出生后原代海马和皮层神经元的分离和消化

组织分离

1. 从脑部快速切除海马，4°C 下放入直径 35 mm 培养皿中的 2 mL HIBERNATE A 中，该培养基添加了 B27（货号17504）和 0.5 mM L-谷氨酰胺（货号25030）。
2. 将同一培养基中的脑膜和多余白质移至另一 4°C 培养皿中。
3. 将海马转移到 MacIlwain 组织切片机的冷却载物台上用相同培养基预湿润的无菌纸张上。
4. 制作与海马长轴垂直的 0.5 mm 厚切片，并转移到含相同培养基的 4°C 试管中。
5. 在 30°C 下摇动8分钟后，使用广口移液器将切片转移到另一含木瓜蛋白酶的 30°C 试管中。

组织消化

1. 木瓜蛋白酶（Worthington 3119，15-23 U/mg 蛋白且未经半胱氨酸活化）溶液的制备方法如下：将 12 mg 木瓜蛋白酶溶解于 6 mL HIBERNATE-A 中，在 37°C 下温热5分钟，然后进行过滤灭菌。木瓜蛋白酶溶液应在3小时内使用。
2. 将切片置于 30°C 水浴中孵育30分钟，平台转速应足以悬浮切片（例如170 rpm）。
3. 在 30°C 下将切片转移至含有 2 mL HIBERNATE-A/B27 的 15 mL 试管中，并在室温下静置5分钟。
4. 使用火焰抛光吸头开口直径为 0.7-0.9 mm 的硅化9英寸巴斯德吸管研磨切片10次（在约30秒内完成）。
5. 待碎片沉淀2分钟，将上清液转移到另一试管中。
6. 将第一支试管内的沉淀物重悬于 2 mL HIBERNATE-A/B27 中