Phusion Plus DNAポリメラーゼ

Phusion Plus DNAポリメラーゼを使用する場合、その独自のバッファー組成により、アニーリング温度を決定するためにプライマーの融解温度（T_m）を計算する必要がありません。計算したプライマーT_mに関係なく、すべてのターゲットを60℃のユニバーサルアニーリング温度で増幅できます。またこの酵素は、オリジナルのPhusionプロトコルに従って計算したアニーリング温度でも機能します。

図2.2つのアニーリング条件でのPCRサイクリング。計算したアニーリング温度（各レーンの上に表示）が異なる12のターゲットを、 60 ngのヒトゲノムDNA（gDNA）からユニバーサルアニーリング温度60℃（左）、またはT_m calculatorで計算したアニーリング温度（右）で増幅しました。分子量マーカーとしてThermo Scientific ZipRuler Express DNA Ladder 2を使用しました。

Phusion Plus DNAポリメラーゼのユニバーサルアニーリング性能は、ユニバーサルなサイクリングプロトコルも可能にするため、複数のPCRランを回避し、時間を節約するのに役立ちます。鎖長が異なるターゲットに対して、1つのアニーリング温度（60℃）と、最長のアンプリコンに基づいた1つの伸長時間を使用—つまり、同じブロック上で異なるターゲットを同時サイクリング—でき、PCRの収量や特異性を損なうことはありません。　　　　

図3.Phusion Plus DNAポリメラーゼを使用して、異なるPCRターゲットを同時サイクル可能。ヒトgDNAから長さの異なる5つのターゲットを次の2つの条件で増幅しました；（左）すべてのターゲット（最長は7.5 kb）に対してユニバーサルサイクリングプロトコルを用い、最長アンプリコンの伸長時間（7.5kbで3分45秒）を使用、または（右）ターゲットごとに計算した異なる伸長時間（0.3 kbには9秒、0.7 kbには21秒、2 kbには60秒、3.9 kbには2分、7.5 kbには3分45秒）による別々のサイクリングプロトコルを使用。分子量マーカーとしてZipRuler Express DNA Ladder 2を使用しました。

Phusion Plus DNAポリメラーゼの結合体分子仲介ホットスタート修飾が反応セットアップ中の酵素活性とプライマーの分解を防止するため、PCR特異性と収率が向上します。

Phusion Plus DNAポリメラーゼは、その厳密なホットスタート修飾により、室温で最大24時間安定した反応を実現し、ロボットまたはリキッドハンドリングシステムによるハイスループットPCRを可能にします。

Phusion Plus DNAポリメラーゼは、わずか0.08 ngのヒトゲノムgDNAからターゲットを検出できます。

Phusion Plus DNAポリメラーゼは、その融合タンパク質技術とバッファー組成の変更を組み合わせることにより、PCRにおいて、植物（キシランなど）、土壌（フミン酸など）、および血液（ヘミンなど）の阻害物質に対するより高い耐性を発揮します。

Phusion Plus DNAポリメラーゼはPhusion GC Enhancerが添付しているため、GC含量が>65%の配列をより効率的に増幅します。

図8.効率的なGCリッチ配列増幅が可能なPhusion Plus DNAポリメラーゼ。さまざまなDNAポリメラーゼをGCリッチPCRに対するメーカーの推奨事項に従って使用し、50 ngのヒトgDNAからGC含量（その%を図に表示）が多い5つのターゲット（0.78 kb、0.74 kb、0.72 kb、0.66 kb、および0.55 kb）を増幅しました。分子量マーカーとしてZipRuler Express Ladder DNA 2を使用しました。

Phusion Plus DNAポリメラーゼの高い処理能力は、長鎖DNA断片—ヒトgDNAから最長10 kb、およびラムダDNAから最長20 kb—の増幅を可能にします。15～30秒／kbという高速な伸長速度により、サイクリング時間が大幅に短縮します。

図9.Phusion Plus DNAポリメラーゼの増幅範囲。Phusion Plus DNAポリメラーゼを使用して、2つテンプレート量から18 kbのヒトgDNAターゲット（左）と9.1 kbのラムダDNAターゲット（右）を確実に増幅できました。分子量マーカーとしてGeneRuler 1 kb Plus DNA Ladderを使用しました。