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二乙氨基乙基 (DEAE)-葡聚糖是葡聚糖这种碳水化合物聚合物的聚阳离子衍生物,是首批用于将核酸转移到培养的哺乳动物细胞中的化学试剂之一(Vaheri 和 Pagano,1965)。阳离子 DEAE-葡聚糖分子与核酸带负电荷的主链紧密结合,所得核酸-DEAE-葡聚糖复合物因具有净正电荷而粘附在细胞膜上,并通过内吞作用或 DMSO 或甘油诱导的渗透压休克进入细胞质。
DEAE-葡聚糖法的优点是相对简单、可重现且成本低廉。缺点包括细胞毒性和对一系列细胞类型的转染效率低(在原代细胞中通常低于 10%),以及在转染过程中需要减血清培养基。此外,该方法限于瞬时转染,不适合生成稳定的细胞系。
将核酸与 DEAE-葡聚糖溶液混合到转染培养基或磷酸盐缓冲盐水溶液中。通过聚合物与核酸的磷酸主链之间的静电相互作用形成核酸-DEAE-葡聚糖复合物。
将核酸-DEAE-葡聚糖复合物加入细胞中,通过静电相互作用粘附在细胞表面。
使用 DMSO 或甘油通过渗透压休克诱导核酸-DEAE-葡聚糖复合物摄取。
洗涤细胞以除去复合物,然后孵育细胞以实现基因表达。
检测细胞的瞬时基因表达。
将核酸与 DEAE-葡聚糖溶液混合到转染培养基或磷酸盐缓冲盐水溶液中。通过聚合物与核酸的磷酸主链之间的静电相互作用形成核酸-DEAE-葡聚糖复合物。
将核酸-DEAE-葡聚糖复合物加入细胞中,通过静电相互作用粘附在细胞表面。
使用 DMSO 或甘油通过渗透压休克诱导核酸-DEAE-葡聚糖复合物摄取。
洗涤细胞以除去复合物,然后孵育细胞以实现基因表达。
检测细胞的瞬时基因表达。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。