必要な基礎的な知識

哺乳類細胞用キット

キット名 プラットフォーム* 蛍光染料 Ex (励起波長)/Em (蛍光放射波長) (nm) Em 色 SKU
LIVE/DEAD® Viability/Cytotoxicity Kit *for mammalian cells*FC、FM、Mカルセイン AM エチジウムホモダイン-1494/517
517/617
緑色(生細胞)
赤色(死細胞)
L3224
LIVE/DEAD® Viability/Cytotoxicity Kit *for mammalian cells*2000 assays*FC、FM、MDiOC18(3)
propidium iodide
484/501
536/617
緑色(生細胞)
赤色(死細胞)
L7010
LIVE/DEAD® Sperm Viability Kit *200-1000 assays*FC、FMSYBR® 14 dye
propidium iodide
485/517
536/617
緑色(生細胞)
赤色(死細胞)
L7011
LIVE/DEAD® Cell Vitality Assay Kit *C12-resazurin/SYTOX® Green* *1000 assays*FC、FM、MSYTOX® Green dye
C12-resazurin
488/530
488/575
Green (Dead)
Red (Live)
L34951
*FC=フローサイトメトリー、FM=蛍光顕微鏡、M=マイクロプレートアッセイ
  • LIVE/DEAD® Viability/Cytotoxicity Kit—Membrane-permeant calcein AM is cleaved by esterases in live cells to yield cytoplasmic green fluorescence, and membrane-impermeant ethidium homodimer-1 labels nucleic acids of membrane-compromised cells with red fluorescence.

  • LIVE/DEAD® Cell-Mediated Cytotoxicity Kit—緑色蛍光膜色素DiOC18(3)で先に染色後、赤色蛍光膜非透過性色素であるPropidium Iodideと混合して染色します。 対象の生細胞および死細胞は緑色蛍光膜染色を保持し、易感染膜のある対象細胞およびエフェクター細胞は赤職蛍光核酸染色を現し、生存エフェクター細胞は非蛍光です。

  •  LIVE/DEAD® Sperm Viability Kit—膜透過性のSYBR® 14核酸標識試薬は、精子生細胞を緑色蛍光で標識します。一方、膜非透過性のPropidium Iodideは、膜が損傷した精子細胞の核酸を赤色蛍光で標識します。

  •  LIVE/DEAD® Cell Vitality Assay Kit—The assay is based on the reduction of C12-resazurin to red-fluorescent C12-resorufin in metabolically active cells and on the uptake of the cell-impermeant, green-fluorescent nucleic acid stain, SYTOX® Green dye, in cells with compromised plasma membranes (usually late apoptotic and necrotic cells). In this assay, dead cells emit mostly green fluorescence and healthy, metabolically active cells emit mostly red fluorescence; injured cells exhibit reduced red and green fluorescence.

LIVE/DEAD® Cell Viability/Cytotoxicity Assay Kit (L3224)
. ウシ肺動脈上皮細胞の生細胞およびエタノール殺傷した細胞を、弊社のLIVE/DEAD® Cell Viability/Cytotoxicity Assay Kitに含まれる試薬で染色しました。生細胞は、明るい緑色蛍光を発色し、膜が損傷した死細胞は、赤橙色蛍光で染色されます。


LIVE/DEAD® Sperm Viability Kit (L7011)
。 膜が損傷していない精子生細胞は、弊社独自の細胞膜透過性核酸色素であるSYBR® 14によって緑色蛍光で染色されます。 保護されていない凍結割れ目によって死滅した死滅精子は、ヨウ化プロピジウム (P1304MPP3566P21493) .および蛍光赤-オレンジでラべリングします。 このイメージは、ネバダ大学リノ校、獣医学部のDuane L. Garner氏および米国農務省農業研究センターのLawrence A. Johnson氏のご厚意によるものです。





LIVE/DEAD Cell Vitality Kit (L34951)。 Jurkat 細胞(T-細胞白血病、ヒト)は、10 μM カンプトセシンで、 4 時間、37℃、 5% CO2で、誘起しました 細胞は、LIVE/DEAD Cell Vitality Assay Kitに含まれる試薬で染色し、フローサイトメトリーで解析しました。 SYTOX Green 蛍光とレゾルフィン蛍光のドットプロットは、生細胞群、損傷細胞群および死細胞群の分離を示しています。

バクテリア用キット

キット名 包装
サイズ
プラットフォーム* 蛍光染料 Ex (励起波長)/Em (蛍光放射波長) (nm) Em 色 SKU
LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kit染色は、混合の 2 成分形成で供給されます。FC、FM、MSYTO® 9色素
propidium iodide
485/530
485/630
緑色(生細胞)
赤色(死細胞)
L7007
LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kit染色は、個別溶液の形で提供されます。FC、FM、MSYTO® 9色素
propidium iodide
485/530
485/630
緑色(生細胞)
赤色(死細胞)
L7012
LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kit個別の色素は乾燥していて、ペアのポリエチレン注入器に浸透します。FC、FM、MSYTO® 9色素
propidium iodide
485/530
485/630
緑色(生細胞)
赤色(死細胞)
L13152
LIVE/DEAD® BacLight Bacterial Viability and Counting Kitミクロスフィア標準も含まれています。FCSYTO® 9色素
propidium iodide
485/530
485/630
緑色(生細胞)
赤色(死細胞)
L34856
*FC=フローサイトメトリー、FM=蛍光顕微鏡、M=マイクロプレートアッセイ
  • LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kit—膜透過性SYTO® 9は、生存バクテリアを緑色蛍光で標識し、膜非透過性のpropidium iodideは、膜が損傷したバクテリアを赤色蛍光で標識します。

  • LIVE/DEAD® BacLight Bacterial Viability and Counting Kit—膜透過性 のSYTO® 9は、生存バクテリアを緑色蛍光で標識し、膜非透過性のpropidium iodideは膜が損傷したバクテリアを赤色蛍光で標識します。 ポリスチレンミクロスフィアの較正浮遊液は、分析した懸汚液の量の標準になり、蛍光対サイドスキャターのあるサイトグラム内で染色バクテリアとは明確に区別できます。

弊社のLIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kit
L7007L7012L13152)を使用して、化膿性連鎖球菌の鎖に沿って、生存バクテリアおよび死滅バクテリアを識別します。 この画像は、Omega Opticalのトリプルバンドパスフィルターセットを通した、単回露出により撮影したものです。


LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability and Counting Kitを使用した、バクテリア培養液の解析
黄色ブドウ球菌(パネルAおよびC)および大腸菌(パネルBおよびD)の生存バクテリア(未処理)および死滅バクテリア(アルコール処理)の懸濁液を、キットプロトコールに従って、染色しフローサイトメトリーで解析しました。 緑または赤蛍光対スライドスキャターサイトグラム(パネル A と B)を使って、バクテリア母集団およびビーズ母集団を開閉しました(それぞれ左および右ボックス)。 各サイトグラムのバクテリア部位の事象は、赤蛍光対緑蛍光サイトグラム(パネルCとD)で表示もされます。 生存および死滅バクテリア/mL は、どちらが、生存および死滅母集団がもっとも分離を示すかによって異なりますが、蛍光対サイドスキャターサイトグラムまたは緑蛍光対赤蛍光サイトグラムから計算できます。 これらのサイトグラムの生存および死滅母集団の位置は、細胞タイプおよびグラム特性によっても異なることがあります。 サンプルによっては、予め定めた範囲外にイベントが認められる可能性がありますので、適宜評価を行うことが必要です(例:パネルD参照)。

酵母および菌類用キット

キット名 プラットフォーム* 蛍光染料 Ex/Em Em 色 SKU
LIVE/DEAD® Yeast Viability KitFM、MFUN 1
Calcofluor White M2R

488/530(全細胞)
488/560-610(生細胞)

365/440

緑色(全細胞)
赤-橙色(生細胞)
青色(全細胞)

L7009
LIVE/DEAD® FungaLight™ Yeast Viability KitFCSYTO® 9色素
propidium iodide
485/530
485/630
緑色(生細胞)
赤色(死細胞)
L34952
*FC=フローサイトメトリー、FM=蛍光顕微鏡、M=マイクロプレートアッセイ
  • LIVE/DEAD® Yeast Viability Kit—細胞内で黄色~緑色を示すFUN-1の蛍光を、赤色~橙色蛍光の液胞内構造へ変換させるためには、原形質膜の完全性および真菌の代謝機能が必要です。Calcofluor White M2Rは代謝の状態に関係なく、細胞壁キチンを青色蛍光で標識します。

  • LIVE/DEAD® FungaLight™ Yeast Viability Kit— SYTO® 9核酸色素は通常、細胞膜損傷の有無にかかわらず、細胞群内のすべての酵母を標識します。 それとは対照的に、propidium iodideは細胞膜が損傷した酵母のみ透過し、両方の色素が存在する場合には、蛍光共鳴エネルギーの移行(FRET)により、SYTO® 9色素蛍光の減少を引き起こします。 その結果、無傷細胞膜の酵母は緑色蛍光に染色され、損傷膜のある細胞の酵母は赤色蛍光に染色されます。



LIVE/DEAD® Yeast Viability Kit (L7009)。 FUN® 1 cell stainによって染色されたサッカロマイセスセルビシエは、赤色蛍光の細胞内構造を生成し、Calcofluor White M2Rの使用では、青色蛍光細胞壁染色が見られます。 いずれのプローブも、弊社のLIVE/DEAD® Yeast Viability Kit (L7009)に含まれています。 FUN® 1 cell stainも別売りでご用意しています(F7030)。


サッカロミセス 菌種の細胞懸濁液をSYTO® 9色素およびpropidium iodideで染色し、BD FACSCalibur™ のフローサイトメトリーシステム(Becton Dickinson株式会社)を用いて解析しました。パネルAは、プロトコルに従い、洗浄後、SYTO® 9色素およびpropidium iodideで染色した未処理サッカロミセス培養液の、前方散乱と側方散乱に関するドットプロットを示しています。 領域R1には、酵母細胞に適したサイズの粒子が含まれており、前方散乱光トリガは残屑を排除するように設定されています。 パネルBは、生細胞および熱処理した死細胞の混合物を含む酵母サンプルの解析から得られたR1ゲートの染色パターンを示します。

LIVE/DEAD® Fixable Stains for Flow Cytometry

キット名 プラットフォーム* Em (nm) レーザー
互換性(nm)
SKU
LIVE/DEAD® Fixable Blue Dead Cell Stain Kitフローサイトメトリー450UVL23105
LIVE/DEAD® Fixable Violet Dead Cell Stain Kitフローサイトメトリー451405L34955
LIVE/DEAD® Fixable Aqua Dead Cell Stain Kitフローサイトメトリー525405L34957
LIVE/DEAD® Fixable Yellow Dead Cell Stain Kit フローサイトメトリー575
405
L34959
LIVE/DEAD® Fixable Green Dead Cell Stain Kitフローサイトメトリー520488L23101
LIVE/DEAD® Fixable Red Dead Cell Stain Kitフローサイトメトリー615488L23102
LIVE/DEAD® Fixable Far Red Dead Cell Stain Kitフローサイトメトリー665633あるいは 635 L10120
LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kitフローサイトメトリー775633あるいは 635 L10119
LIVE/DEAD® Fixable Dead Cell Stain Sampler Kitフローサイトメトリー様々
様々
L34960
  • LIVE/DEAD® Fixable Dead Cell Stain Kit—生細胞は、反応性蛍光色素と細胞表面のみで反応し、弱い蛍光を発する細胞となります 損傷膜を持つ細胞は全体的に色素と反応し、細胞は明るく染色されます。 二次固定により、染色パターンに歪みを引き起こさずに、病原菌を活性化します。

LIVE/DEAD® Fixable Dead Cell Stain Kitについてもっと詳しく知る。