶标进行分析，因为两个靶标使用一份起始 cDNA 样本进行测定
成本低——与单通路 qPCR 相比，反应次数减半，从而减少一半的预混液用量，并减少塑料耗材用量
精度高——数据质量有所提升，因为感兴趣靶标和内源性对照品在同一孔内进行测量，尽量降低了移液变异性
归一化——将感兴趣靶标和内源性对照测定用于同一孔内，使表达结果归一化，并校正由 RNA 起始样本量、逆转录效率或样本质量引起的任何潜在偏倚
支持双通路 TaqMan 基因表达测定
测定规格 | 我们预设计的 TaqMan 基因表达测定具有三种不同的规格：FAM、VIC 和 VIC_PL。 测定使用 FAM 或 VIC 荧光染料进行标记。 对于高表达靶标（例如常见的内源性对照品 18S rRNA），我们建议选择 VIC 引物受限 (VIC_PL) 规格，这种规格含有的引物量较低，从而可在感兴趣靶标扩增前限制管家基因消耗 qPCR 试剂。 TaqMan 基因表达测定 (FAM) |
相关资源 | 应用文档：使用 TaqMan 基因表达测定在实时荧光定量 PCR 中进行双通路检测 请联系技术支持，确认 TaqMan 基因表达测定是否支持双通路检测。 TaqMan Fast Advanced 预混液已针对双通路 qPCR 进行了优化。 有关更高水平的多通路 qPCR（3通路和4通路反应）的信息，请查阅我们的多通路 qPCR 解决方案网页。 |
相关应用
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仅供科研使用，不可用于诊断目的。