制限酵素消化と DNA 修飾

制限酵素（RE）は、特異的な 4 ～ 8 塩基対の反転反復認識配列の部位で二本鎖 DNA を切断することで機能します。DNA 開裂の産物は平滑端末であるか、5′ または 3′ オーバーハングを含みます。 

• Thermo Scientific 従来型酵素

リガーゼ

制限消化によって生成された末端のタイプに関わらず、DNA の開裂により、末端に 3′ 水酸基および 5′ リン酸基を持つフラグメントを生成します。DNA リガーゼは ATP 依存した反応により二重鎖 DNA (あるいは RNA) の 5′ リン酸基と 3′ 水酸基を共有結合的に結合します。

• Anza T4 DNA リガーゼマスターミックス
• T4 DNA リガーゼ

アルカリホスファターゼは DNA や RNA から 3′ および 5′ リン酸を加水分解します。これは、末端を標識する前に 5′ リン酸基を除去したり、インサートのライゲーションの前にベクターを脱リン酸化するのに適しています。これはまたタンパク質の脱リン酸化にも使用できます。

• Anza Alkaline Phosphatase

末端修復により、5′ または 3′ のオーバーハングを持つ DNA が 5′ リン酸化平滑端末 DNA に転換され、平滑端末クローニングベクターへの効率的なライゲーションを可能にします。

• Anza DNA End Repair Kit
  

ポリヌクレオチドキナーゼは、DNA やオリゴヌクレオチドの 5’ リン酸化に使用されます。クローニングのライゲーションステップで使用する DNA を調製する際、インサート DNA またはベクター DNA は 5’ 末端がリン酸化されている必要があります。PCR で増幅された DNA は通常 T4 PNK で処理され、それに続くクローニングライゲーション用に 5’ 末端をリン酸化します。

• Anza T4 PNK Kit

DNA 平滑化キットは、接着末端を持つ DNA が平滑末端を持つ DNA に転換するのを可能にし、平滑末端のライゲーション反応に使用できるようにします。これは、目的のベクターが平滑末端を生成する認識サイトを含まない場合に有用です。

• Anza DNA Blunt End Kit

ポリメラーゼは平滑端末の生成や標識 DNA の取り込みに使用されます。

• DNA ポリメラーゼ
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