Pierce 细胞组分分离试剂盒-NE-PER核质分离试剂盒

赛默飞细胞组分分离试剂盒经过优化，可在 1-3 小时内从不同细胞组分（包括细胞质、细胞膜、细胞核、染色质结合和细胞骨架蛋白）中逐步分离、富集和提取蛋白质。我们的细胞器提取试剂盒采用优化配方，可高效分离细胞器并进行富集，适用于核质分离、线粒体提取、溶酶体和突触的提取。由于我们对试剂质量和配方的严格控制，这些分离细胞器的试剂与试剂盒可获取高蛋白产量并实现一致的结果。

膜蛋白分离  总蛋白细胞裂解液

细胞组分分离试剂盒和试剂

 核质分离细胞核、细胞质、细胞膜、细胞骨架、染色质结合突触蛋白
 NE-PER核质分离试剂盒亚细胞蛋白分离试剂盒（细胞或组织）Syn-PER 突触蛋白提取试剂
兼容的样品类型组织和哺乳动物细胞培养物组织和哺乳动物细胞培养物脑组织和原代神经元
样品处理时间2 小时2–3 小时<1 小时
需要机械破碎吗？是的，用于组织从组织中提取时需要从组织中提取时需要
样品处理量50 份样品，每份含 200 万个细胞（20 µL 压积）25 次提取，每次 200 mg 组织，或 50 份样本，每份含 200 万个细胞（20 µL 压积）10 g 组织或 500 份装于 35 mm 培养皿的原代神经元
蛋白定量方法兼容性BCA（胞质提取液 1:4 稀释），Bradford（胞质提取液 1:4 稀释）BCA（所有组分），Bradford（核提取液组分）BCA 定量
下游应用兼容性蛋白免疫印迹、ELISA、EMSA、报告基因分析、酶分析、胺反应标记

仅胞质提取液组分：RNA EMSA、激酶测定、RT-PCR		蛋白互作、蛋白免疫印迹、ELISA、EMSA、报告基因分析、酶分析、胺反应标记神经递质释放测定、酶分析、免疫分析、色谱、电泳
是否需要搭配使用蛋白酶或磷酸酶抑制剂？是试剂盒包含蛋白酶抑制剂是
货号78833（15 mL）
78835（75 mL）		78840（用于细胞培养物）
87790（用于组织）		87793（100 mL）

了解关于膜蛋白提取和分离的试剂盒

核蛋白提取

现在有多种方法可用于分离细胞核和制备核蛋白提取物。但大部分方法都需要机械均质化、反复冻融、冗长的离心或透析过程，这些步骤可能会破坏脆弱的核蛋白的完整性。NE-PER 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒能够逐步裂解细胞，在不到两小时的时间内获取功能性胞浆和核蛋白组分。

图 1.从不同哺乳动物细胞系中制备细胞质和细胞核的蛋白提取物。收集哺乳动物细胞，用 PBS 冲洗，并使用 NE-PER 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒进行裂解。使用Pierce 660nm 蛋白定量试剂（货号 22660 ）测定蛋白浓度。图中数值是两个单独分离的平均值。
图 2.使用 NE-PER 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂可最大限度地减少细胞组分之间的交叉污染。获取的细胞核和胞浆组分之间的交叉污染极低。使用 Thermo Scientific NE-PER 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂或其他供应商的核蛋白提取试剂盒提取 HeLa 细胞。使用靶向常见细胞核、细胞质和膜蛋白标记物的抗体，通过蛋白免疫印迹分析细胞核和胞浆组分。使用 NE-PER 试剂盒获取的细胞核组分几乎不含胞浆或膜蛋白。

亚细胞结构分离

通过亚细胞的定位分离蛋白是在维持生物学背景的同时富集蛋白的方法之一。差异去垢剂分离是一种经典的生化技术，通过使用不同去垢剂顺序溶解细胞区室来分离蛋白质。Thermo Scientific 亚细胞蛋白分离试剂盒提供了一种试剂组合，用于将细胞逐步裂解为具有功能的细胞质、细胞膜、可溶性核蛋白、染色质结合和细胞骨架蛋白组分。

图 3.亚细胞分离过程的示意图。 通过将细胞与胞质提取缓冲液 (CEB)、膜提取缓冲液 (MEB) 和核提取缓冲液 (NEB) 一起孵育，依次从细胞区室提取。在核提取缓冲液中添加微球菌核酸酶 (MNase) 可从细胞沉淀中提取染色质结合的蛋白质，然后再添加沉淀提取缓冲液 (PEB) 以溶解细胞骨架蛋白。

细胞器分离试剂盒

 线粒体溶酶体突触体
 用于培养细胞的线粒体提取试剂盒用于组织和培养细胞的溶酶体富集试剂盒Syn-PER突触蛋白提取试剂
 用于培养细胞的线粒体提取试剂盒用于组织和培养细胞的溶酶体富集试剂盒Syn-PER 突触蛋白提取试剂
兼容的样品类型哺乳动物细胞培养物组织和细胞培养物组织或原代神经元培养物
样品处理时间40 分钟2 小时<1 小时
需要机械破碎吗？可选需要：Dounce、超声或 polytron 组织撕裂器需要：Dounce
样品处理量50 份样本，每份含 2000 万个哺乳动物细胞培养物25 份样品，每份含 50–200 mg 细胞或组织每 100 mL 可处理 10 g 神经元组织或原代神经元培养物
蛋白定量方法兼容性BCA, 去垢剂兼容型 BradfordBradfordBCA
下游应用兼容性蛋白免疫印迹、ELISA、胺反应性标记、细胞凋亡、信号转导和代谢研究蛋白免疫印迹、2D/MS、电镜、疾病分析、基因表达、信号转导和相互作用或定位研究蛋白免疫印迹、酶活性测定、蛋白-蛋白互作、免疫沉淀、神经递质释放研究
是否需要搭配使用蛋白酶或磷酸酶抑制剂？是的，两者都需另配是的，需要不含 EDTA 的抑制剂是的，需要不含 EDTA 的抑制剂
货号898748983987793

在富集关键亚细胞组分的同时保留活性

使用赛默飞线粒体提取试剂盒进行分离后，线粒体完整性得以保留，通过蛋白质印迹分析中分离部分细胞色素C和VDAC

图 4.从细胞培养物中提取线粒体的完整性。使用基于试剂的方法（A 和 B）或 Dounce 均质化（C 和 D），使用 Thermo Scientific线粒体提取试剂盒提取 C6 细胞。通过蛋白免疫印迹分析线粒体 (M) 和细胞溶质 (C) 部分的细胞色素 C (A 和 C) 或电压依赖性阴离子通道 (VDAC) (B 和 D)。Thermo Scientific SuperSignal West Pico PLUS 化学发光底物（货号 34580) 用于检测。结果表明所提取的线粒体保持完整。

图 5.与使用自制试剂相比，使用 Thermo Scientific Syn-PER 试剂制备的样品中突触蛋白的富集程度更高。通过蛋白免疫印迹分析来自小鼠脑组织匀浆 (H)、胞质 (C) 部分和突触体 (Syn) 悬浮液的总蛋白 (10 µg)。与常规自制试剂相比，使用 Syn-PER 试剂从新鲜小鼠脑组织 (200 mg) 获取的突触体悬浮液中的总蛋白产量可高出三倍。
细胞组分分离试剂盒

细胞组分分离试剂盒和试剂

 核质分离细胞核、细胞质、细胞膜、细胞骨架、染色质结合突触蛋白
 NE-PER核质分离试剂盒亚细胞蛋白分离试剂盒（细胞或组织）Syn-PER 突触蛋白提取试剂
兼容的样品类型组织和哺乳动物细胞培养物组织和哺乳动物细胞培养物脑组织和原代神经元
样品处理时间2 小时2–3 小时<1 小时
需要机械破碎吗？是的，用于组织从组织中提取时需要从组织中提取时需要
样品处理量50 份样品，每份含 200 万个细胞（20 µL 压积）25 次提取，每次 200 mg 组织，或 50 份样本，每份含 200 万个细胞（20 µL 压积）10 g 组织或 500 份装于 35 mm 培养皿的原代神经元
蛋白定量方法兼容性BCA（胞质提取液 1:4 稀释），Bradford（胞质提取液 1:4 稀释）BCA（所有组分），Bradford（核提取液组分）BCA 定量
下游应用兼容性蛋白免疫印迹、ELISA、EMSA、报告基因分析、酶分析、胺反应标记

仅胞质提取液组分：RNA EMSA、激酶测定、RT-PCR		蛋白互作、蛋白免疫印迹、ELISA、EMSA、报告基因分析、酶分析、胺反应标记神经递质释放测定、酶分析、免疫分析、色谱、电泳
是否需要搭配使用蛋白酶或磷酸酶抑制剂？是试剂盒包含蛋白酶抑制剂是
货号78833（15 mL）
78835（75 mL）		78840（用于细胞培养物）
87790（用于组织）		87793（100 mL）

了解关于膜蛋白提取和分离的试剂盒

核蛋白提取

现在有多种方法可用于分离细胞核和制备核蛋白提取物。但大部分方法都需要机械均质化、反复冻融、冗长的离心或透析过程，这些步骤可能会破坏脆弱的核蛋白的完整性。NE-PER 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒能够逐步裂解细胞，在不到两小时的时间内获取功能性胞浆和核蛋白组分。

图 1.从不同哺乳动物细胞系中制备细胞质和细胞核的蛋白提取物。收集哺乳动物细胞，用 PBS 冲洗，并使用 NE-PER 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒进行裂解。使用Pierce 660nm 蛋白定量试剂（货号 22660 ）测定蛋白浓度。图中数值是两个单独分离的平均值。
图 2.使用 NE-PER 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂可最大限度地减少细胞组分之间的交叉污染。获取的细胞核和胞浆组分之间的交叉污染极低。使用 Thermo Scientific NE-PER 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂或其他供应商的核蛋白提取试剂盒提取 HeLa 细胞。使用靶向常见细胞核、细胞质和膜蛋白标记物的抗体，通过蛋白免疫印迹分析细胞核和胞浆组分。使用 NE-PER 试剂盒获取的细胞核组分几乎不含胞浆或膜蛋白。

亚细胞结构分离

通过亚细胞的定位分离蛋白是在维持生物学背景的同时富集蛋白的方法之一。差异去垢剂分离是一种经典的生化技术，通过使用不同去垢剂顺序溶解细胞区室来分离蛋白质。Thermo Scientific 亚细胞蛋白分离试剂盒提供了一种试剂组合，用于将细胞逐步裂解为具有功能的细胞质、细胞膜、可溶性核蛋白、染色质结合和细胞骨架蛋白组分。

图 3.亚细胞分离过程的示意图。 通过将细胞与胞质提取缓冲液 (CEB)、膜提取缓冲液 (MEB) 和核提取缓冲液 (NEB) 一起孵育，依次从细胞区室提取。在核提取缓冲液中添加微球菌核酸酶 (MNase) 可从细胞沉淀中提取染色质结合的蛋白质，然后再添加沉淀提取缓冲液 (PEB) 以溶解细胞骨架蛋白。

分离细胞器

细胞器分离试剂盒

 线粒体溶酶体突触体
 用于培养细胞的线粒体提取试剂盒用于组织和培养细胞的溶酶体富集试剂盒Syn-PER突触蛋白提取试剂
 用于培养细胞的线粒体提取试剂盒用于组织和培养细胞的溶酶体富集试剂盒Syn-PER 突触蛋白提取试剂
兼容的样品类型哺乳动物细胞培养物组织和细胞培养物组织或原代神经元培养物
样品处理时间40 分钟2 小时<1 小时
需要机械破碎吗？可选需要：Dounce、超声或 polytron 组织撕裂器需要：Dounce
样品处理量50 份样本，每份含 2000 万个哺乳动物细胞培养物25 份样品，每份含 50–200 mg 细胞或组织每 100 mL 可处理 10 g 神经元组织或原代神经元培养物
蛋白定量方法兼容性BCA, 去垢剂兼容型 BradfordBradfordBCA
下游应用兼容性蛋白免疫印迹、ELISA、胺反应性标记、细胞凋亡、信号转导和代谢研究蛋白免疫印迹、2D/MS、电镜、疾病分析、基因表达、信号转导和相互作用或定位研究蛋白免疫印迹、酶活性测定、蛋白-蛋白互作、免疫沉淀、神经递质释放研究
是否需要搭配使用蛋白酶或磷酸酶抑制剂？是的，两者都需另配是的，需要不含 EDTA 的抑制剂是的，需要不含 EDTA 的抑制剂
货号898748983987793

在富集关键亚细胞组分的同时保留活性

使用赛默飞线粒体提取试剂盒进行分离后，线粒体完整性得以保留，通过蛋白质印迹分析中分离部分细胞色素C和VDAC

图 4.从细胞培养物中提取线粒体的完整性。使用基于试剂的方法（A 和 B）或 Dounce 均质化（C 和 D），使用 Thermo Scientific线粒体提取试剂盒提取 C6 细胞。通过蛋白免疫印迹分析线粒体 (M) 和细胞溶质 (C) 部分的细胞色素 C (A 和 C) 或电压依赖性阴离子通道 (VDAC) (B 和 D)。Thermo Scientific SuperSignal West Pico PLUS 化学发光底物（货号 34580) 用于检测。结果表明所提取的线粒体保持完整。

图 5.与使用自制试剂相比，使用 Thermo Scientific Syn-PER 试剂制备的样品中突触蛋白的富集程度更高。通过蛋白免疫印迹分析来自小鼠脑组织匀浆 (H)、胞质 (C) 部分和突触体 (Syn) 悬浮液的总蛋白 (10 µg)。与常规自制试剂相比，使用 Syn-PER 试剂从新鲜小鼠脑组织 (200 mg) 获取的突触体悬浮液中的总蛋白产量可高出三倍。
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