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对不同生物物种、细胞和组织进行高效的细胞裂解和蛋白提取,需要使用不同配方的细胞裂解和提取缓冲液。Thermo Scientific和Invitrogen细胞裂解缓冲液已针对特定组织类型,以及原代和培养的哺乳动物细胞进行了优化和验证。所得蛋白提取物可兼容大部分蛋白定量和常规下游应用。这些易用的细胞总蛋白提取试剂盒通常能在5-10分钟内完成样品的处理,并获得高蛋白得率。
M-PER哺乳动物总蛋白提取试剂 | RIPA细胞裂解液 | IP细胞裂解液 | NP-40细胞裂解缓冲液 | 细胞裂解液 |
何时使用 | ||||
需要温和、非变性且高效的胞质和核蛋白提取试剂 | 在变性条件下提取胞质和核蛋白 | 专用于Pull-down和免疫沉淀实验的蛋白样本制备 | 推荐用于提取胞质蛋白 | 需要比 NP-40 裂解强度更高的缓冲液,或需要提取胞质和核蛋白时 |
成分 | ||||
含非变性去垢剂的 25 mM bicine 缓冲液 (pH 7.6) | 25 mM Tris-HCl,pH 7.6 150 mM NaCl 1% NP-40 1% 脱氧胆酸钠 0.1% SDS | 不含 SDS 的改良版 RIPA 裂解液 | 50 mM Tris, pH 7.4 250 mM NaCl 5 mM EDTA 50 mM NaF 1 mM Na3VO4 1% NP-40 0.02% NaN3 | 10 mM Tris, pH 7.4 100 mM NaCl 1 mM EDTA 1 mM EGTA 1 mM NaF 20 mM Na4P2O7 2 mM Na3VO4 1% Triton X-100 10%甘油 0.1% SDS 0.5%脱氧胆酸盐 |
兼容的蛋白定量方法 | ||||
BCA 定量, Bradford 法定量 | BCA 定量, 去垢剂兼容型 Bradford | BCA 定量, 去垢剂兼容型 Bradford | BCA 定量, 去垢剂兼容型 Bradford | 去垢剂兼容型 Bradford |
兼容的下游应用 | ||||
IP、蛋白电泳,蛋白免疫印迹、ELISA、EMSA、报告基因分析、纯化、活性分析、胺反应标记 | SDS-PAGE,蛋白免疫印迹 | 免疫沉淀、Pull-down分析 | ELISA,蛋白电泳,蛋白免疫印迹 | ELISA,蛋白电泳,蛋白免疫印迹 |
货号 | ||||
78503(25 mL) 78501(250 mL) | 89900(100 mL) 89901(250 mL) | 87787(100 mL) 87788(250 mL) | FNN0021(100 mL) | FNN0011(100 mL) |
查看适用于质谱分析的蛋白样品制备缓冲液
T-PER 组织蛋白提取试剂 | N-PER 神经元蛋白提取试剂 | |
---|---|---|
兼容的样品类型 | 心、肝、肾、肺、脾 | 脑组织和原代神经元 |
成本 | 含非变性去垢剂的 25 mM bicine 缓冲液,pH 7.6 150 mM NaCl | |
兼容的蛋白定量方法 | BCA 定量,Bradford 法定量 | BCA 定量,去垢剂兼容型 Bradford |
兼容的下游应用 | 免疫沉淀、蛋白免疫印迹、ELISA、EMSA、纯化、激酶测定、活性分析、胺反应性标记 | 免疫沉淀、Pull-down、蛋白免疫印迹、ELISA、酶学检测、胺反应标记 |
货号 | 78510(500 mL) | 87792(100 mL) |
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RIPA 细胞裂解液是进行哺乳动物细胞或软组织裂解和蛋白提取的常用选择。RIPA 细胞裂解液最初以其开发的用途而命名(放射免疫沉淀测定),当下游应用为 SDS-PAGE(变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时,RIPA 十分有效。该配方在 Tris 缓冲液中包含两种离子去污剂和一种非离子去污剂:25 mM Tris-HCl、pH 7.6、150 mM NaCl、1% NP40、1% 脱氧胆酸钠和 0.1% 十二烷基硫酸钠 (SDS)。
Thermo Scientific M-PER 哺乳动物细胞总蛋白提取试剂较 RIPA 细胞裂解液更温和,且总蛋白提取效率高。M-PER 试剂基于非变性去垢剂来制备与多数下游检测兼容的细胞裂解物,包括免疫分析、酶学测定和多种常规报告基因检测。裂解可直接在培养板中进行,仅需五分钟即可完成。此外,与冻融和超声处理相比,这种方法的蛋白得率更高。
使用 M-PER 哺乳动物蛋白提取试剂从各种细胞类型中抽提蛋白的得率。细胞在融合度为 85% 时收集,清洗两次并收集在冰浴的 PBS 中,然后计数。对于每种细胞类型,将 1 x 106细胞通过 2,000 x g 离心 5 分钟进行沉淀,并在 1 mL M-PER 试剂中裂解 5 分钟。通过以 14,000 x g 离心 10 分钟澄清细胞裂解物,收集上清液并使用 Pierce BCA 蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度(μg/百万细胞)(货号23227)。
当裂解物的下游应用是蛋白亲和纯化实验时,例如免疫沉淀 (IP) 或免疫共沉淀 (Co-IP),需确保裂解液中不含可能干扰抗体结合或目标蛋白相互作用的变性剂或组分。RIPA细胞裂解液,尽管非常常用,但因为含有 SDS,并不是免疫沉淀实验的最佳选择。我们的M-PER或IP细胞裂解缓冲液则更为合适。Thermo Scientific Pierce IP细胞裂解缓冲液专为Pull-down和免疫沉淀检测而研发。IP细胞裂解缓冲液是一种哺乳动物全细胞裂解试剂,其配方基于改良的RIPA细胞裂解液,不含 SDS。这种中等强度的裂解液可高效溶解细胞中的蛋白,不同于传统的RIPA细胞裂解液,IP细胞裂解液不会释放染色体组 DNA 或破坏蛋白复合物。
Thermo Scientific T-PER 组织蛋白提取试剂用于从哺乳动物组织样本中提取总蛋白,包括心脏、肝脏、肾脏、肺和脾脏。T-PER 试剂含有非变性去垢剂、25 mM bicine、150 mM NaCl (pH 7.6) ,可结合机械或手动匀浆方法使用。所得细胞裂解物与使用 M-PER 试剂制备的裂解物一样,与多数功能检测方法兼容。
使用 T-PER 组织蛋白提取试剂从各种组织类型中提取蛋白。对重复的组织样本进行称重,以 1:10 至 1:20 w/v T-PER 试剂重新悬浮,并在冷冻的 Dounce 或台式组织匀浆器中破碎。将所得裂解物以 10,000 x g 离心 5 分钟并收集上清液。使用 Pierce BCA 蛋白定量试剂盒(货号 23227)检测每种裂解物的蛋白浓度,以确定每毫克起始组织的蛋白得率。
试剂名称 | B-PER Complete 细菌蛋白提取试剂 | B-PER 细菌蛋白抽提试剂 | B-PER II (2X) 细菌蛋白提取试剂 | B-PER (PBS) 细菌蛋白提取试剂 |
兼容的样品类型 | 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 | 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 | 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 | 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 |
成分 | 在含酶的 Tris 缓冲液中配制的B-PER 试剂 | 在 Tris 缓冲液中配制的 B-PER 试剂 | 在 Tris 缓冲液中配制的 2X B-PER 试剂 | 在 PBS 中配制的 B-PER 试剂 |
是否含核酸酶和溶菌酶 | 是 | 否 | 否 | 否 |
样品处理时间 | 15 分钟 | 10–15 分钟 | 10–15 分钟 | 10–15 分钟 |
是否适用于新鲜和冷冻细胞 | 是,裂解新鲜的革兰氏阴性菌需添加 EDTA | 是 | 是 | 是 |
是否需要机械破碎 | 否 | 否,对于革兰氏阳性菌可添加酶以提高得率 | 否,对于革兰氏阳性菌可添加酶以提高得率 | 否,对于革兰氏阳性菌可添加酶以提高得率 |
样品处理量 | 每 500 mL 可处理 100 g 细胞团 | 每 500 mL 可处理 125 g 细胞团 | 每 250 mL 可处理 125 g 细胞团 | 每 500 mL 可处理 125 g 细胞团 |
兼容的蛋白定量方法 | BCA 定量, Bradford 法定量 | BCA 定量, Bradford 法定量 | BCA 定量, Bradford 法定量 | BCA 定量, Bradford 法定量 |
兼容的下游应用 | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化 | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化(GST 融合蛋白除外) | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化(GST 融合蛋白除外) | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化(GST 融合蛋白除外) |
货号 | 89821(250 mL) 89822(500 mL) | 78243(165 mL) 90084(250 mL) 78248(500 mL) | 78260(250 mL) | 78266(500 mL) |
Thermo Scientific B-PER 细菌蛋白提取试剂可温和裂解大肠杆菌和其他种类的细菌细胞,并有效提取可溶性天然和重组蛋白。B-PER 试剂可用于革兰氏阴性菌,S. aureus,H. pylori, 和大肠杆菌菌株 BL21(D3)、JM109、DH5a 和 M15。该试剂也适用于某些古细菌物种和培养的昆虫细胞。提取不需要昂贵的设备或机械来进行破碎,并且能在 10 分钟内完成。B-PER 试剂从包涵体中去除可溶性蛋白,可用于纯化完整的包涵体,其可溶性较差的蛋白可通过其他方式提取。
多种不同的即用型 B-PER 试剂可满足不同的裂解需求。Thermo Scientific B-PER Complete 细菌蛋白提取试剂采用多合一配方,在裂解试剂中加入了溶菌酶和通用核酸酶,可以温和地从革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌中提取蛋白。蛋白提取物与大多数蛋白定量和常见下游应用兼容。这些总蛋白提取试剂具有高蛋白得率,通常可在 10-15 分钟内完成样品处理。
试剂名称 | Y-PER 酵母蛋白提取试剂 | Y-PER Plus 可透析酵母蛋白提取试剂 | I-PER 昆虫细胞蛋白提取试剂 |
兼容的样品类型 | 酿酒酵母、粟酒裂殖酵母和毕赤酵母 | 酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、毕赤酵母、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌 | 悬浮或贴壁培养的昆虫细胞(Sf9、Sf21) |
特点 | 不需要玻璃珠进行提取 | 完全可透析的配方 | 温和、有效的蛋白提取,无需超声处理 |
兼容的蛋白定量方法 | BCA 定量 | BCA 定量, Bradford 法定量 | BCA 定量 |
兼容的下游应用 | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化、活性分析 | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化 | 蛋白免疫印迹、6xHis 标签蛋白纯化、蛋白定量、离子交换色谱 |
货号 | 78991(200 mL) 78990(500 mL) | 78999(500 mL) | 89802(250 mL) |
Thermo Scientific Y-PER 酵母蛋白提取试剂可穿透坚韧的酵母细胞壁,穿透细胞壁和细胞膜并提取可溶性蛋白质,而不会完全破坏整体细胞结构。传统上,酵母蛋白提取需要用玻璃珠进行机械破碎,这使得小规模提取变得困难。Y-PER 试剂为当前蛋白质组学工作流程提供更高的得率和灵活性。
根据下游应用,有两种配方可供选择。Y-PER 试剂是高盐 (>300 mM),对S. cerevisiae, S. pombe,C. albicans 有效和P. Pastoris(以及各种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌)。虽然去垢剂与各种下游应用兼容,但它不可透析,因此在不兼容的情况下无法去除。Thermo Scientific Y-PER Plus 可透析酵母蛋白提取试剂采用不含磷酸盐的低盐配方,含有可透析去垢剂,经验证可与S. cerevisiae一起使用。
Thermo Scientific I-PER 昆虫细胞蛋白提取试剂可从单层培养悬浮液中生长的感染杆状病毒的昆虫细胞(Sf9 和 Sf21 细胞)中温和提取可溶性蛋白。该试剂可保留所提取蛋白的功能,并与下游应用直接兼容,例如蛋白定量、蛋白免疫印迹和 His 标签蛋白纯化 (IMAC)。
核酸酶通常被添加到细胞裂解试剂中,以去除由细菌细胞裂解物中的 DNA 带来的样品粘稠,或从体外转录产生的 RNA 中去除 DNA 模板。溶菌酶通过分解细菌细胞壁来提高蛋白或核酸的提取效率。
试剂名称 | 用于细胞裂解的 Pierce 通用核酸酶 | DNase I 溶液 (2500 U/mL) | 微球菌核酸酶溶液 (≥100 U/µL) | 溶菌酶 |
特点 | 降解所有形式的 DNA 和 RNA | 降解单链和双链 DNA | 降解细胞裂解物中的核酸,释放染色质结合蛋白和剪切染色质,用于染色质免疫沉淀 (ChIP) 实验 | 提高蛋白或核酸提取效率的细菌细胞壁裂解酶 |
货号 | 88701(25 kU) | 90083(0.5 mL) | 88216(150 µL) | 90082 (50 mg/mL) 89833 (5 g) |
M-PER哺乳动物总蛋白提取试剂 | RIPA细胞裂解液 | IP细胞裂解液 | NP-40细胞裂解缓冲液 | 细胞裂解液 |
何时使用 | ||||
需要温和、非变性且高效的胞质和核蛋白提取试剂 | 在变性条件下提取胞质和核蛋白 | 专用于Pull-down和免疫沉淀实验的蛋白样本制备 | 推荐用于提取胞质蛋白 | 需要比 NP-40 裂解强度更高的缓冲液,或需要提取胞质和核蛋白时 |
成分 | ||||
含非变性去垢剂的 25 mM bicine 缓冲液 (pH 7.6) | 25 mM Tris-HCl,pH 7.6 150 mM NaCl 1% NP-40 1% 脱氧胆酸钠 0.1% SDS | 不含 SDS 的改良版 RIPA 裂解液 | 50 mM Tris, pH 7.4 250 mM NaCl 5 mM EDTA 50 mM NaF 1 mM Na3VO4 1% NP-40 0.02% NaN3 | 10 mM Tris, pH 7.4 100 mM NaCl 1 mM EDTA 1 mM EGTA 1 mM NaF 20 mM Na4P2O7 2 mM Na3VO4 1% Triton X-100 10%甘油 0.1% SDS 0.5%脱氧胆酸盐 |
兼容的蛋白定量方法 | ||||
BCA 定量, Bradford 法定量 | BCA 定量, 去垢剂兼容型 Bradford | BCA 定量, 去垢剂兼容型 Bradford | BCA 定量, 去垢剂兼容型 Bradford | 去垢剂兼容型 Bradford |
兼容的下游应用 | ||||
IP、蛋白电泳,蛋白免疫印迹、ELISA、EMSA、报告基因分析、纯化、活性分析、胺反应标记 | SDS-PAGE,蛋白免疫印迹 | 免疫沉淀、Pull-down分析 | ELISA,蛋白电泳,蛋白免疫印迹 | ELISA,蛋白电泳,蛋白免疫印迹 |
货号 | ||||
78503(25 mL) 78501(250 mL) | 89900(100 mL) 89901(250 mL) | 87787(100 mL) 87788(250 mL) | FNN0021(100 mL) | FNN0011(100 mL) |
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T-PER 组织蛋白提取试剂 | N-PER 神经元蛋白提取试剂 | |
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兼容的样品类型 | 心、肝、肾、肺、脾 | 脑组织和原代神经元 |
成本 | 含非变性去垢剂的 25 mM bicine 缓冲液,pH 7.6 150 mM NaCl | |
兼容的蛋白定量方法 | BCA 定量,Bradford 法定量 | BCA 定量,去垢剂兼容型 Bradford |
兼容的下游应用 | 免疫沉淀、蛋白免疫印迹、ELISA、EMSA、纯化、激酶测定、活性分析、胺反应性标记 | 免疫沉淀、Pull-down、蛋白免疫印迹、ELISA、酶学检测、胺反应标记 |
货号 | 78510(500 mL) | 87792(100 mL) |
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RIPA 细胞裂解液是进行哺乳动物细胞或软组织裂解和蛋白提取的常用选择。RIPA 细胞裂解液最初以其开发的用途而命名(放射免疫沉淀测定),当下游应用为 SDS-PAGE(变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时,RIPA 十分有效。该配方在 Tris 缓冲液中包含两种离子去污剂和一种非离子去污剂:25 mM Tris-HCl、pH 7.6、150 mM NaCl、1% NP40、1% 脱氧胆酸钠和 0.1% 十二烷基硫酸钠 (SDS)。
Thermo Scientific M-PER 哺乳动物细胞总蛋白提取试剂较 RIPA 细胞裂解液更温和,且总蛋白提取效率高。M-PER 试剂基于非变性去垢剂来制备与多数下游检测兼容的细胞裂解物,包括免疫分析、酶学测定和多种常规报告基因检测。裂解可直接在培养板中进行,仅需五分钟即可完成。此外,与冻融和超声处理相比,这种方法的蛋白得率更高。
使用 M-PER 哺乳动物蛋白提取试剂从各种细胞类型中抽提蛋白的得率。细胞在融合度为 85% 时收集,清洗两次并收集在冰浴的 PBS 中,然后计数。对于每种细胞类型,将 1 x 106细胞通过 2,000 x g 离心 5 分钟进行沉淀,并在 1 mL M-PER 试剂中裂解 5 分钟。通过以 14,000 x g 离心 10 分钟澄清细胞裂解物,收集上清液并使用 Pierce BCA 蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度(μg/百万细胞)(货号23227)。
当裂解物的下游应用是蛋白亲和纯化实验时,例如免疫沉淀 (IP) 或免疫共沉淀 (Co-IP),需确保裂解液中不含可能干扰抗体结合或目标蛋白相互作用的变性剂或组分。RIPA细胞裂解液,尽管非常常用,但因为含有 SDS,并不是免疫沉淀实验的最佳选择。我们的M-PER或IP细胞裂解缓冲液则更为合适。Thermo Scientific Pierce IP细胞裂解缓冲液专为Pull-down和免疫沉淀检测而研发。IP细胞裂解缓冲液是一种哺乳动物全细胞裂解试剂,其配方基于改良的RIPA细胞裂解液,不含 SDS。这种中等强度的裂解液可高效溶解细胞中的蛋白,不同于传统的RIPA细胞裂解液,IP细胞裂解液不会释放染色体组 DNA 或破坏蛋白复合物。
Thermo Scientific T-PER 组织蛋白提取试剂用于从哺乳动物组织样本中提取总蛋白,包括心脏、肝脏、肾脏、肺和脾脏。T-PER 试剂含有非变性去垢剂、25 mM bicine、150 mM NaCl (pH 7.6) ,可结合机械或手动匀浆方法使用。所得细胞裂解物与使用 M-PER 试剂制备的裂解物一样,与多数功能检测方法兼容。
使用 T-PER 组织蛋白提取试剂从各种组织类型中提取蛋白。对重复的组织样本进行称重,以 1:10 至 1:20 w/v T-PER 试剂重新悬浮,并在冷冻的 Dounce 或台式组织匀浆器中破碎。将所得裂解物以 10,000 x g 离心 5 分钟并收集上清液。使用 Pierce BCA 蛋白定量试剂盒(货号 23227)检测每种裂解物的蛋白浓度,以确定每毫克起始组织的蛋白得率。
试剂名称 | B-PER Complete 细菌蛋白提取试剂 | B-PER 细菌蛋白抽提试剂 | B-PER II (2X) 细菌蛋白提取试剂 | B-PER (PBS) 细菌蛋白提取试剂 |
兼容的样品类型 | 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 | 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 | 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 | 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 |
成分 | 在含酶的 Tris 缓冲液中配制的B-PER 试剂 | 在 Tris 缓冲液中配制的 B-PER 试剂 | 在 Tris 缓冲液中配制的 2X B-PER 试剂 | 在 PBS 中配制的 B-PER 试剂 |
是否含核酸酶和溶菌酶 | 是 | 否 | 否 | 否 |
样品处理时间 | 15 分钟 | 10–15 分钟 | 10–15 分钟 | 10–15 分钟 |
是否适用于新鲜和冷冻细胞 | 是,裂解新鲜的革兰氏阴性菌需添加 EDTA | 是 | 是 | 是 |
是否需要机械破碎 | 否 | 否,对于革兰氏阳性菌可添加酶以提高得率 | 否,对于革兰氏阳性菌可添加酶以提高得率 | 否,对于革兰氏阳性菌可添加酶以提高得率 |
样品处理量 | 每 500 mL 可处理 100 g 细胞团 | 每 500 mL 可处理 125 g 细胞团 | 每 250 mL 可处理 125 g 细胞团 | 每 500 mL 可处理 125 g 细胞团 |
兼容的蛋白定量方法 | BCA 定量, Bradford 法定量 | BCA 定量, Bradford 法定量 | BCA 定量, Bradford 法定量 | BCA 定量, Bradford 法定量 |
兼容的下游应用 | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化 | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化(GST 融合蛋白除外) | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化(GST 融合蛋白除外) | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化(GST 融合蛋白除外) |
货号 | 89821(250 mL) 89822(500 mL) | 78243(165 mL) 90084(250 mL) 78248(500 mL) | 78260(250 mL) | 78266(500 mL) |
Thermo Scientific B-PER 细菌蛋白提取试剂可温和裂解大肠杆菌和其他种类的细菌细胞,并有效提取可溶性天然和重组蛋白。B-PER 试剂可用于革兰氏阴性菌,S. aureus,H. pylori, 和大肠杆菌菌株 BL21(D3)、JM109、DH5a 和 M15。该试剂也适用于某些古细菌物种和培养的昆虫细胞。提取不需要昂贵的设备或机械来进行破碎,并且能在 10 分钟内完成。B-PER 试剂从包涵体中去除可溶性蛋白,可用于纯化完整的包涵体,其可溶性较差的蛋白可通过其他方式提取。
多种不同的即用型 B-PER 试剂可满足不同的裂解需求。Thermo Scientific B-PER Complete 细菌蛋白提取试剂采用多合一配方,在裂解试剂中加入了溶菌酶和通用核酸酶,可以温和地从革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌中提取蛋白。蛋白提取物与大多数蛋白定量和常见下游应用兼容。这些总蛋白提取试剂具有高蛋白得率,通常可在 10-15 分钟内完成样品处理。
试剂名称 | Y-PER 酵母蛋白提取试剂 | Y-PER Plus 可透析酵母蛋白提取试剂 | I-PER 昆虫细胞蛋白提取试剂 |
兼容的样品类型 | 酿酒酵母、粟酒裂殖酵母和毕赤酵母 | 酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、毕赤酵母、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌 | 悬浮或贴壁培养的昆虫细胞(Sf9、Sf21) |
特点 | 不需要玻璃珠进行提取 | 完全可透析的配方 | 温和、有效的蛋白提取,无需超声处理 |
兼容的蛋白定量方法 | BCA 定量 | BCA 定量, Bradford 法定量 | BCA 定量 |
兼容的下游应用 | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化、活性分析 | SDS-PAGE、蛋白免疫印迹、蛋白纯化 | 蛋白免疫印迹、6xHis 标签蛋白纯化、蛋白定量、离子交换色谱 |
货号 | 78991(200 mL) 78990(500 mL) | 78999(500 mL) | 89802(250 mL) |
Thermo Scientific Y-PER 酵母蛋白提取试剂可穿透坚韧的酵母细胞壁,穿透细胞壁和细胞膜并提取可溶性蛋白质,而不会完全破坏整体细胞结构。传统上,酵母蛋白提取需要用玻璃珠进行机械破碎,这使得小规模提取变得困难。Y-PER 试剂为当前蛋白质组学工作流程提供更高的得率和灵活性。
根据下游应用,有两种配方可供选择。Y-PER 试剂是高盐 (>300 mM),对S. cerevisiae, S. pombe,C. albicans 有效和P. Pastoris(以及各种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌)。虽然去垢剂与各种下游应用兼容,但它不可透析,因此在不兼容的情况下无法去除。Thermo Scientific Y-PER Plus 可透析酵母蛋白提取试剂采用不含磷酸盐的低盐配方,含有可透析去垢剂,经验证可与S. cerevisiae一起使用。
Thermo Scientific I-PER 昆虫细胞蛋白提取试剂可从单层培养悬浮液中生长的感染杆状病毒的昆虫细胞(Sf9 和 Sf21 细胞)中温和提取可溶性蛋白。该试剂可保留所提取蛋白的功能,并与下游应用直接兼容,例如蛋白定量、蛋白免疫印迹和 His 标签蛋白纯化 (IMAC)。
核酸酶通常被添加到细胞裂解试剂中,以去除由细菌细胞裂解物中的 DNA 带来的样品粘稠,或从体外转录产生的 RNA 中去除 DNA 模板。溶菌酶通过分解细菌细胞壁来提高蛋白或核酸的提取效率。
试剂名称 | 用于细胞裂解的 Pierce 通用核酸酶 | DNase I 溶液 (2500 U/mL) | 微球菌核酸酶溶液 (≥100 U/µL) | 溶菌酶 |
特点 | 降解所有形式的 DNA 和 RNA | 降解单链和双链 DNA | 降解细胞裂解物中的核酸,释放染色质结合蛋白和剪切染色质,用于染色质免疫沉淀 (ChIP) 实验 | 提高蛋白或核酸提取效率的细菌细胞壁裂解酶 |
货号 | 88701(25 kU) | 90083(0.5 mL) | 88216(150 µL) | 90082 (50 mg/mL) 89833 (5 g) |
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