GeneArt Gibson Assembly Cloning

GeneArt Gibson Assembly Cloning を使用して DNA 断片を容易に配置することにより、非常に大きな配列を生成

Gibson Assembly Cloning は、科学界で広く採用されているエレガントで堅牢なシームレス、またはエラーの少ないクローニング手法であり、長さや末端互換性に関係なく、非常に効率的、シームレスな手法で複数の DNA 断片のアセンブリを実現します。

GeneArt DNA Strings 断片または GeneArt Gene Synthesis と組み合わせた場合、GeneArt Gibson Assembly は、非常に大きく様々なことが要求されるコンストラクトを構築するための最適な選択肢です。

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製品のハイライト

エレガント – 15 DNA 断片で完全なシームレスクローンが構築できる相同重複デザイン
効率的 – 最大>95％のクローニング効率により、時間とリソースが節約され研究が加速
多くの実績 – Gibson Assembly 法は、同じ分野の専門家がレビューした数千の公表文献で引用
高い汎用性 – ゲノム全体の de novo 構築に使用可能
フレキシブル – GeneArt Gibson Assembly キットは、コンピテントセルまたはマスターミックスフォーマットを完備し、最大限の柔軟性を実現

アプリケーション

クローニングおよびショットガンクローニング
タンパク質発現
部位特異的変異導入
小さいゲノムアセンブリ¹

GeneArt Gibson Assembly Cloning 技術の利点

GeneArt Gibson assembly EX キットは、複数のインサートをアセンブリするのに最適です。

GeneArt Gibson Assembly EX Cloning キットは、より多くのインサートを使用した場合に高い形質転換効率オプションを提供

図 1.GeneArt Gibson Assembly EX Cloning キットでは、より多くのインサートを使用する場合に高い形質転換効率オプションが提供されます。Invitrogen TOP10 Competent Cells 内で形質転換された pcDNA 3.4 における 0.5 kb の 6、8 および 10 断片のアセンブリ。

GeneArt Gibson Assembly HiFi キットを使用すれば、非常にコスト効率の良い効率的な方法でより少ない断片からアセンブリできます。より大きなアセンブリには、GeneArt Gibson EX Master Mixes and Kits が利用できます。

GeneArt Gibson Assembly HiFi キットを使用すれば、単一のインサートから複数のインサートデザインまでを用いて高いクローニング効率が実現

図 2.GeneArt Gibson Assembly HiFi キットを使用すれば、単一のインサートから複数のインサートデザインまでを用いて高いクローニング効率が得られます。TOP10 コンピテントセルを使用した pCDNA 3.4 における 1、2 および 4 ～ 1 kb 断片のアセンブリ。GeneArt Gibson Assembly HiFi キットは、特に GeneArt Strings DNA Fragments または 100%シーケンス、GeneArt Gene Synthesis と併用した場合、大規模なコンストラクトを構築するための最も費用対効果の高い方法であり、時間を節約できます。

GeneArt Gibson Assembly HiFi および EX 技術は、どちらもマスターミックスフォーマット、完全なキットに利用可能で、ケミカリーコンピテントセルおよびエレクトロコンピテントセルを選択して利用でき、両方とも高い形質転換効率が得られます。

図 3.GeneArt Gibson Assembly EX Cloning キットでは、高いクローニング効率のための高い形質転換効率オプションが提供されます。Invitrogen TOP10 ケミカリーコンピテントセルおよび ElectroMAX DH10B エレクトロコンピテントセルを使用した pUC19L における 2 kb の 5 インサートのアセンブリ。

大規模アセンブリのための構築

GeneArt Gibson assembly EX キットは、複数のインサートをアセンブリするのに最適です。

非常に効率的

フレキシブル

どの GeneArt Gibson Assembly Technology を選択すればよいですか？

	GeneArt Gibson Assembly HiFi Master Mix and Kits	GeneArt Gibson Assembly EX Master Mix and Kits
プロトコルにおけるステップ数	単一チューブ、1 ステップ	単一チューブ、2 ステップ
クローニング効率	最大 95％まで	最大 95％まで
断片サイズ	500 bp ～ 32 kb	100 bp ～ 100 kb
反応時間	15 分～	80 分
断片数	最大 6 まで	最大 15 まで
フォーマット	Master Mix、ケミカリーコンピテントセルまたはエレクトロコンピテントセル付きのフルキットとして入手可能	Master Mix、ケミカリーコンピテントセルまたはエレクトロコンピテントセル付きのフルキットとして入手可能
用途	シンプルなアセンブリ	複雑なアセンブリ、および大きい断片を使用したプロジェクト

GeneArt Gibson Assembly 技術では、相同組み換えを利用して、末端と末端の相同性を共有する隣接 DNA 断片をアセンブリします。相同断片末端領域の最適な長さは、アセンブリ反応における断片の数および長さに左右されます。以下の表に、末端と末端の相同性の推奨される長さを示します。

断片数	断片サイズ	重複領域の長さ
1 ～2	≤ 8 kb	20～ 40 bp
1 ～2	8～ 32 kb	25～ 40 bp
3～ 5	≤ 8 kb	40 bp
3～ 5	8～ 32 kb	40～ 100 bp
6+	100 bp ～ 100 kb	50 ～ 100bp

DNA を生成するためのオプション

PCR 増幅	GeneArt Strings および High Q Strings DNA 断片	GeneArt 遺伝子合成
ベクター相同性を有する PCR 断片を生成するか、PCR 断片を用意して、Gibson Assembly のプライマーステッチングを用います。Platinum SuperFi II のようなポリメラーゼを使用すると、比類ないフィデリティが得られます。 PCR 製品に関する詳細情報を入手する	GeneArt Strings DNA Fragments は、オーダーメイド、直線状の二本鎖線状 DNA 断片であり、Invitrogen GeneArt Gene Synthesis 用に開発されたものと同一の高品質工程を用いて合成オリゴヌクレオチドからアセンブルされています。シーケンスの正確さをさらに高めるために、GeneArt High-Q Strings は市場をリードする正確さをもたらし、そのエラー率は 10,000 bp あたり 1 未満です。注文する	GeneArt Gene Synthesis クローンは、100％シーケンス検証済みです。標準のクローニングベクター（pMX）から切り出すだけで、エラーのないアセンブリをすぐに開始できます。また、superSPEED 遺伝子合成サービスを利用すれば、エラーのない断片をいっそう迅速に入手できます。注文する

ご注文情報

GeneArt Gibson Assembly HiFi Kits

GeneArt Gibson Assembly EX Kits

リソース

サポート

¹最大数百 kbp までの DNA 分子の酵素的アセンブリ。（Enzymatic assembly of DNA molecules up to several hundred kilobases.）Gibson et. al., Nat Methods.2009 May; 6(5):343-5

GibsonAssembly は、許可とライセンスの下で使用される SGI-DNA, Inc. の登録商標です。
NEBuilder は、New England Biolabs, Inc. の登録商標です。
In-Fusion は、Takara Bio USA, Inc. の登録商標です。

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.